реферат
Ми вивчали ефекти лікування літієм та пілокарпіном індукованого епілептичного статусу (SE) на 15 день після народження (P15) або 28 (P28) на тяжкість гострого епілептогенезу, викликаного SE та SE. Щури отримували топірамат (10 або 50 мг/кг, ІП) або діазепам (5 мг/кг, ІП) через 20, 40 або 70 хвилин після пілокарпіну і через три місяці після відеозаписів ЕЕГ/ЕЕГ протягом 24 годин для одного (Р28). ) або протягом двох тижнів (P15) безперервно.
У щурів Р15 топірамат не модифікував перебіг ШЕ, але лікування через 20 або 40 хвилин повністю запобігало появі спонтанних рецидивуючих нападів (SRS), тоді як пізніше лікування (70 хвилин) було частково ефективним у зменшенні тяжкості та частоти SRS . Діазепам був ефективним проти гострого ШЕ протягом усіх тестованих моментів. Раннє (20 хвилин), але не пізнє лікування діазепамом призвело до зменшення частоти та тяжкості СРС.
У щурів Р28 обидва препарати скорочували сукупний час нападу. Раннє лікування (20 хвилин) будь-яким із ліків зменшило частоту хронічної епілепсії. Пізнє лікування (40/70 хв.) Не змінює частоту СРС, але зменшує їх частоту. Це дослідження показує, що при лікуванні ПЕ антиконвульсантний та антиепілептогенний ефекти можуть бути розмежовані у специфічному для розвитку способі: топірамат був антиепілептогенним, не будучи ефективним протисудомним засобом у тварин Р15 у досліджених дозах. З іншого боку, діазепам був кращим протисудомним засобом, ніж антиепілептоген у тварин Р15 у дослідженій дозі. Такі ефекти не спостерігались у літніх тварин.
Головний
Епілептичний статус (SE) є загальним неврологічним станом. SE часто зустрічається у немовлят та дітей раннього віку, причому більше 50% випадків SE спостерігається у віці до 2 років (1, 2).
SE пов’язаний із підвищеним ризиком розвитку епілепсії. У 30% дітей, у яких розвинувся ШЕ, було встановлено, що епілепсія розвивалася згодом (3). Нещодавно у 41% пацієнтів з гострим симптоматичним ІВ (одна третина дітей) розвинулася епілепсія протягом наступних 10 років (4).
СЕ-індукований епілептогенез є поширеним явищем у дорослих тварин, і є значні експериментальні докази його виникнення в незрілому мозку (5-9).
Клінічний відбір антиконвульсантів традиційно базувався на їх здатності блокувати експресію судом, але недавня доступність антиепілептичних препаратів (АЕД), націлених на багато нових молекулярних мішеней (10), викликала інтерес до вивчення їх потенціалу як протиепілептогенного (наприклад, зменшення епілепсії). ) або модифікація захворювання (наприклад, зменшення тяжкості епілепсії). Було зроблено обмежені спроби дослідити антиепілептогенний потенціал існуючих протисудомних препаратів. Хронічне лікування людей фенітоїном або вальпроєвою кислотою для запобігання посттравматичній епілепсії не увінчалося успіхом (11, 12). Хоча деякі дослідження на тваринах застосовували хронічне лікування наркотиками протягом латентного періоду після ШЕ для запобігання розвитку епілепсії, мало хто мав позитивні результати (13–16). З іншого боку, гостре лікування СЕ у дорослих щурів іноді може запобігти або зменшити тяжкість хронічної епілепсії. (16–19), але вплив антиконвульсантів на епілептогенез у незрілих тварин не вивчався.
Ми перевірили ефективність топірамату або діазепаму при гострому лікуванні літію/пілокарпіну на двох різних стадіях розвитку мозку щурів: постнатальний 15-й день (P15) та постнатальний 28-й день (P28). Ці вікові категорії приблизно відповідають дитинству та дошкільному дитинству (20). Ми перевірили вплив гострого лікування на короткочасний (тяжкість ШЕ) та довгостроковий функціональний результат (протиепілептогенний ефект або ефект, що модифікує захворювання).
методи
Тварини.
