Короткий опис

1 Кафедра біомедичних наук ДОСЛІДЖЕННЯ ПАТОГЕННИХ МЕХАНІЗМІВ ГЕПАТИТУ С І ЇЇ ВЗАЄМОЗВ'ЯЗКИ.

біомедичних

Опис

Відділ біомедичних наук

ВИВЧЕННЯ ПАТОГЕННИХ МЕХАНІЗМІВ ГЕПАТИТУ С ТА ЙОГО ВІДНОСИНИ ДО РОЗВИТКУ СТЕАТОЗУ. ЕФЕКТ ЛІКУВАННЯ АНТИОКСИДАНТУ ФЛАВОНОЇДАМИ

Доповідь бакалавра біології Сандри Пісонеро Вакеро для здобуття наукового ступеня доктора університету Леона Леон, 2014 р.

ЗВІТ ДО РЕЖИСІРІВ ДИСЦИПЛІНИ

Доктор пані Марія Вікторія Гарсія Медіавілла та пані Соня Санчес Кампос як директори докторської дисертації під назвою „Вивчення патогенних механізмів гепатиту С та їх взаємозв’язок із розвитком стеатозу. Ефект антиоксидантної обробки флавоноїдами ", проведену Dña. Сандра Пісонеро Вакеро, у докторській програмі" Біомедицина ", позитивно повідомляє про його депозит, оскільки вона відповідає необхідним умовам для її захисту. Те, що вони підписують, в Леоні _____ _____ року 2014 р. Директори докторської дисертації, підписано: доктор мистецтв Вікторія Гарсія Медіавілла Підписано: доктор Соня Санчес Кампос

ПРИЙНЯТТЯ ДЛЯ ОБРОБКИ ДОКТОРСЬКОЇ ТЕЗИ Орган, відповідальний за докторську програму біомедицини, на своєму засіданні _____ дня 2014 року погодився дати згоду на допуск до процесу читання докторської дисертації під назвою „Вивчення патогенних механізмів гепатиту С та його взаємозв'язок із розвитком стеатозу. Ефект антиоксидантної обробки флавоноїдами », режисер доктор. Пані Марія Вікторія Гарсія Медіавілла та пані Соня Санчес Кампос, підготовлені пані Сандрою Пісонеро Вакеро та назвою англійською мовою є наступне: «Вивчення механізмів розвитку стеатозу, пов’язаного з гепатитом С. Ефекти антиоксидантного лікування флавоноїди ".

Те, що я підписую, у Леоні ___, ______, 2014 року.

Підписано: драмар Мар Альмар Галіана

Голова Академічної комісії, підписаний: драмат М. Хесус Туньон Гонсалес

Усі результати, представлені в цій доповіді, а також інші, отримані протягом періоду докторської дисертації, були предметом наступних публікацій: Модуляція PI3K-LXRα-залежного ліпогенезу, опосередкованого окислювальним/нітрозативним стресом, сприяє гальмуванню гепатиту С реплікація вірусу кверцетином. Pisonero - Vaquero S, García - Mediavilla MV, Jorquera F, Majano PL, Benet M, Jover R, González‐ Gallego J, Sánchez - Campos S. Лабораторне дослідження 94 (3): 262‐74, 2014, 2014 Жирова печінка людини ген, що зв’язує кислоту (FABP1), активується FOXA1 та PPARα; і пригнічений C/EBPα: Наслідки FABP1 зниження - регуляція при неалкогольній жировій хворобі печінки. Guzmán C, Benet M, Pisonero - Vaquero S, Moya M, García - Mediavilla MV, Martínez - Chantar ML, González - Gallego J, Castell JV, Sánchez - Campos S, Jover R. Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Ліпіди 1831 (4): 803‐18, 2013 Рецептор печінки X, опосередкований α-опосередкованою регуляцією ліпогенезу основними білками та білками NS5A, сприяє індукованому HCV стеатозу печінки та реплікації HCV. Гарсія - Медіавілла М.В., Пізонеро - Вакеро S, Ліма - Кабелло Е, Бенедікто І, Маджано PL, Хоркера Ф, Гонсалес - Гальєго Ж, Санчес - Кампос С. Лабораторне дослідження 92 (8): 1191‐202, 2012

