глюкозний

  • реферат
  • вступ
  • Методи та процедури дослідження
  • предметів
  • Техніка гіперінсулінеміко-евглікемічного затиску
  • Аналізатор біоелектричного імпедансу
  • Аналітична процедура
  • Генотипування поліморфізмів
  • Статистичний аналіз
  • результат
  • обговорення

реферат

Механізми, що лежать в основі інсулінорезистентності, до кінця не вивчені, але ожиріння та генетичні фактори можуть бути добрими кандидатами; Роль жирової тканини видається дуже важливою, оскільки вона є не лише основною тканиною для накопичення енергії, але також є активним ендокринним органом, який виділяє різні білки, які в першу чергу впливають на метаболізм організму та впливають на гомеостаз енергії та глюкози. 1 Серед цих білків є адипонектин, нещодавно виявлений специфічний для жирової тканини цитокін, який відіграє роль у модуляції чутливості до інсуліну. У плазмі людини адипонектин існує у вигляді гексамерів з низькою молекулярною масою (LMW) 180 кДа та мультимерів з високою молекулярною масою (ГМВ)> 300 кДа. 2 Значна кількість доказів пов'язує адипонектин HMW із чутливістю до інсуліну, і адипонектин, здається, модулює чутливість до інсуліну завдяки дії мультиметрій HMW на печінку. 3

Виявлено, що різні поліморфізми одного нуклеотиду (SNP), виявлені в гені адипонектину, пов’язані з ризиком захворювань, таких як: ожиріння, резистентність до інсуліну, діабет 2 типу (T2DM) та метаболічні розлади. 4, 5, 6, 7, 8 Однак, деякі дослідження не змогли встановити зв'язок між адипонектиновими SNP та похідними індексами резистентності до інсуліну, такі як оцінка моделі резистентності до інсуліну гомеостазу (HOMA-IR) тощо. 8, 9, 10

Для оцінки чутливості до інсуліну на основі голодування та перорального тесту на толерантність до глюкози (OGTT) було розроблено кілька рецептур. Гіперінсулінемічно-еуглікемічний затискач продовжує вважатися стандартним методом кількісної оцінки чутливості до інсуліну in vivo, оскільки він безпосередньо вимірює ефекти інсуліну у сприянні утилізації глюкози в стандартних умовах. 11 Однак затискач глюкози не використовується у великих клінічних або епідеміологічних дослідженнях, де потрібні більш прості методи.

З огляду на ці міркування, метою нашого дослідження було дослідити можливу зв'язок гена адипонектину SNP -11391G> A і -11377C> G SNP з показниками чутливості до інсуліну, оціненими гіперінсулінемічно-евглікемічним затискачем у людей з неускладненим ожирінням (без супутніх супутніх захворювань) . Було надано дванадцять даних HOMA-IR для порівняння наших результатів з тими, що повідомляються в літературі. 8, 9, 10 Дослідження неускладнених людей із ожирінням, які не отримували фармакологічного лікування, яке могло б впливати на дію інсуліну, зменшує можливі незрозумілі фактори. Отже, пошук генетичних детермінант ожиріння та пов’язаних з ними ознак у фенотипово однорідній популяції може збільшити ймовірність пошуку відповідальних локусів.

Методи та процедури дослідження

предметів

З 350 осіб, що страждають ожирінням поспіль, відібраних із щоденної лікарні з метаболізмом Департаменту клінічних наук Римського університету "La Sapienza", ми відібрали 99 осіб із ожирінням (жінки = 80; чоловіки = 19), що мають ожиріння щонайменше Вага 10 років (ІМТ)> 30 кг/м 2, середній вік 35 ± 9, 5), оскільки вони не проходили жодного лікування, яке, як відомо, порушує параметри, пов'язані з чутливістю до інсуліну та метаболічним синдромом (гіполіпемія, сенсибілізатори інсуліну, кортикостероїд) гормон, ацетилсаліцилова кислота, β-адреноблокатори, оральні контрацептиви, тіазидні діуретики, інгібітори ангіотензинперетворюючого ферменту 1). Крім того, цих осіб визначили "неускладненими", оскільки у них не було IGT, T2DM, гіпертонії, дисліпідемії або ішемічної хвороби серця. Усі випробувані дали письмову інформовану згоду на участь у дослідженні після того, як були проінформовані про його природу. Протокол дослідження був затверджений Комітетом з етики Університету Ла Сапієнца в Римі.

У всіх пацієнтів із ожирінням, які брали участь у дослідженні, глюкоза в плазмі крові натще була нормальною (13, 14

Аналізатор біоелектричного імпедансу

Жирову масу (FM) та FFM оцінювали за допомогою аналізатора біоелектричного імпедансу (BIA-103; Акерн, Флоренція, Італія) згідно з рівняннями виробника, які містили дані людей із ожирінням та осіб із нормальною вагою.

