CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS DEL NOROESTE, SC Програма післядипломної освіти Значення ліпідів у відтворенні та онтогенезі білої риби Патцуаро ТЕЗА Що здобути ступінь магістра в галузі використання, управління та збереження природних ресурсів (орієнтація на: аквакультура) Бенджамін Апарісіо Сімон Ла-Пас, BCS, листопад-2004

аспірантури

Магістерська дисертація з використання, управління та збереження природних ресурсів з орієнтацією в аквакультурі. НАВЧАЛЬНИЙ КОМІТЕТ Д-р Олена Паласіос Мечетнов Доктор Іллі С. Ракотта Димитров Д-р Берта Олівія Арредондо Вега КОМІСІЯ ОГЛЯДУ ДЕТАЛІ Д-р Олена Паласіос Мечетнов Д-р Іліє С. Ракотта Димитров Д-р Берта Олівія Арредондо Вега ДОПОМОГА ЖУРІ Д-р Дранов Паласіо Мечетнов Ilie S. Racotta Dimitrov Доктор Берта Олівія Арредондо Вега Доктор Вісенте Грасія Лопес (заступник)

функції. Крім того, утримання АРА було вищим у культивованих організмів, ніж у диких, що свідчить про те, що, стикаючись з дефіцитом АРА, діє механізм регулювання для його збереження. Не було знайдено значущих кореляційних зв'язків між деякими незамінними жирними кислотами та їх попередниками жирних кислот в яйцях дикої або культивованої риби, що вказує на те, що личинки не мають механізмів подовження та знежирення з утворенням високоненасичених жирних кислот (ARA, EPA та DHA), оскільки вони не мають ферментативного механізму, необхідного на цій стадії, або тому, що початкові рівні були досить високими, принаймні на ранніх стадіях. Проте на пізніх стадіях, які годували Артемією, спостерігався дуже низький рівень DHA, що відображало відсутність цієї жирної кислоти в раціоні. Результати мають практичне значення для харчових потреб плідників та личинок білої риби: (1) Ймовірно, необхідно доповнити АРА в культивованому пліднику та отриманих личинках; (2) Необхідно визначити потребу в добавці з ДГК у розвинених стадіях личинок.

ПОСВІЩЕННЯ Моїй дружині та синові за те, що вони завжди були поруч із мною, за те, що вони навчили мене і навчились стільки речей разом, з усією моєю любов’ю. АНДЖЕЛІКА ПЕРЕЗ ЖУАРЕС І САМУЕЛ ЯН АПАРІЧІО ПЕРЕЗ Моїм бабусям і дідусям, мотивація яких була визначальною для подальшого руху вперед ОФЕЛІЯ ОЧОА І РОЛАНДО АПАРІЧІО/ТЕКЛА ЗАМОРА І ФЕРНАНДО СІМЕН Моїм батькам за їх великі зусилля та мотивацію, що я підтримав свої рішення, безумовно СІМОН ЗАМОРА І ДЖУАН АПАРІЧІО ОЧОА Моїм братам, від яких я завжди отримував їх безцінну підтримку та прихильність ДІАНА АІДА, НОРА ТОНАНЦЕН І ДЖУАН. СІМ'Я OCHOA, СІМЕН АПАРІЦІО І ПЕРЕЗ ХУАРЕС На згадку про того, хто прищепив мені справжні цінності і про кого, своїм прикладом, я навчився завжди сподіватися на РОЛАНДО АПАРІЧІО АЛЬКАУТЕР

Якби двері сприйняття були очищені, для людей все здавалося б таким, яким воно є насправді: нескінченне. Бо людина замкнулася в собі, поки не побачить усе через вузькі щілини своєї печери Вільям Блейк

