реферат

Дослідити ефекти проти ожиріння екстракту граната (PLE) на мишачій моделі ожиріння, спричиненої дієтою з високим вмістом жиру та гіперліпідемією.

дизайн:

Для експерименту проти ожиріння мишей ICR та самців мишей ICR годували дієтою з високим вмістом жиру, щоб викликати ожиріння. Коли вага групи з високим вмістом жиру була на 20% вищою, ніж ваги групи нормальної дієти, тварин обробляли 400 або 800 мг/кг/день PLE протягом 5 тижнів. Протягом експериментального періоду регулярно вимірювали масу тіла та добове споживання їжі. Через 5 тижнів обробляли різні жирові прокладки та вимірювали загальний холестерин (ТС), тригліцериди (ТГ), глюкозу та ліпопротеїни високої щільності (ЛПВЩ) після ПЛЕ. В експерименті з поглинанням жиру як нормальні, так і ожирілі миші одночасно отримували 0,5 мл ліпідної емульсії та PLE у дозі 800 мг/кг. Рівні TG в сироватці крові вимірювали через 1, 2, 3, 4 та 6 годин після лікування. ТГ у фекальних екскрементах вимірювали після перорального введення ліпідної емульсії мишам. Вплив PLE та його ізольованих сполук (елагова кислота та дубильна кислота) на активність ліпази підшлункової залози досліджували in vitro .

результати:

Групи, які отримували PLE, продемонстрували значне зниження маси тіла, споживання енергії та різного відсотка маси жиру та сироватки крові, TC, TG, рівні глюкози та співвідношення TC/HDL-C після 5 тижнів лікування. Крім того, PLE суттєво зменшував збільшення рівня ТГ у сироватці крові та пригнічував всмоктування кишкового жиру у мишей, отримуючи жирову емульсію перорально. PLE продемонстрував значну різницю у зниженні смаку ожиріних мишей, які харчувалися дієтою з високим вмістом жиру, але не показав жодного ефекту у мишей, які годувались нормальним харчуванням.

висновок:

PLE може пригнічувати розвиток ожиріння та гіперліпідемії у мишей із ожирінням з високим вмістом жиру. Ефекти частково опосередковані пригніченням активності ліпази підшлункової залози та придушенням поглинання енергії. PLE може бути новим пригнічувачем апетиту, який впливає лише на ожиріння, спричинене дієтою з високим вмістом жиру.

Ожиріння є найпоширенішим метаболічним захворюванням у розвинених країнах і за останні роки стало глобальною епідемією. 1 Це пов'язано з різними хронічними захворюваннями, включаючи гіперліпідемію, цукровий діабет, ішемічну хворобу серця та певні типи раку. Крім того, ожиріння, особливо абдомінальне, пов’язане з дисліпідемією, яка характеризується підвищенням рівня тригліцеридів (ТГ) та зниженням рівня ліпопротеїдів холестерину високої щільності (ЛПВЩ-ЛПВЩ). Відомо, що надмірна кількість жиру пов’язана з розвитком ожиріння у мишей. Тривале годування дієтою з високим вмістом жиру може спричинити ожиріння з гіперфагією, гіперглюконемією, гіперліпідемією та резистентністю до інсуліну. 4, 5 Крім того, вважається, що ожиріння, спричинене дієтою з високим вмістом жиру, може сприяти збільшенню росту білих і коричневих адипоцитів. 6

експериментально

Самки та самці мишей CD-1 (ICR) (віком 3 тижні) були отримані від Пекінської лабораторії тваринних лабораторій Vital River (Пекін, Китай). Їх розміщували протягом 1 тижня на циклі 12/12 год світло/темно в приміщенні з контролем температури та вологості та, при необхідності, годували стандартною лабораторною водою. Стандартні лабораторні корми містять (у відсотках за масою) приблизно: 4% жиру, 24% білка, 65% вуглеводів та дієта з високим вмістом жиру: 15% сала (насичені жири), 20% оливкової олії (поліненасичені жири), 35% жиру. % білка, 15% вуглеводів, 0,5% вітамінних сумішей, 3% мінеральних сумішей і 5% холестерину (переважно яєчний жовток). Обидва кури були також отримані з Інституту лабораторних тварин Китайської академії медичних наук (SCXK Jing 2001-0003).

матеріалів

Використовували PLE (що містить 10,6% елагової кислоти, приготовленої в нашій лабораторії з номером підключення 040818), а зразок купона (031006) зберігали у нашій лабораторії для подальшого використання. Набори для тестування TG, глюкози, HDL-C та TC були придбані у високотехнологічної біоінженерної компанії Beijing Zhongsheng (Пекін, Китай). Емульсію ліпідів придбано у Пекінської компанії Green Cross (Пекін, Китай).

методи

Вплив PLE на ожиріння у мишей, викликане дієтою з високим вмістом жиру

Вплив PLE на апетит у мишей, які харчуються нормальним або жирним харчуванням

Мишей випадковим чином розподіляли на чотири групи (сім мишей-самців та сім самок мишей на групу): дієта з високим вмістом жиру та група PLE, група з високим вмістом жиру, група нормальної дієти плюс група PLE та група нормальної дієти. Групи PLE вводили перорально з допомогою ін’єкції PLE у дозі 800 мг/кг/день протягом 5 тижнів. Вага тіла та споживання їжі контролювали щотижня. В кінці цього експерименту вимірювали довжину тіла і видаляли різні жирові прокладки.

Вплив PLE на рівень ТГ у сироватці крові у нормальних мишей після одноразового перорального введення ліпідної емульсії

Самців мишей ICR (20,03 ± 1, 97 г) розділили на три групи, кожна група відповідала вазі тіла (n = 6). Ліпідну емульсію готували з 5 мл оливкової олії та 10 мл 1% розчину Твін-20, обробленого ультразвуком, протягом 10 хвилин. Після того як усі миші голодували протягом 12 годин, вони отримували пероральну ліпідну емульсію в дозі 0,5 мл/мишу (що містить 0,046 ммоль TG). У той же час група PLE отримувала перорально PLE в дозі 800 мг/кг, дубильна кислота отримувала дубильну кислоту в дозі 200 мг/кг, а контрольна група отримувала такий же об'єм води. Серійні зразки крові відбирали з орбітальної пазухи через 0, 1, 2, 4 та 6 годин після введення ліпідної емульсії. Сироватку відокремлювали центрифугуванням при 4 ° C і зберігали при -20 ° C для подальшого аналізу TG.

Вплив PLE на рівень ТГ у сироватці крові у мишей із ожирінням після перорального введення ліпідної емульсії

Мишей з ожирінням ICR, індукованих дієтою з високим вмістом жиру (самці, 39, 9 ± 2,77 г), розділили на дві групи, групу PLE та контрольну групу, кожна група відповідала вазі тіла (n = 6). Нормальну групу годували стандартною лабораторною чау. Ліпідну емульсію готували, як описано вище. Після шлункового введення ліпідної емульсії (0,5 мл/мишу) групі PLE вводили PLE в дозі 800 мг/кг, а контрольній групі ожиріння та нормальній групі вводили фізіологічний розчин. Серійні зразки крові відбирали з орбітальної пазухи, тоді як мишей знеболювали ефіром через 0, 1, 2, 4 та 6 годин після введення ліпідної емульсії. Сироватку відокремлювали центрифугуванням при 4 ° C і зберігали при -80 ° C для подальших аналізів.

Вплив PLE на загальне поглинання жиру у нормальних мишей після одноразового перорального введення ліпідної емульсії

Самців мишей ICR (19, 56 ± 1, 48 г) розділили на чотири групи (n = 6). Після голодування протягом 12 годин вони отримували ліпідну емульсію зондом у дозі 0,5 мл/мишу. Ліпідну емульсію готували, як описано вище. У той же час, коли група PLE отримувала перорально PLE в дозі 800 мг/кг, група дубильної кислоти отримувала дубильну кислоту в дозі 200 мг/кг, група елагової кислоти отримувала елагову кислоту в дозі 200 мг/кг. 80 мг/кг, а контрольна група отримувала однаковий об'єм води. Після цього стандартну чау-гризу вводили по 1,0 г/миші. Кал збирали протягом наступних 12 годин і сушили на повітрі протягом ночі при кімнатній температурі. Кожен зразок калу зважували і подрібнювали до порошку. Кількість жиру в калі аналізували за методом Kamera et al. 18, а поглинання жиру в їжі виражалося як відсоток споживаного жиру.

Вплив PLE на активність ліпази підшлункової залози in vitro

Активність ліпази підшлункової залози визначали шляхом вимірювання швидкості вивільнення вільних жирних кислот із ТГ. Спочатку ліпідну емульсію розбавляли 0,1 М буфером Tris-HCl (pH 8, 4), отримуючи кінцеву концентрацію 30 мкМ TG. Розбавлену емульсію (0,1 мл) інкубували з 0,05 мл ліпази підшлункової залози (кінцева концентрація 5 ОД на пробірку) та 0,1 мл різних концентрацій розчинів зразків протягом 15 хвилин при 37 ° C. Активність ліпази підшлункової залози визначали як мілімолі жиру кислоти, що виділяється на мілілітр реакційної суміші. Швидкість вивільнення жирних кислот описана в іншому місці. 19

Статистичний аналіз

Усі значення подаються як середнє значення ± SD. Статистичне порівняння між групами мишей розраховували за допомогою програмного забезпечення SPSS. Для аналізу даних використовували дисперсійний аналіз з тестом Даннета, критерієм статистичної значущості був P

граната

Вплив PLE на масу тіла у мишей, яких годували дієтою з високим вмістом жиру протягом 5 тижнів. ( a ) Самці мишей n = 6; ( b ) самки мишей (n = 5, група 5 мала чотирьох мишей). Група 1: дієта з високим вмістом жиру; група 2: дієта з високим вмістом жиру плюс ПЛЕ 800 мг/кг; група 3: дієта з високим вмістом жиру плюс PLE 400 мг/кг; група 4: дієта з високим вмістом жиру та сибутрамін 4,6 мг/кг; група 5: нормальне харчування. * P ** P

Вплив PLE на концентрацію TG у сироватці крові у нормальних мишей після перорального введення ліпідної емульсії (n = 6). (Квадратна) група ліпідних емульсій; (коло) ліпідна емульсія плюс група PLE 800 мг/кг; (трикутник) Ліпідна емульсія плюс дубильна кислота 200 мг/кг. * P ** P

Вплив PLE на концентрацію TG у сироватці крові у мишей із ожирінням після перорального введення ліпідної емульсії (n = 6). (Квадратна) група з високим вмістом жиру; (коло) група нормальної дієти; (трикутник) Дієта з високим вмістом жиру плюс група PLE 800 мг/кг. * P ** P 2 PLE знижував як дисліпідемію, так і фактори ризику серцево-судинної системи ожиріння, оскільки він продемонстрував особливо значне зниження відсоткової маси жиру в животі та рівня ТГ у сироватці крові порівняно з контрольними мишами.

Це дослідження також показало, що PLE може бути новим вдосконаленим пригнічувачем споживання енергії. На ожирених мишах з високим вмістом жиру та високим вмістом жиру вплив ПЛЕ на споживання енергії було подібним до ефекту пригнічення апетиту сибутраміну, який застосовували в клініці. PLE може значно зменшити споживання калорій у мишей, які харчуються з високим вмістом жиру; в той же час, однак, смак PLE у мишей, яких годували нормальним раціоном, не в останню чергу впливав на PLE. Коли ми контролювали добову активність мишей, ми виявили, що групи PLE були менш активними, ніж групи сибутраміну. Він також припустив, що механізм дії PLE на придушення апетиту може відрізнятися від механізму сибутраміну. Ми припускаємо, що воно може мати близьку спорідненість до ожиріння, спричинене дієтою з високим вмістом жиру. Точний механізм дії PLE на апетит у мишей, які харчуються з високим вмістом жиру, досі невідомий, і необхідні подальші дослідження.

На закінчення, PLE мав значний вплив на інгібування розвитку ожиріння та гіперліпідемії у мишей із ожирінням, які харчувалися дієтою з високим вмістом жиру. Було висловлено припущення, що придушення споживання енергії та гальмування кишкового всмоктування харчового жиру шляхом пригнічення активності ліпази підшлункової залози може бути двома можливими механізмами впливу ПЛЕ проти ожиріння.