пацієнтів

предметів

реферат

Синдром Ретта (RTT, OMIM 312750) - важке порушення нервового розвитку, яке вражає жінок майже виключно. Класична форма Ретта характеризується періодом нормального розвитку до віку близько 6-18 місяців, що супроводжується швидким регресом набутих навичок, втратою мови, стереотипними рухами рук, мікроцефалією, судомами, аутизмом, атаксією та періодичною гіпервентиляцією . 1, 2 На додаток до класичної форми, відомо багато варіантів, таких як вроджений варіант, який можна розпізнати при народженні, збережений варіант мови з частковим відновленням мови, "фрезова форма", що характеризується більш легким клінічним перебігом, і пізнє дитинство. регресія та "тип раннього нападу" або синдром Ханефельда. 3, 4

Класичний RTT демонструє домінуючу структуру успадкування, пов’язану з X, і має порівняно високу частоту ∼ 1 на 10000 у жінок. 5, 6, 7 Мутації білка, що зв’язує метил-CpG, гена MECP2, були визначені як захворювання, що викликають 8, і згідно з опублікованими даними, мутації MECP2

80–96% класичних випадків Ретта 9, 10 та 40–50% атипових проявів Ретта. 11 Ген MECP2 знаходиться в Xq28 і тому зазнає інактивації Х-хромосоми. 12 Він містить чотири екзони і кодує дві альтернативно зрощені ізоформи: 498 амінокислот MeCP2E1, що включають екзони 1, 3 і 4, і MeCP2E2 з 486 залишками, що містять екзони 2, 3 і 4. 9, 13, 14 Білок MeCP2 діє як Залежний від метилювання ДНК транскрипційний репресор. 15

Відсутність мутації MECP2 у невеликого відсотка клінічно чітко визначених хворих на РТТ із дитячими спазмами припускає залучення іншого сайту гена. Дійсно, у пацієнтів із ранньою судомною варіацією RTT були виявлені мутації в циклінозалежному кіназоподібному гені 5 (CDKL5 або серин-треонінкіназа 9). 4.5 Ген CDKL5 кодує білок 1030 амінокислот з висококонсервативним N-кінцевим доміном серин-треонінкінази. 16 Підтримуючи роль мутацій CDKL5 у RTT, останні дані вказують на те, що CDKL5 та MeCP2 належать до одного молекулярного шляху і що CDKL5 здатний взаємодіяти та фосфорилювати MeCP2. 17

Крім того, у двох непов'язаних дівчат із вродженим варіантом RTT були ідентифіковані мутації гена FOXG1, оскільки у цих дівчаток був інфантильний початок мікроцефалії, розумова відсталість та своєрідні ривкові рухи, подібні до тих, що спостерігалися при звичайній RTT. 18 FOXG1 кодує білок вилки G1, фактор транскрипції, що експресується виключно в мозку плода та дорослого, а також в яєчках. FoxG1 відіграє важливу роль у ранньому розвитку мозку завдяки взаємодії з транскрипційним репресором JARID1B та з корепресорами сімейства Groucho. Крім того, FoxG1 опосередковано асоціюється з білком гістону деацетилази 1, подібним до MeCP2. 19

Тут ми представляємо трифазний скринінг мутації 152 пацієнтів з діагнозом РТТ.

результат

Всього виявлено 22 різні відомі зміни в MECP2 у 42 осіб. З 22 мутацій ми виявили, що 7 (31, 8%) - це делеції зміщення кадрів, 4 (18, 2%) - безглузді мутації, а 10 (45, 4%) - сенсорні мутації (табл. 1). Ми також виявили вставку одного нуклеотиду. З патологічних мутацій найбільш поширеною місенс-мутацією була p.Thr158Met (14,2%), тоді як місенс-мутацією p.Arg133Cys (11,9%) була друга і безглузда мутація p.Arg255Stop (9,5%) і p.Arg294Stop (9,5%). )., 5%). %) були третім за поширеністю зміною послідовності.

Стіл в натуральну величину

Ми також виявили зміну значення c.925C> T (p.Arg309Trp), спочатку описане у 7-річного хлопчика без відсутності мови та психомоторної затримки; Однак роль цієї зміни в патогенезі Ретта досі незрозуміла (база даних RIMV: //www.mecp2.chw.edu.au/; база даних HGM: //h.hgmd.org). 20

Ми виявили видалення c.1162_1179del18 у 18 п.о. у батька та його дочки (R/34). Оскільки ця делеція присутня у здорових батька та дочки, а також несе вставку c.276_277insG в результаті зміни, ми припустили, що ця зміна не є патогенною мутацією, відповідальною за фенотип Ретта. Однак важливо зазначити, що дані, що є в базі даних RettBASE: IRSF MECP2, свідчать про те, що невідомо, чи можна це видалення вважати мутацією чи поліморфізмом. Крім того, ми виявили тихий поліморфізм, c.753C> Т-перехід, у матері та її дочки (дані не наведені).

Після скринінгу на мутації MECP2 ми протестували всіх пацієнтів без мутації MECP2 на мутації CDKL5. Під час прямого секвенування ми раніше описали поліморфізм c.2372A> C (p.Gln791Pro) у восьми суб'єктів, а також c.3003C> T (p.His1001His) і c.3084G> C (p.Thr1028Thr). відомі поліморфізми у одного з пацієнтів (посилання №: NM_001037343.1). Ми також виявили дві нові безглузді мутації: у першому випадку, зміна c.607G> T, що призводить до передчасного термінаційного кодону в амінокислотному положенні 203, що порушує каталітичний домен білків CDKL5 і c.1708G> T в другий пацієнт, який призводить до передчасного припинення. в амінокислотному положенні 570 С-кінцевої області, що бере участь або в каталітичній активності, або в клітинній локалізації (Таблиця 2).

Стіл в натуральну величину

Перший випадок, коли страждає варіант раннього нападу RTT, - це пацієнтка, яка народилася після невдалої вагітності на 39-му тижні вагітності з антропометричними параметрами, що відповідають віку, а саме неускладненим вагінальним розродженням батьків без розчавлення. Постнатальна адаптація була нормальною, і в родоводі нічого не спостерігалося. Перші напади траплялися у віці 3 тижнів, і з тих пір траплялися надзвичайно часті напади, незважаючи на введення декількох комбінацій протиепілептичних препаратів і навіть на філософію. Стереотипні заходи з миття рук спостерігаються з 4 років. У віці 8 років її вага, зріст та окружність чола були нормальними для її віку, але у неї була важка психомоторна відсталість та гіпотрофія, тоді як також можна спостерігати гіпотонічні м’язи та атаксію. У її дисморфічному стані можна було виявити асиметрію обличчя, глибоко посаджені очі, високий клімат, гіпертрофію ясен, менший другий різець та маленькі руки та ноги для її віку. У 13 років її дисморфічні риси були однаковими; Поганий контакт з очима, стереотипний рух руки та важка рефрактерна епілепсія з дуже частими нападами з мікроцефалією все ще були присутні. Дуже повільне прогресування було виявлено в її тривалому психомоторному розвитку.

Другий випадок раннього нападу - це жіноча дитина у віці 7 місяців на момент обстеження. Вона народилася другою дитиною здорових батьків без розчавлення після безумовної вагітності на 39-му тижні вагітності шляхом кесаревого розтину з вагою при народженні 3650 г. Постнатальний період не був складним. Окрім аборту матері, сімейна історія була негативною. У віці п’яти тижнів у пацієнта розвинулися інфантильні судоми. Її лікували кількома комбінаціями препаратів у неврологічному відділенні і тимчасово не мали судом протягом 4 - 6 тижнів. На момент обстеження під час лікування леветирацетамом та карбамазепіном у неї були щотижневі напади, але напади повторювались пізніше. Магнітно-резонансна томографія головного мозку вважалася нормальною. На той момент пацієнт важив 8180 г (50-75-й процентиль), довжиною 71 см (90-й процентиль) та окружністю голови 42,5 см (10-й процентиль). Потилична асиметрія, плоский носовий місток, опущені пальпебральні тріщини, гіпертелоризм, високий клімат, гіпертрофія ясен та широко поширені соски були в їх дисморфічному стані. Неврологічне обстеження виявило грубу рухову гіпотензію та поганий контакт з очима.

Нарешті, ми шукали мутації FOXG1 у наших пацієнтів шляхом прямого секвенування, але не виявили змін, що впливають на цей ген.

обговорення

Після виявлення дефектів гена MECP2 у пацієнтів з RTT було виявлено широкий спектр мутацій у великого відсотка постраждалих осіб. За літературними даними, загальні точкові мутації MECP2 (R106W, R133C, R168X, R255X, R270X, R294X, R306C та T158M) присутні приблизно у 60-70% випадків із патогенними мутаціями MECP2. 21, 22, 23 Цікаво, що ми виявили лише мутації MECP2 у 27,6% досліджених пацієнтів Ретта, співвідношення, ймовірно, не тільки через обмеження методу прямого секвенування, що використовується для аналізу мутацій, але також може бути віднесено до високого відсотка валового гена перегрупування. MECP2, який неможливо виявити секвенуванням. Згідно з недавньою літературою, такі перестановки можуть становити 37,8% класичних РТТ та 7,5% атипових хворих на РТТ. 24

Важливо підкреслити, що серед негативних пацієнтів з MECP2 лише 17% мали класичний фенотип Ретта. Загалом у 8% цих пацієнтів були ознаки вродженої RTT, 12% були молодими чоловіками, а 4% не мали неврологічних симптомів. У MECP2-позитивній групі повільний психомоторний розвиток спостерігався у 51%, тоді як у MECP2-негативній групі він становив 71,25%. На відміну від цього, мікроцефалія була присутня у 74,4% пацієнтів з MECP2-позитивом та лише у 41% з MECP2-негативних пацієнтів. Протягом всього періоду дослідження 17,8% цих молодих жінок мали будь-які дисморфічні симптоми. У MECP2-позитивній групі 4,65% пацієнтів мали ознаки легкого фенотипу.

