pax8

  • Резюме
  • Довіритель
  • матеріал і методи
  • Результати
  • Вираз PAX8 у нормальних дорослих нирок, сечоводів та сечового міхура
  • Вираз PAX8 при пухлинах епітелію нирок
  • Вираз PAX8 при уротеліальній карциномі ниркової миски, сечоводів та сечового міхура
  • Вираз PAX8 у метастатичному РКС
  • Обговорення

Резюме

Довіритель

Фактори транскрипції, специфічні для клітинної лінії, нещодавно з’явилися як цінні діагностичні маркери пухлин людини. Ці білки експресуються в обмежених типах ембріональних тканин і необхідні для росту та диференціації цих тканин у вузькоспеціалізовані тканини або органи. Оскільки деякі білки продовжують експресуватися в диференційованих тканинах протягом дорослого життя або в новоутворених тканинах тієї ж клітинної лінії, виявлення цих білків може вказувати на первинну ділянку або диференціюючу ознаку пухлини. Добре встановлені діагностичні маркери в цій категорії включають TTF-1, 1, 2 CDX2, 3 MITF, 4 та міогенін. 5, 6

Нирково-клітинний рак (РКК) відомий своєю схильністю до судинної інвазії та віддалених метастазів. Значна кількість випадків спостерігається при наднирковому зростанні або метастазуванні під час діагностики або після операції. 7 Завдяки своїм різноманітним гістологічним особливостям метастатичний РКС може бути діагностичним завданням і часто вимагає допоміжних тестів, таких як імуногістохімія, для підтвердження. 8 Багато виробників, включаючи цитокератини (CK), CK7, CK20, EMA, віментин, 9 c-kit, 10 P504S, 11 маркер RCC, 12, 13 аквапорін-1, 14 CD10, 15 та карбоангідразу 9 (CAIX) 16, 17 використовувались у різних панелях із змінною чутливістю та специфічністю.

матеріал і методи

У цьому дослідженні було використано сто сорок первинних та 39 метастатичних пухлин епітелію нирок. Первинні зразки пухлини ниркового епітелію походили із зразків радикальної нефректомії і були сконструйовані на п'ятитканних мікрочипах з трьома репрезентативними ядрами розміром 1 мм від кожного випадку. Використовували звичайні зрізи тканин від метастатичних пухлин. Сорок уротеліальних карцином сечового міхура також були включені в єдиний мікрочип тканин, який був створений так само, як і для первинних пухлин епітелію нирок. Нормальний контроль тканин включав 40 не уражених ядер паренхіми нирок, що містяться в мікрочипах тканин, а також ділянки тканин із незадіяних ділянок ниркової миски (N = 5), сечоводів (N = 5) та сечового міхура (N = 10).

Імуногістохімічне фарбування PAX8 проводили на самофарбуванні Dako кролячими анти-PAX8 поліклональними антитілами (1: 100) (Poteintech, Inc., Chicago, IL, USA). Коротко, вкладені в парафін зрізи тканин (товщиною 5 мкм) отримували з ТМА або тканинних блоків і випікали протягом ночі в духовці при температурі 60 ° C. Зрізи послідовно депарафінізовували та зневоднювали очищувачем PRO. PAR (Anatech, Battle Creek, MI, США) У серії низхідних концентрацій алкоголю та води. Відновлення антигену проводили шляхом пропарювання зрізів протягом 40 хвилин та охолодження протягом 20 хвилин у клітинній мітці з клітиною розчином етилендіамінтетраоцтової кислоти (EDTA). Після відновлення антигену зрізи інкубували буферним розчином Tris з Твін-20 протягом 5 хвилин, а потім завантажували в автоматизовану систему фарбування Dako. Система EnVision (Dako) була використана для візуалізації первинного антитіла з гематоксиліновим контрфарбом.

Чутливість та специфічність антитіла PAX8 перевіряли на різноманітних нормальних тканинах, і лише чітке ядерне фарбування вважалося позитивним щодо PAX8. 29 Дифузне позитивне фарбування називають> 50% пухлинних клітин, що позитивно фарбують на PAX8; в іншому випадку фарбування вважалося фокально позитивним. Щодо метастатичних CRC, випадки фарбування пухлинних клітин на PAX8> 5% вважалися позитивними. Інтенсивність фарбування PAX8 у пухлинах оцінювали як слабку (1+), помірну (2+) та сильну (3+).