Фінансування Під час завершення цієї докторської дисертації Сандра Пісонеро Вакеро отримала грант Міністерства освіти на підготовку викладачів університетів (FPU, AP2009-4484) Національної програми підготовки кадрів з наукових досліджень у рамках Національний план R + D + I (2008‐2011 рр.), що веде до підготовки викладачів та наукових працівників у рамках Статуту для науково-дослідницького персоналу, що навчається, а також, поки таке фінансування не буде отримано, допомога для фінансування підбору персоналу науково-дослідних працівників з недавнього університету Ступінь, в рамках Регіональної стратегії наукових досліджень, розробок, технологій та інновацій на 2007-2013 роки (Міністерство освіти, Хунта де Кастилія-і-Леон), що співфінансується Європейським соціальним фондом. Крім того, ця докторська дисертація є частиною Проекту: "Роль ядерного рецептора LXRα та основних ліпогенних та запальних генів у розвитку та еволюції стеатозу в in vitro моделях гепатиту С. Вплив лікування кверцетином". Національний план R + D + I Міністерства освіти і науки, Програма фундаментальної біології. 2010‐2012 (BFU2010‐15784/BFI).

“Наша винагорода полягає в зусиллях, а не в результаті. Загальні зусилля - це повна перемога »Махатма Ганді

"Яке велике багатство, навіть для когось бідного, мати хороших батьків"

єдина людина, яка зуміла змусити мене трохи говорити по-англійськи. І моєму Сарію за те, що він залив офіс радістю, за каву на сонці, щоб зарядити батареї, за його штовхання, коли мені це було потрібно, за такі гарні часи в лабораторії та за її межами, а також за те, що я знаходився так близько в 9000 км. Марії Хосе, Люді, Гектору та всім іншим людям в IBIOMED та Департаменті фізіології за те, що вони могли отримати їх допомогу, коли б мені це було потрібно; і особливо Хосе Луїсу, від якого одного чудового дня мені зателефонували, і я не знаю, як мене спонукало, що сьогодні я пишу визнання докторської дисертації. І звичайно, я хочу подякувати своїм друзям і особливо моїй родині за їх безумовну підтримку, за заохочення у найважчі хвилини та за те, що завжди так цінували те, що я роблю. Дякую всім

Скорочення та символи

Казета, що зв’язує АТФ (аденозинтрифосфат)

Комплементарна дезоксирибонуклеїнова кислота

Вільні жирні кислоти

Протеїнкіназа В

Печінка альфа-миші 12

Протеїнкіназа, що активується аденозинмонофосфатом

Аналіз дисперсійного тесту

Посланник рибонуклеїнової кислоти

Активуючий фактор транскрипції 6

Кластер диференціації 81

Білок, що зв’язує вуглеводний елемент відповіді

Карнітинпальмітоїлтрансфераза

Засоби, що діють безпосередньо на вірус

Прямий повтор з 4 нуклеотидними спейсерами

Стандартна помилка середнього значення

Фактор ініціації трансляції у еукаріотів

Імуноферментний аналіз

Ендоплазматична сітка, пов'язана з деградацією

Реактивні види азоту

Активні форми кисню

Елементи реакції на стрес ендоплазматичної сітки

Синтаза жирних кислот

Білок, що зв’язує жирну кислоту

CD36 транслоказа жирних кислот

Білок-носій жирної кислоти

Управління з продовольства і медикаментів

Рецептор фарнезоїду X

Ліпопротеїни високої щільності

3-гідрокси-3-метилглутарил-кофермент А-редуктаза

Білок теплового шоку

Незмінна синтаза оксиду азоту

Індукований інсуліном ген

Внутрішнє місце потрапляння в рибосому

Фермент 1, що потребує інозитолу

Довголанцюгова ацил-КоА дегідрогеназа

Ліпопротеїди низької щільності

Рецептор печінки X

Елемент відповіді LXR

Рецептор меланокортину 4

Середньоланцюгова ацил-КоА дегідрогеназа

Дефіцит метіоніну та холіну

Рапаміцин-мішень у клітинах ссавців

Мікросомальний транспортний білок тригліцеридів

3‐ (4,5 - диметилтіазол - 2 - іл) ‐2,5 - дифенілтетразолію бромід

Безалкогольна жирова хвороба печінки

Безалкогольний стеатогепатит

Ядерний фактор каппа B

Сольовий буфер фосфатного буфера

Ланцюгова реакція полімерази

Ендоплазматична протеїнкіназа ретикулума

PPAR Коактиватор 1

Фосфоїнозитол 3 кіназа

Протеїнкіназа А

Рецептор, що активується проліфератором пероксисоми

РНК мікропопередника

Первинні мікро РНК

Гомолог фосфатази та тензину

Кількісна ПЛР в режимі реального часу

РНК-індукований мовчазний комплекс

Зворотна транскрипція - кількісна ПЛР у реальному часі

Стійка вірусологічна реакція

Ретиноїд X-рецептор

Білок-активатор розщеплення SREBP

Додецилсульфат натрію

Невелика інтерференція РНК

Приймач мусора класу B типу I.

