Для діагностики Синдром Дауна У пренатальному періоді існує два типи тестів:

  1. Скринінгові тести або передбачувані, неінвазивні, які обчислюють ризик, але не діагностують наявність у плода синдрому Дауна. Їм бракує ризику переривання вагітності.
  2. Діагностичні тести, інвазивний, з певним ризиком викидня (0,5-1%).

I. Скринінгові тести (неінвазивні)

Зазвичай спочатку проводиться скринінг, за допомогою якого визначається припущення або підозра на ризик. Цей скринінг не має ризику викидня, але не є діагнозом. Тести на презумпцію чи підозру, в свою чергу, складаються з трьох видів тестів:

  1. Тест, проведений за допомогою техніки Безклітинна ДНК [cfDNA]) у крові матері.
  2. біохімічний аналіз набору речовин (білків, гормонів, плодової ДНК), що знаходяться в крові матері. Концентрація цих речовин змінюється, якщо плід має певні хромосомні проблеми (наприклад, трисомія 21) або розвиток. Коливання цієї концентрації також залежить від періоду вагітності, в якому проводиться аналіз (термін вагітності).
  3. ультразвуковий аналізабо УЗД плода, яке виявляє зображення, які вказують на те, що він може мати синдром Дауна. Його значення базується на підтвердженому досвіді, що певні зображення, які можна виявити за допомогою ультразвуку, зазвичай свідчать про хромосомні аномалії або аномалії розвитку. В даний час використання цієї техніки є великим, хоча сонографу необхідно мати солідний досвід. Наявність цих зображень пов’язано з гестаційним віком матері, і в їх прогностичному значенні також слід враховувати вік матері.

Жоден з передбачуваних тестів не має остаточного діагностичного значення. Розрахунок його імовірнісного значення вимагає статистичних операцій, що враховують як термін вагітності, так і хронологічний вік матері. Вони мають відсоток хибнопозитивних результатів, тобто дані, які вважаються позитивними (плід, здається, має синдром Дауна), не підтверджуються пізніше діагностика каріотипу.

Передбачуваний тест буде тим надійнішим і ціннішим, чим краще він покаже, що пізніше підтверджена його вірогідність того, що плід має синдром Дауна, і чим менше помилкових спрацьовувань він пропонує. Але навіть незважаючи на це, остаточне підтвердження завжди вимагає аналізу каріотипу.

Чому ж тоді проводяться передбачувані тести? Оскільки вони простіші у виконанні, вони нешкідливі, вони пропонують негайні дані та дозволяють зарезервувати результати інвазивних, більш ризикованих тестів, лише для справді підозрілих випадків.

а) Неінвазивний пренатальний тест (вільна ДНК плода в материнській крові)

Цей аналіз заснований на тому, що в крові матері є невелика частка ДНК плода, яку можна виявити та проаналізувати. Після ампліфікації цієї ДНК та вимірювання відносної кількості ДНК кожної хромосоми можна оцінити, чи є зміна кількості хромосом плоду, таким чином пропонуючи оцінку ризику плоду, що має будь-яку з найпоширеніших анеуплоїдій: трисомія 21 (синдром Дауна), трисомія 18, трисомія 13, анеуплоїдії статевих хромосом. (Анеуплоїдія означає, що кількість хромосом у клітинах не 46, а вище або менше шляхом дублювання або делеції хромосоми відповідно). Результати, отримані в результаті аналізу вільної ДНК плода в материнській плазмі, є дуже точними, але не є остаточними. Тому, незважаючи на високу специфічність та чутливість, необхідність підтвердження позитивних результатів хромосомних змін за допомогою інвазивних тестів залишається. Що скринінговий тест анеуплоїдій не фінансується в Іспанії державною системою.

б) Тести, які можна проводити протягом першого триместру вагітності:

Вимірювання a шкірна складка на шиї плоданухальна напівпрозорість) за допомогою УЗД. Важливий термін вагітності. Вік, який пропонує найнадійніші дані, - з 11 по 13 тиждень вагітності.

Біохімічний аналіз наступних продуктів - так званих маркерів - у крові матері (аналіз сироватки):

- Білок A плазми крові, пов'язаний з вагітністю (PAPP-A)
- Вільна бета-субодиниця хоріонічного гонадотропіну людини (fβhCG)

в) Тести, які можна проводити протягом другого триместру вагітності:

Біохімічний аналіз наступних маркерів у крові матері (аналіз сироватки):

- Альфа-фетопротеїн
- Загальний хоріонічний гонадотропін людини
- Некон'югований естріол
- Інгібін А

Аналіз перших трьох продуктів називається "потрійним тестом"; аналіз чотирьох називається "чотирикратним тестом".

Ультразвукове дослідження різних ознак, що вже не є нухальної напівпрозорістю. Наприклад: кістка носа, вади розвитку органів (серця, травного тракту), кальцинація печінки, розмір довгих кісток тощо.

