ОЦІНКА ДІЯЛЬНОСТІ ЕФІРНИХ МАСЛЕНИХ КОМПОНЕНТІВ КОЛУМБІЙСЬКИХ РОСЛИН ПРОТИ Trypanosoma cruzi і Leishmania spp LAURA VIVIANA HERRERA SANDOVAL UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER ФАКУЛЬТЕТ ЗДОРОВ'Я МАГІСТР В ОСНОВНИХ НАУКАХ 1

оцінка

ОЦІНКА ДІЯЛЬНОСТІ ЕФІРНИХ НАФТОВИХ КОМПОНЕНТІВ КОЛУМБІЙСЬКИХ РОСЛИН ПРОТИ Trypanosoma cruzi І Leishmania spp LAURA VIVIANA HERRERA SANDOVAL Дипломна робота представлена ​​як вимога до здобуття звання: МАГІСТР В ОСНОВНИХ БІОМЕДИЧНИХ НАУКАХ, ДИРЕКТОР МАН. Д. UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER ФАКУЛЬТЕТ МАГІСТЕРСЬКОГО ФАКУЛЬТЕТУ З ОСНОВНИХ БІОМЕДИЧНИХ НАУК BUCARAMANGA 2011 2

ПОСВІТЛЕННЯ Якщо ваше вухо схиляється до мудрості, а серце віддається розуму; якщо ви зателефонуєте до розвідки і попросите прозріння; Якщо ви будете шукати його як срібло, як прихований скарб, тоді ви зрозумієте страх Господній і знайдете знання Бога. Бо Господь дає мудрість; знання та знання випливають з його вуст Приповісті 2: 2-6 До Бога, котрий може все. 6

ПОДЯКИ Моєму викладачу, доктору Патрісії Ескобар, за величезну співпрацю, керівництво, підтримку та, перш за все, терпіння протягом усього мого процесу навчання та розвитку цієї роботи. Доктору Олені Сташенко та її робочій групі CENIVAM: Каміло, Деянірі та Вільяму за надану інформацію та технічну підтримку. КОЛЬЧЕНСЯМ для фінансування цієї роботи через Дослідницький центр CENIVAM (CO No 432-Colciencias). Колегам із лабораторії хіміотерапії, особливо Сандрі Леал за технічну та наукову підтримку. Всім людям: родині, друзям, колегам та вчителям, які тим чи іншим чином сприяли виконанню цієї роботи. 7

ЗМІСТ Сторінка ВСТУП. 17 1. ПОСТАНОВКА ПРОБЛЕМИ. 20 2 ОБґрунтування. 22 3 ДОСЛІДЖЕННЕ ПИТАННЯ. 24 4. ТЕОРЕТИЧНА КАДР. 25 4.1 Хвороба Шагаса. 25 4.1.1 Загальні положення. 25 4.1.2 Паразит 27 4.1.3 Лікування. 27 4.2 ЛЕЙШМАНІАЗ. 30 4.2.1 Загальні положення. 30 4.2.2 Паразит. 32 4.2.3 Лікування. 33 4.3 ЕФІРНІ МАСЛА (ES) І ЇХ КОМПОНЕНТИ. 38 4.3.1 Загальні положення. 38 4.3.2 Хімічний склад. 38 4.3.3 Біологічна активність. 42 5. СТАН МИСТЕЦТВА. 44 6. ЦІЛІ. 47 6.1 Загальна мета. 47 6.2 Конкретні цілі. 47 7. МЕТОДОЛОГІЯ. 48 10

7.1 Методологічне проектування. 48 7.2 Ефірні олії (ЕА). 48 7.2.1 Збір, характеристика та композиція. 48 7.2.2 Вибір АЕ. 49 7.3 Основні компоненти використовуваних ЕО. 55 7.4 Довідкові препарати. 59 7.5 Приготування складських та робочих розчинів. 59 7.6 Паразити та клітини ссавців. 59 7.7 Тест на токсичність клітин ссавців. 60 7.8 Тести активності у T. cruzi. 60 7.8.1 Активність у позаклітинних формах. 60 7.8.2 Активність у внутрішньоклітинних амастиготах. 61 7.9 Випробування активності в Лейшманії. 61 7.9.1 Активність у позаклітинних формах. 61 7.9.2 Активність у внутрішньоклітинних амастиготах. 61 7.10 Аналіз результатів. 62 8. РЕЗУЛЬТАТИ. 72 8.1 Результати у виборі компонентів та ЕО. 72 8.2 Активність компонентів у клітинах ссавців. 74 8.3 Активність у T. cruzi. 76 8.3.1 Діяльність компонентів. 76 8.3.2 Діяльність компонентів щодо Nifurtimox. 76 8.3.3 Активність компонентів у Т. cruzi проти клітин Vero. 77 8.4 Діяльність у Лейшманії. 79 11

