З аналітів, що містяться в слині, вимірювання багатьох параметрів (насамперед стероїдів) є вже повсякденним рутинним завданням у клінічних лабораторіях. Сполуки, що містяться в слині, є вільними гормонами, які відповідають за біологічний ефект, на відміну від гормонів, вимірюваних у крові, велика частка яких пов’язана з білками, тому також існують різниці між величиною слини та концентрації в крові.

слина

Використання зразків слини в клінічній діагностиці підтверджується низкою факторів. Для збору зразка слини не потрібна інвазивна процедура, тому пацієнти можуть легко видалити його вдома або на роботі. Збір відбувається швидко, і в наш час ми маємо у своєму розпорядженні спеціальні інструменти для усунення попередніх аналітичних помилок. Ще однією перевагою зразків слини є те, що вони також можуть бути використані для відбору проб пацієнтів або осіб (наприклад, дітей, спортсменів), яким важко “вести” їх до лікарні. Також перевагою може бути те, що його можна проводити в будь-який час доби та використовувати для контролю параметрів, що мають добре відомі добові коливання (наприклад, кортизол).

Які параметри можна виміряти зі слиною?

Слина - це безбарвна рідина, що складається з 98% води з рН близько 6,64 і питомою вагою 1002-1012 г/л. У слині можна виявити гормони, пептиди, електроліти, слиз, ферменти та антибактеріальні сполуки. Їх концентрація менше, ніж їх вимірюваний рівень у крові. Серед гормонів також можна виміряти кортизол, дегідроепіандростерон, тестостерон, естрогени, прогестерон та альдостерон. Серед білків альбумін, сечовина, лактат, креатинін та інсулін, серед іонів Na +, K +, Ca2 +, Cl− та HCO3-. Імуноглобуліни секретують IgA, IgM та IgG, тоді як ферменти - альфа-амілазу, лізоцим та лактоферин.

Слинотеча знаходиться під нервовою регуляцією. Парасимпатична стимуляція посилює слиновиділення, але симпатична нервова система також відіграє роль у регулюванні слиновиділення. Щодня виробляється близько 750-1500 мл слини.

Які фактори слід враховувати під час збору слини?

Прийом їжі, пиття та фізичні навантаження слід припинити приблизно за 2 години до забору зразка. Ці фактори, особливо цукор, кофеїн, присутні в харчових продуктах, стимулюють слиновиділення, а кислі продукти знижують рН рота, впливаючи на імунологічні аналізи, засновані на принципі реакції антиген-антитіло. Слід уникати вживання алкоголю вже за 24 години до збору слини, оскільки алкоголь стимулює секрецію слини. Слід також уникати забруднення кров'ю, оскільки напр. у випадку стероїдів кількість циркулюючої в крові приблизно на порядок вище кількості, виміряної в слині, і навіть наявність невеликої кількості крові може призвести до хибно високих значень. Щоб усунути це, бажано взяти зразок слини не пізніше 48 годин після стоматологічної процедури. Після чищення щіткою збір можливий лише через 45 хвилин.

Важливою проблемою є стимулювання, наприклад з жувальною гумкою. Це суттєво не впливає на найбільш часто вимірювані параметри (наприклад, кортизол), але оскільки жування стимулює секрецію, концентрація IgA, виміряна в слині, розбавляється.

Зразки слини стабільні після збору, їх можна використовувати протягом року при зберіганні при -20 ° C і протягом декількох років при зберіганні при -80 ° C. Це заборонено при кімнатній температурі або при температурі вище -5 ° C, оскільки відбувається розмноження бактерій, що призводить до розпаду певних компонентів, а також впливає на зв'язування антитіл.

Більш поширені гормони, що вимірюються в слині

Кортизол

Кортизол - основний глюкокортикоїд, що продукується корою надниркових залоз. Його поділ показує добові коливання. На його секрецію впливає гіпоталамо-гіпофізарно-надниркова вісь. Найважливішим його стимулятором є АКТГ. У стресових ситуаціях його обсяг також збільшується. У повсякденній практиці визначення кортизолу з нічних зразків слини використовується для підтвердження гіперкортицизму. Діагностична сила цього повідомляється в кількох дослідженнях. Однак кортизол також є ключовим у реакції на стрес. Тривога, депресія та підвищена фізична активність також викликають підвищений рівень кортизолу.

