діагностики

В
В 		В

Індивідуальні послуги

Журнал

  • SciELO Analytics
  • Google Scholar H5M5 ()

Стаття

  • Іспанська (pdf)
  • Стаття в XML
  • Посилання на статті
  • Як цитувати цю статтю
  • SciELO Analytics
  • Автоматичний переклад
  • Надішліть статтю електронною поштою

Показники

  • Цитується SciELO

Пов’язані посилання

  • Подібне в SciELO

Поділіться

Перуанський журнал експериментальної медицини та громадського здоров'я

друкована версія В ISSN 1726-4634

Преподобний Перу. мед. досвід охорона здоров'я В т. 24 В п.2 В Лима Квітень/Червень В 2007

ОРИГІНАЛЬНІ ТОВАРИ

ПЛР-множинна для діагностики Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum та Ureaplasma urealyticum

MГєltiplex-PCR для діагностики Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum та Ureaplasma urealyticum

Ключові слова: Інфекції мікоплазми; Інфекції уреаплазми, ланцюгова реакція полімерази, негонококовий уретрит (джерело: DeCS BIREME).

Ключові слова: Мікоплазмові інфекції; Інфекції уреаплазми; ланцюгова реакція полімерази; Негонококовий уретрит (джерело: DeCS BIREME).

ВСТУП

Види мікоплазми та уреаплазми були пов’язані з різними захворюваннями дихальних та сечостатевих шляхів як у жінок, так і у дітей. Найчастіше ідентифікованими видами є Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma parvum та Ureaplasma urealyticum1.

Ці мікроорганізми, що належать до класу Молікути, вважаються надзвичайно важкими для їх розмноження in vitro, як через харчові потреби для їх розмноження, так і через помітну чутливість до змін рН, температури, осмотичного тиску, ультрафіолетових променів, ПАР, антитіл та доповнення, факт, що ускладнює ізоляцію бактеріологічним посівом2,3.

МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

КОНТРОЛЬНИЙ ЗРАЗОК ДНК

ГРУНТОВІ НАБОРИ ДЛЯ ПЛР-МАЛТИПЛОВОГО МЕТОДУ

Були використані набори праймерів MgPaF-MgPaR, комплементарні до області гена адгезивного білка M. genitalium (MgPa), описані Jensen et al.6, набір праймерів доповнює фрагмент 280 bp гена РНК 16S рибосомної РНК з M. hominis та два набори праймерів, один з яких доповнює фрагмент спейсерної області між генами рибосомної РНК 16S і 23S U. parvum, а інший набір доповнює фрагмент спейсерної області, прилеглої до уреази ген і специфічний для U. urealyticum, описаний Фернандесом та ін. (Таблиця 1).

РЕАКЦІЙНА СУМІШ

ПОСИЛЕННЯ ДНК

Ампліфікацію ДНК проводили в термоциклері "Personal MastercyclerR" (Еппендорф, Німеччина), регулюючи умови ампліфікації ДНК еталонних штамів, запрограмованих при 95 ° С на чотири хвилини, після чого цикли 94 ° С протягом 30 секунд, тестування з трьома різними температурами гібридизації: 55, 57 і 60 ° С протягом 30 секунд і 72 ° С протягом однієї хвилини, з остаточним продовженням при 72 ° С протягом п’яти хвилин, оцінюючи з 35 та 40 циклами.

АНАЛІЗ РОЗШИРЕНИХ ПРОДУКТІВ

ПРОБА З КЛІНІЧНИМИ ЗРАЗКАМИ

Проаналізовано 34 зразки ексудату уретри, негативні в тестах на виявлення Neisseria gonorrheae, від тієї ж кількості пацієнтів чоловічої статі, які відвідували Мікробіологічну лабораторію Військової лікарні "Карлос Хуан Фінлей", у період з жовтня по грудень з 2005 року.

ЗРАЗОК ДОБРАННЯ ДНК

МОЛІКУТИ ПЛР-КЛАСУ

ДНК, отриману з кожної клінічної проби, аналізували, використовуючи специфічний для ПЛР клас Mollicutes, як описано FernÃndendez та співавт.

ПЛР-МНОЖЕННЯ ДЛЯ ІДЕНТИФІКАЦІЇ Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum та Ureaplasma urealyticum

У реакційну суміш з кінцевим об'ємом 50 мкл додавали чотири набори праймерів, описаних вище. Для ампліфікації ДНК клінічних зразків була використана програма, використана для ампліфікації еталонної ДНК. Посилені продукти аналізували, як описано вище.

З вивчених клінічних зразків уретрального ексудату 79,4% (27/34) були визначені позитивними на Mollicutes за допомогою класу ПЛР. З них за допомогою множинної ПЛР; 14,8% (4/27) були позитивними на M. genitalium; 18,5% (5/27) до M. hominis, тоді як 11,1% (3/27) були визначені як U. urealyticum та 3,7% (1/27) як U. parvum. Решта 55,6% (15/27) не відповідали жодному з досліджуваних видів (табл. 2). Дві зразки були заражені коінфекцією, одна з M. hominis та U. parvum, а друга - з M. hominis та U. urealyticum.