II. Діагностичні тести (інвазивні)

Його мета - отримати клітини плода, в яких можна виявити наявність трисомії 21-ї хромосоми, як тотальну, так і часткову (транслокація).

Основні критерії, які роблять пренатальна діагностика інвазивними є:

  1. мати старше 35 років
  2. передбачувані тести повертають позитивне значення (більше 1/250 або 1/270)
  3. існує прямий анамнез генетичної патології
  4. існує ризик відхилення від ультразвукового дослідження

Отримання клітин здійснюється з використанням наступних методик:

1. Амніоцентез

тести
Завдяки амніоцентезу, використання якого набуло широкого поширення в 1970-х роках, професіонали можуть діагностувати у більшості плодів хромосомні аномалії, включаючи Синдром Дауна. Зазвичай ця методика виконується з 14 по 17 тиждень вагітності, хоча її також можна проводити до або після цієї дати. Перед його проведенням плацента та амніотична порожнина визначаються та розташовуються за допомогою ультразвуку та вводиться місцевий анестетик. Потім під прямим контролем УЗД голка вводиться в живіт через черевну стінку. (рис. 1) а навколоплідні води, що стікають через голку, відсмоктуються. Згодом цю рідину центрифугують і отриманим клітинам плоду дозволяють рости в культурі для подальшого проведення хромосомного аналізу. Амніоцентез несе певні ризики, властиві цій техніці, такі як аборти, травми плода або інфекція матері.Фігура 1. Амніоцентез - спосіб виведення навколоплідних вод

Однак це процедура, яка, як правило, відносно нешкідлива.

Після отримання клітин їх аналізують, чи існує третя хромосома 21. Для цього можна дотримуватися трьох методів:

  • Каріотип: вимагає збереження клітин ізольованими в культурі та аналізу та підрахунку кількості хромосом, які вони містять. Щоб отримати результат, потрібно 2-3 тижні.
  • Флуоресценція In Situ гібридизація (FISH): дозволяє швидко ідентифікувати хромосомні аномалії в клітинах. За допомогою цієї методики ДНК позначають флуоресцентними молекулами, які зв’язуються з певною областю, яка знаходиться в досліджуваній хромосомі, а після фарбування її візуалізують за допомогою флуоресцентного мікроскопа. За допомогою специфічних для хромосом зондів фахівець може швидко визначити наявність зайвої хромосоми 21; ви побачите три флуоресцентні сигнали замість звичайних двох (по одному для кожної хромосоми 21), що вказує на те, що плід має синдром Дауна (рис. 2).

Малюнок 2. Флуоресцентна гібридизація in situ (FISH) у випадку часткової трисомії хромосоми 21, в якій відбувається транслокація 15; 21. (Фотографія зроблена, з дозволу, від: Nadal et al., J. Med. Genet. 1997; 34: 50-54).

  • QF-PCR: Зразки клітин отримують подібним чином до описаних (амніоцентез, ворсинки хоріона), але QF-PCR демонструє такі переваги:

- Не вимагає культури клітин
- Поставте діагноз анеуплоїдій та інших важливих хромосомні аномалії через 24-48 годин
- Володіє високою чутливістю
- Показує високу специфічність
- Будучи автоматизованим, це дозволяє аналізувати велику кількість зразків одночасно, зменшуючи вартість

Техніка ПЛР здатна швидко примножувати порції ДНК хромосом (наприклад, 21), коли ці частини були попередньо вибрані і, так би мовити, зафіксовані або утримуються елементами, званими праймерами. Це розмноження ланцюга досягається дією ферменту, який називається полімераза, функцією якого є сприяння проліферації ДНК (звідси і назва: полімеразна ланцюгова реакція). Кінцева кількість тієї частини ДНК, яку раніше було обрано, завдяки процесу розмноження, буде пропорційна початковій кількості ДНК, яка існує. Тобто, якщо клітини плода мають 3 хромосоми 21 замість 2 (трисомія 21) остаточна кількість ДНК з хромосоми 21 буде більшою, ніж якби було лише 2 хромосоми 21. Кількісне визначення ДНК досягається за допомогою техніки флуоресценції (кількісна флуоресценція). Отже, вся методика називається QF-PCR.

2. Біопсія ворсин хоріона

Тест складається з отримання шматочка плацентарної тканини вагінально або через живіт, як правило, між 8-м та 11-м тижнем вагітності. (рис.3).

Малюнок 3. Як взяти зразок ворсин хоріона

Потім клітини, отримані з плацентарної тканини, використовуються для хромосомного аналізу. Переваги цієї процедури перед амніоцентезом подвійні: її можна проводити набагато раніше під час вагітності, а дослідження хромосом проводиться негайно, швидше отримуючи результати. До цього часу дослідження показали, що ризик незначний, але не значно більший, ніж ризик амніоцентезу.

3. Кордоцентез

Це винятковий метод, який полягає в проколюванні пуповини через стінку утроби матері для отримання прямої плодової крові. Ризик втрати плода вищий, ніж попередні методи (3%).