Бенджамін Апарісіо Сімон Загальний покажчик ЗАГАЛЬНИЙ ПОКАЗНИК Анотація Анотація 1. Вступ 1 2. Передумови 5 2.1. Ліпіди та жирні кислоти: структура та номенклатура 5 2.2. Класи жирних кислот та ліпідів. 6 2.3. Незамінні жирні кислоти: прісна вода проти. морський 12 3. Обґрунтування 16 4. Гіпотеза 18 5. Цілі 19 6. Матеріал та методи 20 6.1. Попередні випробування 20 6.2. Перше дослідження: Тканини з диких плідників 20 6.3. Друге дослідження: Онтогенез диких та культурних рослин 21 6.3.1. Нерест культурних організмів 21 6.3.2. Нерест диких організмів 22 a. Відбір зразків яєць та ембріонів 23 6.3.3. Культура личинок і живий корм 24 а. Отримання личинок 25 6.3.4. Визначення жирних кислот методом газової хроматографії 26 6.3.5. Визначення класів ліпідів за Ятросканом 27 6.3.6. Відбір проб та склад жирних кислот у їжі 28 7. Статистичний аналіз 31 8. Результати 32 8.1. Перше дослідження: Тканини з диких плідників 32 8.1. до. Мозок 32 8.1. b. Гонада 35 8.1. c. Печінка 38 8.1. d. М'язи 41 8.1. і. Жирова тканина 44

Загальний індекс Бенджаміна Апарісіо Сімона 8.2. Друге дослідження: Ембріональний та личинковий розвиток 47 8.2.1. Відмінності між дикими та культивованими 47 а. Жирні кислоти в нейтральній фракції 58 b. Жирні кислоти в полярній фракції 50 8.2.2. Розвиток личинок культурних організмів 55 а. Жирні кислоти в нейтральній фракції 55 b. Жирні кислоти в полярній фракції 55 8.2.3. Зміни ліпідів під час розвитку 60 8.2.4. Співвідношення між незамінними жирними кислотами 64 9. Обговорення 67 9.1. Жирні кислоти в раціоні та їх вплив на розплод сигів 67 9.2. Склад жирних кислот у тканинах 72 9.2.1. Відмінності між статями 78 9.3. Склад ліпідів у яйцях 82 9.4. Динаміка ліпідів під час розвитку 89 9.5. Синтез під час лецитотрофії 93 9.6. Вплив дієти на культивованих личинок 95 10. Висновки 99 11. Список літератури 101 12. Додатки 115 12.1. ДОДАТОК А: Таксономічне розташування білої риби 116 12.2. ДОДАТОК B: Культура живого харчування (Artemia sp.) 117 12.3. ДОДАТОК C: Культура личинок білої риби 118 12.4. ДОДАТОК D: Аналіз жирних кислот 119

Бенджамін Апарісіо Сімон Скорочення СКОРОЧЕННЯ (22: 6/20: 5): частка DHA (22: 6n-3) та EPA (20: 5n-3) (n-3/n-6): частка жирних кислот у серії n-3 та серії n-6. ARA: арахідонова кислота BHT: цис-бутилгідрокситолуол: цис-конфігурація жирної кислоти DG: дигліцериди DHA: докозагексаєнова кислота DMA: диметилацеталь EPA: ейкозапентаенова кислота MG: моногліцериди PL: фосфоліпіди psu: практичні одиниці індексу солоності Індекс Sat: насиченість тригліцериди: транс-конфігурація жирної кислоти Σ DMA: сума диметилацеталю Σ HUFA: сума сильно ненасичених жирних кислот (4 або більше подвійних зв’язків) Σ MUFA: сума мононенасичених жирних кислот Σ PUFA: сума поліненасичених жирних кислот (2 або більше подвійних зв’язків) Σ СБ: сума насичених жирних кислот

Бенджамін Апарісіо Сімон Вступ 4 та кращий ріст, зокрема, на основі харчових потреб цього виду.

Фон Бенджаміна Апарісіо Сімона 9 спричиняє підвищення рівня кортизолу, і це може призвести до вищої смертності, якщо організм зазнає хронічного стресу (Bell and Sargent 2003).