Нещодавно новий локус Х-хромосоми, CDKL5, був залучений до нетипової форми RTT 4, 5, що підтримує поняття генетичної неоднорідності RTT. Крім того, нещодавно ген FOXG1 був залучений до молекулярної етіології вродженого варіанту RTT. Ми представляємо молекулярний скринінг 152 осіб з діагнозом РТТ та 11 їхніх родичів. Серед перевірених суб'єктів ми виявили 42 пацієнта RTT з патологічною мутацією MECP2 та 2 пацієнтів з новою мутацією CDKL5, але не виявили змін, що впливають на ген FOXG1, що може бути пов'язано із загальною низькою частотою мутацій FOXG1 у пацієнтів з фенотипом Ретто .

Хоча дві нещодавно ідентифіковані мутації CDKL5 призводять до раннього припинення кодонів 203 та 570, необхідні подальші дослідження для визначення ефекту цих мутацій, які призводять до урізаних білкових продуктів; головним чином тому, що мутація p.Glu203Stop впливає на каталітичний домен CDKL5 і може впливати на його ферментативну активність.

Мутації, що впливають на ген CDKL5, мають клінічні результати різного ступеня тяжкості. На сьогоднішній день 64 мутації (з яких 19 є загальнодоступними) гена зберігаються в базі даних HGMD (//www.hgmd.org), включаючи мутації каталітичного домену missense, делеції, вставки або безглузді мутації під час відкритого зчитування. каркас, що спричиняє передчасне припинення, а також великі геномні перебудови, що призводять до делеції цілого сайту гена. Через обмежену кількість пацієнтів з мутаціями CDKL5 та обмежені знання про функцію та регуляцію білка, визначення кореляції між генотипом та фенотипом є досить складним.

На сьогоднішній день кореляція між генотипом і фенотипом добре відома і зазвичай досліджується в RTT, спричиненою мутаціями MECP2; однак такі кореляції мутацій CDKL5 в RTT, хоча і добре відомі, все ще не настільки добре позначені.

Zappella та ін. 25 відзначали, що ранні усічені мутації в MECP2 призводять до поганого прогнозу (класичний RTT), тоді як мутації із затримкою усічення ведуть до класичного RTT або консервативного варіанту мови. Ранні усічені мутації були пов'язані з більш важким перебігом розладу. Широкомасштабний скринінговий проект MECP2 також був опублікований у пацієнтів з діагнозом РТТ27, де оцінка ступеня тяжкості складеного фенотипу не корелювала з типом мутації, ураженим доменом або інактивацією Х. призвела до більш важкого фенотипу. У дослідженні кореляції генотип/фенотип 85 пацієнтів з RTT проаналізували мутації гена MECP2. 28 Вони виявили, що пацієнти з місенс-мутаціями мали нижчі загальні показники тяжкості та кращі мовні показники, ніж пацієнти з безглуздими мутаціями.

Нещодавня публікація, що характеризує епілепсію, пов’язану з мутаціями CDKL5, і шукає взаємозв’язок між генотипом та перебігом епілепсії, 29 опублікувавши всебічний огляд ключових клінічних особливостей CDTL5-позитивної RTT. 30 Artuso et al. опублікував детальний клінічний огляд дев'яти пацієнтів з мутаціями CDKL5 з метою визначення клінічних діагностичних критеріїв і, крім того, вивчив клінічний фенотип усіх пацієнтів із точковою мутацією CDKL5, про яку раніше повідомляли. 31 Відповідно до їхніх висновків, у наших пацієнтів з мутаціями CDKL5 в анамнезі були напади на початку захворювання після нормального пренатального анамнезу, що, як видається, є ключовим елементом у виявленні пацієнтів з дефектами гена CDKL5. Крім того, було виявлено, що ці напади у наших пацієнтів стійкі до лікування, що є загальною характеристикою всіх випадків, на які впливає CDKL5. У наших пацієнтів гіпотонія, один із необхідних діагностичних критеріїв, запропонований в останній літературі, також була присутня у зв'язку з мутацією CDKL5. 31