Регулюючий елемент стерину

Білок, що зв'язує регулюючий елемент стеролу

Фактор некрозу пухлини альфа

Елементи реакції на розгорнуті білки

Неперекладений регіон

Вірус гепатиту С.

ВІЛ

Дуже довга ланцюг ацил-КоА дегідрогенази

Ліпопротеїни дуже низької щільності

Білок, що зв'язує X-box 1

Покажчик змісту

Список малюнків. V Перелік таблиць. VII ВСТУП І ЗАДАЧІ. 9 ФОН. 7 2.1. Гепатит С. 9 2.1.1. Вступ. 9 2.1.2. Поширеність 10 2.1.3. Спосіб передавання . 10 2.1.4. Вірус гепатиту С. 11 2.1.4.1. Геном. 11 2.1.4.2. Попадання вірусу. 13 2.1.4.3. Реплікація та переклад. 14 2.1.4.4. Вірусна збірка та випуск. 14 2.1.4.5. Генотипи. 15 2.1.4.6. Рекомбінація. 16 2.1.5. Патогенез захворювання. 16 2.1.5.1. Стрес ретикулуму та реакція на розгорнуті білки (UPR). 16 2.1.5.2. Автофагія 18 2.1.5.3. Апоптоз 19 2.1.5.4. Припинення клітинного циклу та мітогенна сигналізація про пошкодження ДНК. Шлях фосфоїнозитол 3-кінази (PI3K). 19 2.1.5.5. Мітохондріальна дисфункція. 20 2.1.5.6. Імунна реакція та запалення. 21 2.1.5.7. Ліпідний обмін. 22 2.1.5.8. Роль мікроРНК. 24 2.1.6. Діагностика ВГС-інфекції. 26 2.1.7. Лікування. 27 2.1.8. Моделі досліджень in vivo та in vitro гепатиту С. 30 2.2. Стеатоз 32 2.2.1. Вступ. 32 2.2.2 Патогенез та гістопатологія. 32 2.2.3. Регуляція ліпідного обміну. 34 2.2.3.1. De novo ліпогенез. 3. 4

Рисунки 22. Вплив обробки кверцетином або IFNα на продукцію супероксидних аніонів та на перекисне окислення ліпідів у клітинах HCV-G1. . 108 Рисунок 23. Вплив лікування кверцетином або IFNα на внутрішньоцитоплазматичне накопичення ліпідів у клітинах HCV-G1. . 111 Рисунок 24. Вплив лікування кверцетином або IFNα на експресію FAS у клітинах HCV-G1. . 112 Рисунок 25. Вплив лікування кверцетином або IFNα на експресію LXRα у клітинах HCV-G1. . 113 Рисунок 26. Індукція надмірної експресії LXRα аденовірусною інфекцією. . 115 Рисунок 27. Вплив лікування кверцетином або IFNα на надмірну експресію LXRα та на внутрішньоцитоплазматичне накопичення ліпідів у клітинах Huh7 Ad-0.5. . 117 Рисунок 28. Вплив лікування кверцетином або IFNα та LY294002 на LXRα-залежний ліпогенез, опосередкований шляхом PI3K/AKT у клітинах HCV-G1. . 119

Список таблиць Таблиця 1. Праймери та зонди, що використовуються в qPCR для дослідження ліпогенних генів. . 76 Таблиця 2. Праймери, що використовуються в qPCR для дослідження реплікації HCV. . 77 Таблиця 3. Праймери ПЛР на вибір для аналізу ChIP. . 83

ВСТУП І ЗАДАЧІ

Сандра Пісонеро Вакеро 2.1.2. Поширеність Вірус гепатиту С має поширення у всьому світі, вражаючи людей будь-якого віку, статі, раси чи регіону світу. За оцінками, вірусом гепатиту С. інфіковано 130-170 мільйонів людей, або 2-3% світового населення. Глобальне поширення гепатиту С показано на малюнку 1. В Австралії приблизно 400 000 хронічно інфікованих та Океанія - 14 млн. в Америці, 16 млн. на Близькому Сході, 28 млн. в Африці та 83 млн. в Азії (21). Приблизно 9 мільйонів людей у ​​Європі заражені ВГС, причому поширеність зростає у східних та південних регіонах (23). За оцінками, лише в Іспанії близько 800 000 інфікованих людей (24). Поширеність ВГС серед африканського населення коливається від 0,1% до 17,5% залежно від країни. Країни з найбільшим поширенням - Єгипет (17,5%), Камерун (13,8%) та Бурунді (11,3%). Серед країн із найнижчою поширеністю є Замбія (0,2%), Кенія (0,9%), Малаві (0,7%) та Південна Африка (0,1%) (25).