предметів
реферат
Загальновідомо, що алогенні трансплантації кісткового мозку або PBSC від відповідних гістосумісних споріднених або неспоріднених донорів, що вводяться після імуноаблативного або мієлоаблативного або мієлосупресивного кондиціонування, можуть забезпечити терапевтичний підхід для лікування пацієнтів з високоризиковими формами ОЛЛ та ОМЛ і потенційно цілющі форми цих захворювань у першій ремісії. Однак основним обмеженням ефективності цих трансплантатів є GVHD, імунна відповідь Т-клітин у трансплантаті донора проти алоантигенів, які, по суті, представлені клітинами лімфо-гемопоетичної системи господаря. 3, 4 Гостра РТПХ тяжкості 2-4 та потребує імунодепресивної терапії спостерігається у приблизно 40% реципієнтів, пов'язаних з HLA, і у понад 50% пацієнтів, яким трансплантували кістковий мозок, не пов'язаний з HLA, незалежно від комбінацій введених імунодепресивних препаратів. після трансплантації, щоб уникнути цього ускладнення. Крім того, ще 50% тих, хто вижив, продовжуватимуть розвивати хронічну РТПХ. 7
Методи виснаження Т-клітин для запобігання GVHD
Роль Т-клітин у патогенезі РТПХ вперше з'ясована на моделях мишей, несумісних з H2. Початкові прямі демонстрації потенціалу виснаження Т-клітин для запобігання РТПХ були надані дослідженнями смертельно опромінених мишей, трансплантованих Н2-несумісними Т-клітинними клітинами кісткового мозку та селезінки, або не розвинувшись після тимектомії новонароджених 8, або антитіл або виснажують лектин Т-клітини з популяцій. Такі трансплантати можуть імплантувати та відновлювати кровотворення та імунітет без індукції гострої РТПХ.
З моменту впровадження цього підходу було оцінено кілька різних методів виснаження Т-клітин, включаючи методики, що використовують кілька різних мишачих моноклональних антитіл, спрямованих проти Т-клітин-специфічних антигенів. Більшість з цих методів досягають 1,5-2-часового виснаження Т-клітин і вимагають повної профілактики РТПХ після профілактики після трансплантації. CD52-специфічне моноклональне антитіло Campath досягає виснаження Т-клітин на 2, 5-3 Log і застосовувалось або in vivo, або in vitro для виснаження Т-клітин. Цей підхід суттєво знизив GVHD у спарених спарених донорах-реципієнтах, але мав змінний успіх у запобіганні GVHD у реципієнтів HLA. 16 На відміну від цього, соєвий лектин, метод виснаження Е-розетки, який послідовно зменшує Т-клітини щонайменше на 3 журнали 10 і нещодавно розроблені методи, що використовують позитивний відбір клітин-попередників CD34 + з мобілізованих G-CSF лейкоцитів периферичної крові, які досягають 4– 4. Виснаження Т-клітин Log 10 було призначено реципієнтам, що відповідають HLA, або помилково орієнтованим без профілактики після трансплантації та ефективно зменшує частоту тяжких гострих та хронічних РТПХ. 17, 18, 19
Стіл в натуральну величину
Трансплантація виснажених Т-клітин як платформа для адоптивних імунотерапій
Розвиток методів виснаження Т-клітин шляхом алогенних трансплантацій гемопоетичних клітин, які усувають потребу в імуносупресії після трансплантації для запобігання РТПХ, також забезпечило унікальну платформу для дослідження адоптивних терапій Т-клітин. За відсутності імунодепресивних препаратів перенесені Т-клітини можуть проліферувати і функціонувати без екзогенного гальмування. Пацієнти на ранніх етапах трансплантації також помітно лімфопенічні, що дозволяє гомеостатичній проліферації адоптивно перенесених Т-клітин до рівнів, вищих, ніж досяжні у пацієнтів з нормальною популяцією лімфоцитів.
Наша програма трансплантації наразі оцінює адоптивну імунотерапію ефекторними Т-клітинами, отриманими донорами, за двома показаннями: (1) лікування або профілактика рецидивів гематологічних злоякісних пухлин; та (2) лікування стійких до наркотиків вірусних інфекцій.
У лікуванні та профілактиці рецидивів після трансплантації ми проводимо дослідження in vitro, що оцінюють розширені Т-клітини та донор-специфічні Т-клітини, специфічні для пептидних епітопів білка WT-1, у пацієнтів з гематологічними злоякісними пухлинами WT-1 +, зокрема, з розширеними формами AML МДС і мієломи. Крім того, ми ініціювали дослідження EB-специфічних Т-клітин, трансдукованих трансдукованими транс-донорськими донорами трансплантатів, які експресують CD19-специфічний химерний антигенний рецептор для лікування рецидивів CD19 + B-клітинної лінії ALL та неходжкинської лімфоми. Оскільки наш і інші центри вже опублікували кілька звітів про клінічну активність Т-клітин, трансдукованих для експресії CD19-специфічного CAR, я зосереджусь на наших дослідженнях WT-1-специфічних Т-клітин.