Бенджамін Апарісіо Сімон Фон 13 18: 2 (n-6) 18: 3 (n-6) 20: 3 (n-6) 20: 4 (n-6) 18: 3 (n-3) 18: 4 (n -3) 22: 4 (n-6) 22: 5 (n-6) ЕЛАНГСИ РІДНОЇ КИСЛОТИ 20: 4 (n-3) 20: 5 (n-3) 18: 1 (n-9) 18: 2 (n-9) 22: 5 (n-3) 22: 6 (n-3) 20: 2 (n-9) 20: 3 (n-9) DELTA-6- DESATUREASE DELTAS-5- DESATUREASE DELTA-4 - ВСІЛО? Рисунок 2. - Подовження та знежирення ненасичених жирних кислот (взято від Sargent et al., 1995). Інша причина відмінностей між різними рибами може бути пов'язана з харчовими звичками різних видів, враховуючи, що риби з хижими звичками мають більший запас жирних кислот на 20 і 22 вуглеводнів, тоді як у тих, хто має звички або рослиноїдні тварини, більший запас кислоти. 18-вуглецеві жирні кислоти (Sargent, 1995). Крім того, морські організми, які використовуються як джерело їжі для риб, накопичують вищий рівень HUFA, ніж прісноводні організми, враховуючи солоність морської води, а іноді і за низьких температур, в яких мешкають деякі види (Whitney, 1974; Morris et al., 1982; Leray et al., 1984; Dawes et al., 1993; Navarro et al., 1993b, Lee et al., 1989; Tocher et al., 1995, Farkas et al., 2000). Як наслідок, риба, яка харчується водоростями або зоопланктоном морського походження, має більший природний запас HUFA, тому їм не потрібно синтезувати ці жирні кислоти.

Бенджамін Апарісіо Сімон Довідкова інформація 15 Мета встановлення харчових потреб цих компонентів та здатність формулювати адекватні дієти для оптимізації їх вирощування.

Бенджамін Апарісіо Симон Обґрунтування 17 різних контекстів: 1) аналіз складу жирних кислот у різних тканинах диких самок та самців протягом репродуктивного сезону, що дозволяє візуалізувати, чи існує диференційована мобілізація між самками та самцями із резервних тканин (жирової тканини та печінки, головним чином) у напрямку до статевої залози, та 2) аналіз зміни жирних кислот протягом онтогенезу від нересту диких та культурних організмів, що дозволить виявити, чи є певні недоліки у випадку культурних організмів, а також як спостерігати за процесами використання, синтез або консервація різних жирних кислот.

Бенджамін Апарісіо Сімон Цілі 19 5. ЗАВДАННЯ Загальне Проаналізувати склад ліпідів у дорослих, яєць, ембріонів та личинок білої риби, щоб встановити основи харчових потреб ліпідів під час розвитку личинок білої риби Пацкуаро ( Хіростома сліпа). Особливості. Для визначення концентрації та складу жирних кислот у різних тканинах виводка сига. Визначте концентрацію та склад жирних кислот та ліпідів на різних стадіях ембріонального та личинкового розвитку білої риби.

Бенджамін Апарісіо Сімон Матеріал та методи 20 6. МАТЕРІАЛ І МЕТОДИ 6.1. Попередні випробування Під час попереднього випробування була визначена методологія відбору зразків яєць сига, ембріонів та личинок. Було визначено, що мінімальна кількість зразка, необхідна для визначення жирних кислот, становила від 30 до 50 мг ваги яєць або личинок для кожної з семи стадій, які слід враховувати. Була отримана середня вага яєць, ембріонів та личинок кожної стадії, щоб знати, скільки особин потрібно було отримати у кожній пробі. 6.2. Перше дослідження: Тканини диких репродукторів Дорослі організми (5 самок і 5 самців) були захоплені в березні за допомогою гамака в озері Пацкуаро від промислових риболовецьких організмів (Barriga-Tovar, 2000) і передані на льоду до об'єктів INIRENA. Там проводили розтин для отримання зразків печінки, м’язів, головного мозку, гонад та жирової тканини, які заморожували при 70 ° C для подальшого аналізу жирних кислот. Зразки планктону також брали в озері для аналізу жирних кислот, пропорції (%) яких наведені в таблиці IV.