McLachlan Knife co порушення регуляції добового ритму вироблення кортизолу вивчали у дітей, які зазнали пренатального впливу алкоголю та несприятливих життєвих явищ у ранньому дитинстві.

Пренатальне вживання алкоголю має ряд наступних наслідків, серед яких слід виділити наслідки порушення розвитку нервової системи (наприклад, психічні та поведінкові проблеми). Це призводить до змін у діяльності та регуляції гіпоталамо-гіпофізарно-надниркової осі, програмування та формування яких частково припадає на пренатальний період, а частково на ранній постнатальний період. Нормальні добові коливання рівня кортизолу необхідні для нормального розвитку та роботи мозку.

Маклаклан та співавт. Вивчали рівень кортизолу при пренатальному вживанні алкоголю, соціально-економічний статус, несприятливі події на ранніх стадіях життя, несприятливі результати, захисні фактори та слину два рази (вранці та ввечері) у педіатричній популяції, яка зазнала пренатального впливу алкоголю. Їх результати порівнювали з нормально розвивається контрольною популяцією. Показано, що значно вищі рівні вечірнього кортизолу вимірювали у пацієнтів, які перенесли пренатальний ноксан, і нахил кривої, що вказує на добові коливання концентрації кортизолу, також змінювався. У цій групі був складний взаємозв’язок між добовим режимом кортизолу та пізнім несприятливим наслідком, тоді як захисні фактори приводили до добового ритму, наближеного до типового.

Lucertini F et al. Вивчали активність осі гіпоталамус-гіпофіз-наднирники (HPA) як функцію фізичної активності під час старіння. Відомо, що внутрішньоденний рівень кортизолу в плазмі крові зростає з віком, а у людей старшого віку добові рівні кортизолу та загальне вироблення кортизолу зростають із віком. На цьому тлі

може виникнути пошкодження зворотного зв'язку, що пригнічує активність HPA, що можна простежити до деструкції нейронів у певних ділянках мозку, таких як префронтальна кора та гіпокамп. Підвищена активація HPA та посилена секреція кортизолу виявляються етіологічними факторами розвитку важких хронічних захворювань, що проявляються у людей старшого віку, таких як серцево-судинні захворювання, зниження когнітивних функцій, депресія або загальне порушення.

Engberg H та співавт. Вивчали пацієнтів із вродженою гіперплазією надниркових залоз (CAH). Ця популяція отримує заміну гормону протягом усього життя, оскільки хвороба викликана мутацією гена CYP21A2, що кодує фермент 21-гідроксилазу, що порушує вироблення кортизолу та мінералокортикоїдів, одночасно накопичуючи в організмі попередники стероїдів, які перетворюються в андрогени . У кількох дослідженнях вже проаналізовано психосоціальний розвиток та якість життя пацієнтів із САГ. Дослідження показують ряд суперечливих результатів, головним чином через те, що продукти, що використовуються для заміщення гормонів, не були однорідними, а також спостереження та визначення кінцевих точок також відрізнялися. Основною метою дослідження було проаналізувати частоту виникнення психічних розладів у невиділеної великої когорти дівчат та жінок з ІАГ через дефіцит 21-гідроксилази, оскільки раніше було показано, що у чоловіків із САГ більший рівень психічних захворювань та самогубств, або суїцид. та рівень вживання наркотиків.

Дослідження показало, що всі психічні розлади частіше траплялись у групі дівчат та жінок, а також хлопчиків та чоловіків з ІХС, ніж у контрольної групи. Найчастіше виявлено, що ризик алкоголізму підвищений у порівнянні з жіночими та чоловічими контрольними групами, і, що дивно, він був найпоширенішим серед тих, хто несе генотип із повною втратою ферментної активності. Порушення стресу та адаптації траплялись удвічі частіше, ніж у жіночої контрольної групи.