Протягом останніх 3 років ми проаналізували WT-1-специфічні Т-клітини, отримані від більш ніж 100 нормальних донорів трансплантатів шляхом сенсибілізації in vitro автологічними дендритними клітинами, отриманими з моноцитів, завантаженими набором перекриваючихся 15-мерних пептидів, що охоплюють WT-1. білкова послідовність. На сьогодні ми ідентифікували 41 раніше не анонсований імуногенний епітоп та представлені ними алелі класу HLA і продемонстрували, що ці Т-клітини, специфічні для HLA I або II, обмежують епітопи, вибірково лізують WT-1 + лейкозні клітини, отримані від пацієнта від тієї самої особини. 47
Наші дослідження І. та ІІ. Етапи адоптивної імунотерапії вірусних захворювань у реципієнтів HCT зосереджувались на терапевтичному потенціалі вірусоспецифічних Т-клітин у (1) пацієнтів з патологічно задокументованими EBV + лімфомами, особливо у пацієнтів, які не реагували на Rituxan та (2) пацієнтів з явно вираженою ЦМВ захворювання або стійка віремія. стійкий щонайменше до 2 тижнів звичайної противірусної терапії. Т-клітини, що використовувались у наших початкових дослідженнях, були отримані від донора кожного з пацієнтів, якому пересадили трансплантат гемопоетичних клітин. Т-клітини, виділені з PBMC кожного донора, культивували in vitro протягом 28 - 35 днів після сенсибілізації або опроміненими аутологічними донорськими В-клітинами, трансформованими штамом EBV B95.8 для EBV-специфічних Т-клітин, 53, або аутологічних дендритних клітин, заповнених з пулом перекриваючихся 15-мерних пептидів, що охоплюють послідовність CMVpp65 для CMV-специфічних Т-клітин. Культура in vitro протягом цього періоду часу не тільки відбирає імунодомінантні вірусоспецифічні Т-клітини, але також делеції алоактивних Т-клітин, потенційно здатних викликати РТПХ.
Результати цих досліджень дали докази, що підтверджують потенціал цього підходу. По-перше, три інфузії Т-клітин щотижня є безпечними, без гострої токсичності або випадків гострого або хронічного денця GVHD або лихоманки вже існуючих GVHD у дозах 1-2 × 106 специфічних для вірусу Т-клітин/кг/доза. вони були ефективними у видаленні EBV-лімфом та CMV-інфекцій, які не вдалися при звичайній терапії, індукуючи стійкі CR у 68% хворих на EBV-лімфому, які не реагували на Rituxan, у 53 та понад 86% пацієнтів з CMV-інфекцією або стійкими. віремія, яка не реагувала на ганцикловір, фоскарнет та/або цидофовір. 55
Обмеження, обумовлені імунодомінантою CM-специфічних Т-клітин, в даному випадку Т-клітин, специфічних для пептидів CMVpp65, представлених HLA B0702.
Повнорозмірне зображення
Оскільки CMV-інфекції вражають переважно тканини хазяїна, CMV-інфекції також асоціюються з 3-кратним збільшенням смертності у реципієнтів трансплантатів TLA, депортованих з гаплотипами HLA 59, ніж спостерігалося у аналогічно обумовлених реципієнтів TLA з ідентичними HLA-Т-клітинами. ми досліджували, чи обмеження імунодомінантної, обмеженої HLA реакції Т-клітин можуть бути фактором, що сприяє цій більшій частоті загрозливих для життя ЦМВ-інфекцій. Очікується, що виснажені Т-клітинні трансплантати, які зазвичай несуть 2-20x103 зрілих Т-клітин/кг господареві, повинні спільно переносити лише невелику кількість вірусоспецифічних імунодомінантних попередників CTL, які виявляються з частотою 1/10 3 - 1/10 4 Т-клітини в крові латентно інфікованих серопозитивних донорів. Дійсно, наші попередні результати вказують на те, що CMVpp65-специфічні Т-клітини, генеровані з HLA-гаплотипових несумісних донорів, можуть бути обмежені алелями HLA, які не є спільними для господаря приблизно у половині випадків, і що важке захворювання виникає майже виключно в цьому одержувачі. 61
Для усунення цих обмежень та для більш ефективного контролю вірусних інфекцій після трансплантації як у реципієнтів HLA із виснаженням клітин HLA, так і у пацієнтів, які отримали трансплантації HLA, частково ідентичні пуповинній крові, або парні трансплантації кісткового мозку або PBSC від серонегативних донорів., наша група досліджувала використання HLA частково відповідних Т-лімфоцитів, специфічних для сторонніх донорів, раніше охарактеризованих як їх епітопна специфічність та обмеження HLA.
На закінчення слід сказати, що алогенні HCT сильно виснажені Т-клітини і введені після переносимої мієлоаблативної хіміотерапії можуть забезпечити послідовне дотримання та меншу частоту гострих та хронічних РТПХ без збільшення рецидивів у пацієнтів, яким трансплантували на гострий лейкоз. Такі трансплантати забезпечують перспективну платформу для імунної терапії пухлинних та патогенних клітин. Адоптивна передача реактивних на лейкемію Т-клітин може спричинити ремісії у пацієнтів, які рецидивують після трансплантації і в даний час проходять оцінку для запобігання рецидиву захворювання. Адоптивний передача вірусоспецифічних Т-клітин, утворених від донора-трансплантанта або вибраних від стороннього донора, також може спричинити постійні ремісії EBV-лімфом та стійкої до ліків CMV-інфекції у високої частки пацієнтів. Однак їх послідовне успішне застосування до реципієнтів, дисциплінованих HLA, вимагає ретельного відбору вірусоспецифічних Т-клітин, обидва з яких обмежені алелями HLA, експресованими зараженими клітинами, і специфічні для епітопів, представлених цими алелями.