Аналітична процедура

Концентрацію холестерину та тригліцеридів визначали у плазмі за допомогою автоаналізатора Technicon RA-1000; ЛПВЩ вимірювали після осадження ApoB-містять ліпопротеїдів фосфатною кислотою/MgCl 2. Ліпопротеїни низької щільності (ЛПНЩ) -холестерин визначали за формулою Фрідевальда. Рівні глюкози розраховували методом глюкозооксидази (Autoanalyzer, Beckman Coulter, США). Інсулін у плазмі крові вимірювали на заморожених зразках методом радіоімунологічного аналізу (інсуліновий набір Adaltis, Болонья, Італія) відповідно до інструкцій виробника, з межею виявлення 16

Статус резистентності до інсуліну також оцінювали за допомогою HOMA-IR згідно з наведеною вище формулою: 15 інсуліну натще (мО/мл) × глюкоза натще (ммоль/л)/22, 5. Загальний адипонектин в сироватці крові вимірювали за допомогою радіоімуноаналізу на адипонектин людини (Linco Research Inc, Сент-Чарльз, Мічиган, США).

Генотипування поліморфізмів

SN11 -11391 G> A і -11377 C> G генотипували, використовуючи флуорогенну 5'-нуклеазну пробу ABI PRISM 7900 HT Sequence Detection System (ABI, фостер Сіті, США). Умови для реакції TaqMan були такими: 95 ° C протягом 10 хвилин та 35 циклів при 95 ° C протягом 15 секунд та 60 ° C протягом 1 хвилини.

Статистичний аналіз

Статистичний аналіз проводили за допомогою статистичного програмного забезпечення SPSS, версія 13 (SPSS, IL, США). Генотипічні частоти досліджуваних SNP відповідали рівновазі Харді-Вайнберга. Вплив поліморфізмів на кількісні змінні досліджували за допомогою багаторазового лінійного регресійного аналізу. Значення були скориговані для ІМТ, віку та статі; кожен поліморфізм був введений в аналіз як дихотомічна змінна.

Крім того, у модель було включено взаємодію між генотипами та статтю з точки зору чутливості до інсуліну (індекс М).

Рівні інсуліну, тригліцеридів, HOMA-IR та адипонектину трансформували, щоб нормалізувати їх розподіл.

Ми підрахували, що при обсязі вибірки у цьому дослідженні 80% ефективності дозволяють виявити середню різницю приблизно 30% в індексі М суттєво при a = 0,05, припускаючи значення стандартного відхилення. Різниця в 30% - це та, що спостерігалась раніше. 4

результат

Ми спостерігали, що особи, гомозиготні за алелем G у локусі -11391 гена адипонектину, мали нижчий рівень М (мг/кг хв)/індекс FFM та рівні адипонектину порівняно з особами з генотипами GA + AA (P = 0,002 та P = 0, 03) (Таблиця 1). ), а суб'єкти, що мали варіант -11377G, мали нижчий рівень М (мг/кг хв)/FFM та адипонектину порівняно з носіями (Р = 0,003 та Р = 0,03) (Таблиця 2). Результати залишаються значними навіть після коригування ІМТ, віку та статі, хоча ці дві статі не були однаково представлені у нашій вибірці. Крім того, корекція індексу M для FFM може також зменшити відмінності між чоловіками та жінками. Значення Р для взаємодії між генотипами та статтю щодо чутливості до інсуліну (індекс М) не є статистично значущим (Р = 0,9).

Стіл в натуральну величину

Стіл в натуральну величину

Істотних відмінностей між двома ОНП та іншими досліджуваними параметрами не спостерігалось.

Дисбаланс зв'язування між двома поліморфізмами (D '= 0, 7) був подібним до дисбалансу іншої кавказької популяції. 10

обговорення

Це перше дослідження, яке проаналізувало та виявило зв'язок між поліморфізмами −11391G> A та −11377C> G в гені адипонектину та зниженою чутливістю до інсуліну, оціненою гіперінсулінемічно-евглікемічним затискачем у людей із ожирінням. Далі ми виявили, що ці генетичні варіанти модулюють рівень адипонектину.