При вивченні клінічних зразків уретрального ексудату позитивність M. genitalium збігається з результатами, отриманими в інших дослідженнях. Gubelin та співавт. 11, досліджені методом ПЛР, наявність M. genitalium у зразках секреції уретри у 23 чоловіків з УНГ, виявляючи цей вид у 13,04%, також виявляючи Ureaplasma spp. у 34,7% зразків. У дослідженні, проведеному в Туреччині, досліджували частоту M. genitalium у зразках сечі у 63 пацієнтів із симптомами уретриту, виявивши 6,3% позитивності, а також 4,8% для U. urealyticum та 3,2% - для M. hominis12.

БІБЛІОГРАФІЧНА ЛІТЕРАТУРА

1. Тейлор-Робінсон Д., Ейнсворт Дж. Дж., Маккормак В.М. Генітальні мікоплазми. У: Holmes KK, Sparling, PF, Mardh P-A та ін. Хвороби, що передаються статевим шляхом. Нью-Йорк: McGraw-Hill; 2004. с. 533-48. [Посилання]

2. Рівера-Тапія Я.А., Родрігес-Преваль Н. Мікоплазми та антибіотики. Салюд PÃblica Mex. 2006; 48 (1): 1-2. [Посилання]

3. Stellrecht K, Woron A, Mishrik N, Venezia R. Порівняння мультиплексного аналізу ПЛР із культурою для виявлення мікоплазм статевих органів. J Clin Microbiol. 2004; 42 (4): 1528-33. [Посилання]

4. Yoshida T, Maeda S, Deguchi T, MiyazawaT, Ishiko H. Швидке виявлення мікроорганізмів Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum та Ureaplasma urealyticum в сечостатевих зразках методом ПЛР-мікротитрувальної пластини. J Clin Microbiol. 2003; 41 (5): 1850-55. [Посилання]

5. Такахасі С, Такаяма К, Міямото С, Ічіхара К, Маеда Т, Кунісіма Ю та ін. Виявлення ДНК Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum та Ureaplasma parvum у сечі у безсимптомних здорових молодих японських чоловіків. J Інфекційний хемотер. 2006; 12 (5): 269-71. [Посилання]

6. Jensen JS, Bjornelius E, Dohn B, Lidbrink P. Використання в реальному часі ПЛР нуклеази TaqMan 5В ’для кількісного виявлення ДНК Mycoplasma genitalium у чоловіків з уретритом та без нього, які відвідували клініку, що передається статевим шляхом. J Clinic Microbiol. 2004; 42 (2): 683-92. [Посилання]

9. Svenstrup HF, Jensen JS, Bj¶ Brnelius E, Lidbrink P, Birkelund S, Christiansen G. Розробка кількісної реальної ? час ПЛР-аналіз для виявлення Mycoplasma genitalium. J Clin Microbiol. 2005 рік; 43 (7): 3121- 28. [Посилання]

10. Stellrecht K, Woron A, Mishrik N, Venezia R. Порівняння мультиплексного аналізу ПЛР із культурою для виявлення мікоплазм статевих органів. J Clin Microbiol. 2004; 42 (4): 1528-33. [Посилання]

12. Dolapci I, Tekeli A, Ozsan M, Yaman O, Ergin S, Elhan A. Виявлення Mycoplasma genitalium у пацієнтів чоловічої статі з симптомами уретриту в Туреччині за допомогою полімеразної ланцюгової реакції Saudi Med J. 2005; 26 (1): 64-68. [Посилання]

13. Кін Ф.Е., Томас Б.Дж., Гілрой К.Б. Асоціація Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum та Mycoplasma genitalium з бактеріальним вагінозом: спостереження за гетеросексуальними жінками та їх партнерами-чоловіками. Int J ЗНС. 2000; 11 (6): 356-60. [Посилання]

14. Schlicht MJ, Lovrich SD, Sartin JS, Karpinsky P, Callister SM, Agger WA. Висока поширеність генітальних мікоплазм серед сексуально активних молодих людей із симптомами уретриту або цервіциту в місті Ла Кросс, штат Вісконсин. J Clin Microbiol. 2004; 42 (10): 4636-40. [Посилання]

15. Deguchi T, Yoshida T, Miyazawa T, Yasuda M, Tamaki M, Ishiko H, et al. Асоціація Ureaplasma urealyticum (Biovar 2) з негонококовим уретритом. Sex Transm Dis. 2004; 31 (3): 192-95. [Посилання]

16. Тейлор-Робінсон Д, Гілрой К.Б., Кін Ф.Е. Виявлення кількох видів мікоплазм у різних анатомічних місцях гомосексуальних чоловіків. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2003; 22 (5): 291-93. [Посилання]

Листування:
Надя Родрігес Преваль.
Інститут тропічної медицини "Педро КурГВ".
Адреса: Autopista Novia del MediodГa Km 6 Ѕ, AP 601, Маріанано, 13. Місто Гавана, Куба.
Електронна адреса: [email protected]

В Весь вміст цього журналу, крім випадків, коли він ідентифікований, перебуває під ліцензією Creative Commons