Результати

Експресія PAX8 у нормальній нирці, сечоводах та сечовому міхурі дорослих

Фарбування PAX8 виявлено в епітеліальних клітинах проксимальних та дистальних ниркових канальців, петлях Генле, збірних протоках та клітинах парієтального епітелію капсули Боумена (рис. 1а та b). Фарбування завжди було сильнішим у дистальних канальцях, парієтальних клітинах капсули Боумена та збірних протоках (3+), ніж у проксимальних канальцях (1+), у яких також спостерігалося неспецифічне цитоплазматичне фарбування. Сильне фарбування PAX8 (3+) було виявлено у всіх шарах вистилаючих уротеліальних клітин ниркового сосочка та в початковій частині ниркової миски. У дистальних відділах ниркової миски та сечоводах PAX8-позитивні клітини поступово обмежувались проміжними або базальними шарами уротелію із зниженою інтенсивністю фарбування (2+) (рис. 1в-е). В уротелії сечового міхура не було забарвлення PAX8 (рис. 1f). Фарбування PAX8 не виявлено в подоцитах, мезангіальних клітинах, ендотеліальних клітинах, а також в інтерстиції або лімфатичних судинних структурах нирок.

Імуногістохімічне фарбування PAX8 у нормальній нирці дорослої людини. Імунореактивний PAX8 був виявлений в проксимальних канальцях і тім’яних клітинах капсули Боумена ( до, 200 ×), у клітинах дистального канальця нирки та петлі Генле ( b, 200 ×), в збірній протоці та ниркових сосочках ( c, 200 ×), уротелій ниркової миски ( d, 200 ×), уротелій сечоводів ( і, 200 ×), але не в уротелії сечового міхура ( F, 200 ×).

Повнорозмірне зображення

Експресія PAX8 при пухлинах епітелію нирок

Повний розмір таблиці

Приклади імуногістохімічного фарбування PAX8 у пухлинах ниркового епітелію. Імунореактивний PAX8 був виявлений у CRC прозорих клітин ( до, ВІН; b, PAX8; 200 ×), саркоматоїдний компонент (рабаїд) CCR ( c, ВІН; d, PAX8; 200 ×) та папілярний КРР ( і, ВІН; F, PAX8; 200 ×).

Повнорозмірне зображення

У це дослідження було включено 21 первинний папілярний РКС (18 чоловіків, 3 жінки, віковий діапазон від 44 до 85 років, середній вік 70 років), а розмір пухлини становив від 2,2 до 11,7 см (середній розмір 5,9 см). Сімнадцять випадків були папілярним РКС типу 1 на стадіях I або II та дев'ять або вісім пацієнтів відповідно. Чотири випадки - це папілярна CRC типу 2, яка була II або III стадією. PAX8 був виявлений у 19/21 (90%) папілярних РКС, включаючи 16 пухлин типу 1 та 3 типу 2. Фарбування PAX8 було дифузним та сильним (3+) у 15 випадках (рис. 2д та f) (14 пухлин типу 1 і 1 тип 2) та середньої тяжкості (2+) у 4 випадках (2 пухлини типу 1 та 2 типу 2). Два негативні випадки PAX8 включали одну з пухлин типу 1 та один із типів 2.

У цьому дослідженні було 11 хромофобних CRC (6 чоловіків, 5 жінок, віковий діапазон від 28 до 75 років, середній вік 58 років), а розміри пухлини коливались від 1 до 14 см (середній розмір пухлини 4,9 см). Пухлини мали стадію I у шести пацієнтів, стадію II у чотирьох пацієнтів та стадію III з метастазами в лімфатичні вузли у одного пацієнта. Дев'ять із 11 (82%) хромофобних CRC були дифузно позитивними щодо PAX8 (рис. 3а та b), з помірною інтенсивністю (2+) у чотирьох та слабкою (1+) у п'яти випадках.

Приклади імуногістохімічного фарбування PAX8 у пухлинах ниркового епітелію. Імунореактивний PAX8 був виявлений у хромофобних РКС ( до, ВІН; b, PAX8; 200 ×), при онкоцитомах ( c, ВІН; d, PAX8; 200 ×) та при медулярних карциномах нирок ( і, ВІН; F, PAX8; 200 ×).

Повнорозмірне зображення

У цьому дослідженні було дві медулярні карциноми нирок; одним був 31-річний афроамериканець чоловічої статі з серповидно-клітинними ознаками, а другий - 34-річною жінкою, у якого не було відомої ознаки серповидно-клітинної анемії. Пухлини мали розмір 10 та 5 см відповідно і в основному розташовувались у мозковій речовині нирки із значним залученням ниркових корочок, ниркової миски, сечоводів та тазових з’єднань та м’яких тканин гортанного нерва. Гістологічно обидві пухлини складалися з новоутворених клітин, слабо диференційованих у пластинах, канатику або гнізді, з високоякісними ядерними характеристиками, швидкою мітотичною активністю та некрозом. Обидві пухлини були дифузно позитивними щодо PAX8 з помірною інтенсивністю фарбування (2+) (рис. 3е та f).