Використання затискача виявляється найбільш підходящим методом оцінки чутливості до інсуліну. Дійсно, ми не виявили жодної статистично значущої зв'язку між HOMA-IR та генетичними варіантами, хоча ми приймали лише людей із ожирінням без фармакологічного лікування, які могли перешкоджати дії інсуліну. Відсутність асоціації, яка спостерігалась у попередніх дослідженнях і в даний час між індексом HOMA-IR та двома генетичними варіантами, могла бути пов’язана з тим, що індекс HOMA-IR не є прямим показником резистентності до інсуліну, а отриманим значенням без високої чутливості та специфічності гіперінсулінемічно-еуглікемічного затиску. Ці висновки підтверджують важливість визначення чутливості до інсуліну in vivo за допомогою затискача глюкози у невеликої когорти людей, де використання індексу HOMA-IR менш показано.

Відповідно до цього результату, попередні дослідження, що вивчали взаємозв'язок між геном адипонектину SNP та параметрами чутливості до інсуліну за допомогою індексу HOMA-IR, не змогли виявити асоціацію. 8, 9, 10

Попереднє дослідження серед населення Франції підтримало ідею про те, що функціональні поліморфізми в промоторній області (-11391G> A і -11377C> G) жиромодулюючих рівнів гормону адипонектину, що модулюють гормон адипонектину, пов'язані з рівнем адипонектину і сприяють підвищенню рівня Т2. генетичний ризик, хоча для визначення зв'язку між двома адипонектиновими SNP та індексами інсулінорезистентності (за оцінкою за інсуліном натще, співвідношенням інсуліну натще до глікемії натще та індексом HOMA-S). 10

Два останні дослідження, 6, 9, не виявили зв'язку між генетичними варіантами гена адипонектину та чутливістю до інсуліну за допомогою гіперінсулінемічно-евглікемічного затиску. Штумволл та ін. 6 вперше знайшли зв’язок, але втратили статистичну значимість при поправці на ІМТ та відсоток жиру в організмі (Р = 0, 13). Важливо зазначити, що в цих дослідженнях автори досліджували інший клінічний фенотип (підгрупа індіанських пацієнтів та набір даних про нормальних людей, що переносять глюкозу, відповідно), і що оцінювали інший клас адипонектинових SNP. Суперечливі результати між дослідженнями можуть бути зумовлені кількома факторами, такими як: неоднорідність досліджуваної сукупності (популяційна, клінічна), фенотип (бідний, ожиріння, тривалість захворювання) та дисбаланс у взаємозв'язку між ОНП. У зв'язку з цим відбір добре охарактеризованих пацієнтів із тривалим ожирінням, безумовно, зменшує вплив суперечливих факторів, таких як фармакологічне лікування та патології, пов'язані з ожирінням, збільшуючи тим самим шанс знайти відповідальні місця. Різні результати також можна віднести до реальних відмінностей в алельній асоціації з фенотипом хвороби в різних популяціях.

Ми виявили, що суб’єкти, що мають генотип сприйнятливості −11391G> A та −11377C> G, мають значно нижчий рівень адипонектину в сироватці крові; посилення гіпотези про взаємозв'язок між промоторною областю та секрецією гормонів. Кілька досліджень показали позитивну кореляцію між концентрацією адипонектину в плазмі крові та дією периферичного інсуліну на різних моделях мишей та людей. 17, 18, 19 Попередня характеристика промотору людського адипонектину вказує на те, що два промотори SNP, оцінені в цьому дослідженні, близькі до потенційної регуляторної послідовності і тому можуть модулювати транскрипційну активність. 20, 10, 21 Ми припустили, що ці два поліморфізми, або невідомий близький функціональний варіант ЛД, можуть знизити рівень адипонектину і, отже, чутливість до інсуліну.

Незважаючи на те, що це дослідження пропонує нові висновки, слід наголосити на деяких обмеженнях. Розподіл статей не був рівномірно представлений, хоча статистичний аналіз після корекції давав однакові результати.

На закінчення, наші результати дозволяють припустити, що поліморфізми A-11391G> A та -11377C> G гена адипонектину пов'язані зі зниженою чутливістю до інсуліну у людей із ожирінням, як оцінювали за допомогою гіперінсулінемічно-евглікемічного затиску.

Ці поліморфізми можуть сприяти генетичній схильності до резистентності до інсуліну у пацієнтів із ожирінням, що дозволяє визначити важливий фактор ризику метаболічних та серцево-судинних ускладнень. Насправді у людей, стійких до інсуліну, легко розвивається повний або частковий метаболічний синдром. Нарешті, здатність оцінювати генетичні або метаболічні фактори, здатні виявити ризик інсулінорезистентності, буде особливо важливою у пацієнтів із ожирінням, які ще не зазнали жодних ускладнень ожиріння. Потім цих пацієнтів ретельно заохочуватимуть змінити спосіб життя, такі як фізичні вправи та дієта, втрата жиру та попередження подальшого набору ваги.