Використовували самців щурів-альбіносів Wistar (Simonsen Lab, Gilroy, CA), віком 15 або 28 днів (P15 і P28). Днем народження вважали день 0. Цуценят відлучили від грудей на P21.
Усі тварини розміщувались у приміщенні з контролем температури та вологості з 12-годинними циклами світла та темряви (світловий цикл починається о 7 ранку) та мали вільний доступ до їжі та води. Усі експерименти проводились за згодою та згідно з положеннями Інституційного комітету з догляду та використання тварин у Медичному центрі Західного Лос-Анджелеса.
Імплантація електродів.
Тваринам знеболювали галотан. Потім триполярний електрод був прикріплений до гвинтів черепа (перші два були введені в череп над правою і лівою передньою корою, третій розміщений над мозочком) і закріплений зубним цементом. Перші два дроти реєстрували ЕЕГ через півкулі; третя була використана за основу. Після операції тварин поміщали в спостережну камеру на температурній подушці, поки вони не відновились. Щенята щурів Р15 після одужання повернулися до матері.
Індукція SE та введення носія: діазепам або топірамат та/або атропін.
Літій (3 мг/кг) вводили внутрішньочеревно в день хірургічного втручання, а через 20 годин ПЕ індукували sc пілокарпіном (60 мг/кг). Дозу пілокарпіну визначав Санкар (5) для вікових груп, які використовувались у нашому дослідженні. Вимірювали початок першої іктальної активності та безперервної поліспайкової активності. Контрольну групу обробляли через 70 хвилин після пілокарпіну носієм та атропіном у кількості, достатній для блокування більшості ефектів пілокарпіну (10 мг/кг). Як результат, якщо лікування було ефективним, оригінальний холіноміметик, що призвів до індукції SE, більше не мав змоги відновити напади. В інших групах топірамат (10 або 50 мг/кг, розчинений у 10% ДМСО) або діазепам (5 мг/кг) вводили внутрішньочеревно з атропіном сульфатом (10 мг/кг) через 20, 40 або 70 хвилин після введення. пілокарпін. Атропін, розчинений у ДМСО або фізіологічному розчині, мав подібний вплив на тяжкість ПЕ; дві групи були пов’язані. Контрольна група "no SE" отримала лише літій та транспортний засіб. Усі тварини були регідратовані фізіологічним розчином приблизно через 5 годин після ШЕ (10% маси тіла, sc). Вагу тіла контролювали щодня протягом 10 днів після ШЕ.
Гострий моніторинг відео-ЕЕГ.
Ми використовували модифіковану шкалу Хааса (21): 0) поведінковий арешт; 1) закриття рота; 2) хитання головою; 3) згусток голови), 4) двосторонні передні кінцівки клону; 5) клон з розведенням і падінням; 6) дикий біг та стрибки з вокалізацією; 7) тон.
Хронічний відео-ЕЕГ-моніторинг.
Статистичний аналіз.
Кожна група для гострих експериментів складалася щонайменше з п'яти тварин, а для хронічних експериментів кожна група складалася щонайменше з шести тварин. Для гострих експериментів проводили статистичні порівняння з використанням дисперсійного аналізу для багаторазових порівнянь із пост-специфічним тестом Бонферроні для параметричних та пост-холовим тестами Данна для непараметричних даних. Для хронічних даних використовували планові порівняння з корекцією Бонферроні та кореляції. Всі тести проводились із використанням статистичного програмного забезпечення (Sigmastat, Jandel Scientific). Значення Р
Вплив лікування топіраматом (10 мг/кг) або діазепамом (вводять через 70 хвилин після пілокарпіну) на тяжкість перебігу літію/пілокарпіну у щурів Р15. (А) Часовий хід впливу топірамату, діазепаму та/або атропіну на судомну активність (час нападу шляхом підрахунку міжіктального часу) атропін (•); топірамат + атропін (○); діазепам + атропін (▴) (B) Представницька ЕЕГ, зафіксована на електродах черепа у щурів Р15, зібраних через 25 хвилин та 2 години після ін’єкції топірамату, діазепаму та/або атропіну. Цінності - це засоби.
Повнорозмірне зображення
Лікування діазепамом 5 мг/кг негайно пригнічувало поведінкові напади, скорочувало безперервну активність поліспайків, скорочувало сукупний час судом та загальний час нападу, тривалість СЕ та кількість судом у всі перевірені моменти часу (Таблиця 1; Рис. 1 А, Б).,
Вплив лікування на епілептогенез.