Дослідження первинних пухлин нирок також включало 22 онкоцитоми (16 чоловіків, 6 жінок, віковий діапазон від 43 до 80 років, середній вік 68 років), а пухлини варіювали від 1,5 до 10,7 см (середній розмір 4,8 см). Двадцять одна з 22 (95%) онкоцитом була дифузно позитивною для PAX8 із сильним фарбуванням (3+) (рис. 3в та d) у 15 випадках та помірним фарбуванням (2+) у 6 випадках. Єдиною PAX8-негативною онкоцитомою була 8-сантиметрова пухлина у 63-річного чоловіка з нічим не примітними гістологічними ознаками.

Експресія PAX8 при уротеліальній карциномі ниркової миски, сечоводів та сечового міхура

Експресію PAX8 також вивчали при уротеліальних карциномах верхніх та нижніх сечових шляхів через невідповідність його експресії в нормальних клітинах уротелію в цих областях. Випадки включали 17, 2 та 40 уротеліальних карцином ниркової миски, сечоводів та сечового міхура відповідно. Ядерні характеристики класифікували за трирівневою системою. Ядра 10, 6 та 1 уротеліальних карцином ниркової миски класифікували як 3, 2 та 1 відповідно. Дві уротеліальні карциноми сечоводу мали ядерну ступінь 3. Двадцять сім із 40 уротеліальних карцином сечового міхура класифікували як ядерну ступінь 3, а решта - ядерну ступінь 2. Дифузне і помірно сильне (2+) фарбування PAX8 виявлено. у 4 (∼ 23%) з 17 уротеліальних карцином ниркової миски (рис. 4), включаючи три випадки з ядерною ступенем 2 та один випадок з ядерною ступенем 3. PAX8 не виявлено у 2 уротеліальних карциномах сечоводів або 40 уротеліальні карциноми сечового міхура. Результати також узагальнені в таблиці 1.

Приклади імуногістохімічного фарбування PAX8 при уротеліальних карциномах ниркової миски ( до, ВІН; b, PAX8; 200 ×).

Повнорозмірне зображення

Експресія PAX8 у метастатичних РКС

З 39 метастатичних РКС 5 знаходились у регіонарних лімфатичних вузлах, 6 - у легенях, 4 - у печінці, 7 - у кістках або м’яких тканинах, 5 - у мозку, 5 - у надниркових залозах, 6 - у підшлунковій залозі та 1 - щитоподібна залоза. З них 32 мали чіткий клітинний тип, 3 папілярні, 2 слабо диференційовані, 1 мав рабдоїдні особливості та 1 - веретеноподібний компонент. PAX8 був виявлений у 33 (85%) з 39 метастатичних РКС, із слабким фарбуванням (1+) у 11, помірним фарбуванням (2+) у 17 та сильним напруженням (3+) у 5 випадках. П’ять чітких типів клітин та пухлина з рабдоїдними характеристиками були негативними щодо PAX8. CRC клітини веретена був слабо позитивним щодо PAX8, тоді як два низькодиференційованих метастатичних CRC були помірно позитивними. Результати узагальнені в таблиці 2. Забарвлення PAX8 у паренхімі легенів, печінки, тканин надниркових залоз або підшлункової залози не спостерігалося. Деякі лімфоцити пофарбовані позитивно на PAX8; однак вони морфологічно відрізняються від метастатичної карциноми і не викликатимуть діагностичних труднощів.

Повний розмір таблиці

Обговорення

PAX2 був показаний у 84-93% прозорих клітинних CRC, 85-100% папілярних CRCs та 87% онкоцитом. 23, 24, 36 Ми показуємо тут, що 98% прозорих клітинних РКС, 90% папілярних РКС та 95% онкоцитом були позитивними щодо PAX8, частоти, подібні або кращі, ніж для PAX2. PAX8 також був виявлений у 85% метастатичних РКС у цьому дослідженні. Крім того, PAX8 був виявлений у 82% хромофобних CRC, 100% медулярних карцином нирок та 71% саркоматоїдного компонента CRC, які, як правило, негативні для PAX2, аквапорину-1 та CAIX. Це свідчить про те, що PAX8 має ширше діагностичне застосування, ніж ці маркери. Наприклад, виявлення PAX8 у слабодиференційованій карциномі нирки допомогло б встановити діагноз рідкісної та високоякісної первинної пухлини нирки, такої як медулярна ниркова або карцинома збірних проток.