8.4.1 Діяльність компонентів. 79 8.4.2 Діяльність референтного ліки. 79 8.4.3 Взаємозв'язок активності лейшманії з клітинами THP-1. 80 8.5 Порівняння активності компонентів у T. cruzi та L. chagasi. 83 8.6 Взаємозв'язок активності компонента та ЕА, що його містить: індекс активності (ІА). 83 8.7 Хемо-комп’ютерний аналіз активних компонентів. 89 9. ОБГОВОРЕННЯ. 91 10. ВИСНОВКИ. 98 11. БІБЛІОГРАФІЯ. 101 12

СПИСОК ФІГУР Сторінка Рисунок 1. Паразитарні форми роду Трипаносома 28 Рисунок 2. Життєвий цикл Трипаносоми Крузі 30 Рисунок 3. Життєвий цикл роду Лейшманія 35 Рисунок 4. Приклади хімічних структур ароматичних компонентів ефірних масел 40 Рисунок 5. Приклади хімічних структур AE-терпенів 41 Рисунок 6: Приклади хімічних структур AE-сесквітерпенів 41 Рисунок 7. Методологічний дизайн, застосований на першому етапі дослідження 50 Рисунок 8. Методологічний дизайн, застосований на другому етапі дослідження 51 Рисунок 9. Відносна кількість відібраних компонентів ефірних олій роду Lippia 73 Рисунок 10. Відносна кількість відібраних компонентів ефірних олій роду Piper 74 13

СПИСОК ТАБЛИЦ Сторінка Таблиця 1. Таксономічна класифікація роду Leishmania 34 Таблиця 2. Дослідження активності AE та її основних компонентів щодо видів Leishmania та T. cruzi 46 Таблиця 3. Кількість AE відповідно до їх антипаразитарної активності 49 Таблиця 4. Сім'ї найчастіші АЕ, активні у T. cruzi та L. chagasi 52 Таблиця 5. Активні роди ефірних олій у T. cruzi та L. chagasi 52 Таблиця 6. Ідентифікація АЕ ароматичних рослин, відібраних у дослідженні та активних у T. cruzi та L chagasi 54 Таблиця 7. Хімічні характеристики вибраних активних компонентів ефірної олії 56 Таблиця 8. Критерії класифікації активності сполук in vitro 63 Таблиця 9. Хімічний склад АЕ роду Lippia 64 Таблиця 10. Хімічний склад АЕ Рід Tagetes 66 Таблиця 11. Хімічний склад AE роду Piper 68 Таблиця 12. Активність компонентів у клітинах ссавців 75 Таблиця 13. Активність компонентів у T. Cruzi 78 14

Таблиця 14. Активність компонентів у L. chagasi 81 Таблиця 15. Діяльність компонентів у L. Panamensis 82 Таблиця 16. Індекси активності апінену 85 Таблиця 17. Індекси активності карвакролу 86 Таблиця 18. Індекси активності тимолу 87 Таблиця 19. Індекси активності Транс-β-каріофілену 88 Таблиця 20. Прогнозування ризику токсичності досліджуваних компонентів 90 Таблиця 21. Аналіз біологічної активності компонентів ефірних масел, оцінений у цьому дослідженні 100 15

СПИСОК СКОРОЧЕНЬ AE Ефірні олії AmB Амфотерицин B CC 50 Цитотоксична концентрація 50 CC 90 Цитотоксична концентрація 90 CI 50 Інгібуюча концентрація 50 CI 90 Інгібуюча концентрація 90 CENIVAM Національний науково-дослідний центр агропромислового розвитку тропічних лікарських ароматичних рослин DE Стандартне відхилення DMSO Диметилсульфоксид Індекс ІС активності Індекс селективності LC Шкірний лейшманіоз LV Вісцеральний лейшманіоз МТТ (3- (4,5-диметилтіазол-2-іл) -2-дифенілтетразолій бромід) NC Не розраховано ND Не визначено NFX Ніфуртімокс NT Нетоксичний PBS Фосфатний буфер сольовий розчин PMA Phorbol міристат ацетат 16

активність у паразитів. Для порівняння активності компонента з активністю ЕА, що його містить, розраховували індекс активності (ШІ), який визначали як співвідношення активності ЕА у паразитах та активності компонента в клітинах. Компоненти класифікували за критеріями активності та проводили статистичні тести, щоб встановити суттєві відмінності в їх активності щодо: типу сполук, типу паразитів та способу життя (вільного або внутрішньоклітинного), типу клітин та референтного препарату, значення р