Під час тестування через 3 дні після СЕ у 75% тварин атропіну виявляли SRS із середнім показником судом 1,6 ± 0,6.Середня частота судом становила 1,4 ± 1,1 судом/день із середньою тривалістю судом 12, 8 ± 4, 9.
Рання терапія топіраматом (10 мг/кг) (через 20 або 40 хвилин) повністю захищена, а пізня терапія (через 70 хвилин) частково захищена від розвитку СРС (1/7 щурів мали 1 ізольований несудомний напад) (Таблиця 2, Рис. 2 А, Б). Топірамат також суттєво знижував частоту спайків порівняно з групою атропіну (Таблиця 2).
Стіл в натуральну величину
(A) Гостра проти хронічний результат гострого лікування топіраматом (10 мг/кг) або діазепамом, даним через 20, 40 або 70 хвилин після пілокарпіну у щурів Р15. Топірамат не скоротив сукупний час судом, але заблокував розвиток СРС. Діазепам зменшував кумулятивний напад і не перешкоджав розвитку SRS, атропіну (.); топірамат + атропін (□); діазепам + атропін (□). (B) Рання терапія лише діазепамом (20 хвилин) зменшила частоту СРС. * стор
Вплив лікування топіраматом (10 мг/кг), що вводиться через 20, 40 або 70 хвилин після пілокарпіну, на тяжкість літію/пілокарпіну ПЕ у щурів Р28. (А) Залежний від часу ефект лікування топіраматом (10 мг/кг), що вводиться через 20, 40 або 70 хвилин після пілокарпіну, на активність судомного нападу у щурів Р28, атропін (•); 20 хв топірамат + атропін (○); 40 хв топірамат + атропін (□); 70 хв топірамат + атропін (▪). (B) Репрезентативні записи ЕЕГ, зроблені через 90 хвилин після лікування топіраматом та/або атропіном. Безперервна активність поліспайку зберігалася при 70-хвилинному контролі тварини-топірамату та атропіну, тоді як одноразова пікова активність спостерігалася при контролі тварини-топірамата протягом 20 або 40 хвилин. Цінності - це засоби.
Повнорозмірне зображення
Діазепам пригнічував поведінкові напади, скорочував безперервну активність поліспайків та зменшував сукупний час судом у всі тестовані моменти часу (Таблиця 1).
Вплив лікування на епілептогенез.
Зафіксовано через 3 місяці, у 92% контрольних тварин атропіну розвинувся SRS із середнім ступенем тяжкості судом 2,8 ± 0,6, а у 69% тварин - судоми (стадія 3-5). Середня частота нападів становила 17,5 ± 5, 1 напад/день із середньою тривалістю судом 26,9 ± 7,3 с.
Раннє лікування топіраматом (10 мг/кг) або діазепамом (5 мг/кг) зменшило частоту нападів (табл. 2, рис. 4В) і значно зменшило частоту хронічної епілепсії (табл. 2): 17% в обох групах порівняно до 92 у контролі атропіну. Пізнє лікування (40 та 70 хвилин) не змінює частоту хронічних повторних нападів, але зменшує їх частоту (таблиця 2, рис. 4В). Топірамат був більш ефективним у зменшенні тяжкості гострого ШЕ у щурів Р28 порівняно з щурами Р15, але зменшення СРС було значно більшим у молодшій групі (рис. 4А).
(A) Гостра проти хронічний результат гострого лікування топіраматом (10 мг/кг), введеним через 20, 40 або 70 хвилин після пілокарпіну у Р15 або щурів Р28. Топірамат був кращим протисудомним засобом при введенні щурам Р28; топірамат був антиепілептогенним у щурів Р15, (В) Вплив топірамату (10 мг/кг) або лікування діазепамом під час SE на щурів Р28 на епілептогенез, оцінений через 3 місяці. Рання терапія (20 хвилин) була частково захищена від розвитку СРС та значно зменшила частоту СРС. Пізнє лікування (40 або 70 хвилин) зменшило частоту СРС (ефект, що модифікує захворювання). * p P15, P28: