Анотація 1980 Нефрологічна платформа, неділя, 5/2
Зниження виведення цитрату з сечею, що є важливою причиною каменів у нирках, відбувається при ММА або гіпокаліємії (низький К). Мікроперфузійні дослідження показали, що основною регуляцією сечового цитрату є реабсорбція проксимального канальцевого цитрату. ATP CL, цитозольний фермент, відповідальний за розщеплення цитрату до оксалоацетату та ацетил-КоА, відіграє важливу роль у розвитку гіпоцитратурії (J Clin Invest 98: 2381). CMA і низький K підвищують активність АТФ CL і білка в корі нирок. Однак конкретний сегмент трубки, де відбувається це збільшення, невідомий. Крім того, показано, що введення специфічного інгібітора АТФ CL, 4S-гідроксицитрату, підвищує цитрат. Метою цих досліджень було визначити частину нирки, відповідальну за спостережуване збільшення білка АТФ CL ниркової кірки, та вивчити вплив 4S-гідроксицитрату на активність та чисельність АТФ CL.
Самців щурів, 180-220 г, поміщали в окремі метаболічні клітини. Контрольні тварини отримували воду ad lib і годували парних загонів щурів, експериментальні тварини отримували 0,28 M NH 4 Cl води, ad lib. Через 7 днів тварин промивали при 300 торр 3% параформальдегідом і 0,05% пікриновою кислотою в 0,1 М какодилатному буфері з 10% Pentaspan® (DuPont). Зрізи нирок фіксували у 10% формаліні та розрізали на зрізи по 3 мкм. Позначення імунопероксидази проводили за допомогою набору Vectastain® ABC (Vector Laboratories, Каліфорнія). Первинне кроляче антитіло до щурів, раніше використовуване для імуноблотингу, використовували у розведенні 1: 200.
Для досліджень з використанням інгібітора АТФ CL щурам вводили звичайних щурів та NH 4 Cl воду, ad lib. Через 7 днів тваринам вводили 2 ммоль/кг/добу шляхом введення через CitrinK-Mg® (Sabinsa, New Jersey). Через 2 дні тварин забивали і перфузували, як описано вище. Одну нирку затискали та видаляли перед перфузією, щоб визначити активність АТФ CL та рівні білка, як раніше.
Результати нашої імуногістохімії показали, що білок АТФ CL знаходиться в нефроні. Однак у тварин із CMA збільшення фарбування у 3 рази відбулося лише в проксимальному сегменті канальців, особливо на краю кисті. У дослідженнях на тваринах, які отримували інгібітор АТФ ХЛ, цитрат сечі збільшувався у п’ять разів. Однак не було різниці в активності АТФ CL (у нмоль гідроксаматі/мг білка/30 хв; 132 ± 16 проти 134 ± 14) або білку АТФ CL за допомогою імуноблотингу. На закінчення, інгібування АТФ CL 4S-гідроксицитратом, яке спостерігається in vivo, не зберігається in vitro. За допомогою імуногістохімії білок АТФ CL виявляється у всьому нефроні. Збільшення проксимального канальцевого імунофарбування АТФ CL, що спостерігається у щурів CMA, надає додаткові докази важливості цього ферменту та цього канальцевого сегмента у розвитку гіпоцитратурії.