Тестостерон

Первинний чоловічий статевий гормон виробляється клітинами Лейдіга яєчка та яєчників та надниркових залоз. 95-98% циркулюючого тестостерону присутній в альбумінах і т. Зв він зв’язується з глобуліном, що зв’язує статеві зв’язки (ГСГБ), так що активний гормон становить близько 2-5% від загальної кількості. У чоловіків була продемонстрована сильна кореляція між концентраціями тестостерону, виміряними в слині та циркуляції, що свідчить про те, що тестостерон у слині є надійним маркером вільного тестостерону. Рівень тестостерону також має циркадний ритм, найвищий вранці, а найнижчий ввечері. Збільшення фізичної активності збільшує концентрацію тестостерону, виміряну як у кровообігу, так і в слині. Таким чином, вимірювання тестостерону в слині може бути корисним для оцінки рівня біологічно активного тестостерону та контролю фізичної активності у спортсменів.

Дегідроепіандростерон (DHEA)

У жінок рівні тестостерону, виміряні в слині, важко аналітично виявити через невелику кількість секрету, оскільки тестостерон з яєчників перетворюється на естрадіол і прогестерон. Таким чином, тестостерон слини має обмежену користь для жінок при оцінці гіперандрогенії та реакції, спричиненої фізичними вправами у спортсменів. Однак DHEA, виміряний у слині, сильно корелює з тестостероном слини, що припускає, що DHEA слини може замінити вимірювання тестостерону слини у жінок.

Імуноглобуліни

IgA, IgG та IGM

З секреторних білків IgA, IgG та IgM sIGa є найбільш розповсюдженим антимікробним білком, який можна виявити в слині. Це має клінічну користь при оцінці імунітету слизової, що є найважливішим фактором захисту від вірусних інфекцій. Зниження кількості було пов’язане з розвитком інфекцій верхніх дихальних шляхів.

Гудсон Дж. М. та ін оцінити ризик метаболічних захворювань у дітей із різними імуномаркерами зі слини були визначені.

Захворюваність на ожиріння серед дітей у останні роки зростає у всьому світі і особливо стурбована його асоціацією з порушенням регуляції обміну речовин та важкими супутніми захворюваннями (наприклад, діабет 2 типу), що виправдовує ідентифікацію маркерів для забезпечення їх ранньої ідентифікації. очікується розвиток ожиріння та його ускладнень. Серед маркерів запалення у дослідженні із слини визначали С-реактивний білок, адипонкіни, інсулін та лептин. Важливо, що у дітей, що страждають ожирінням, рівні С-реактивного білка (СРБ) були в шість разів, рівні інсуліну та лептину втричі, а рівні адипонектину на 30% вищі, ніж у дітей із нормальною вагою. Чіткі запальні ознаки спостерігались у 76% дітей, що страждають ожирінням, тоді як концентрація інсуліну в слині була високою у 13% учасників, але це не було пов'язано з наявністю медіаторів запалення. У решти 11% дітей із ожирінням рівень інсуліну був високим, тоді як концентрація адипонектину була знижена. 40% дітей з нормальною масою тіла належали до груп, у яких шанси на розвиток ожиріння збільшувались на основі характеристик біомаркерів.

Резюме

Використання слини як середовища, що відображає гомеостаз нашого організму в лабораторній діагностиці, є практичним і технічно простим. У випадку з багатьма гормонами вже доступні надійні методи вимірювання та відповідні контрольні діапазони, за допомогою яких можна виявити захворювання та стежити за ним з високою чутливістю. У той же час розвиток мікроаналітичних методів дозволяє вимірювати інші параметри зі слини, обсяг яких, крім діагностики, може бути дуже важливим для спортсменів та для оцінки реакції нашого організму на стрес. Відбір проб, зберігання та аналіз простіші для зразків слини, ніж навіть для зразків крові, але визначення відповідних контрольних діапазонів є важливим для точної клінічної застосовності.

Аттіла Паточ, Доцент, Інститут лабораторної медицини, Університет Земмельвейса, Група досліджень молекулярної медицини MTA-SE
статті автора