Вплив протеолітичних ферментів та статевий
абстиненція на рівні -глюкозидази
в насінній плазмі людини
Патрісіо Пенья S 1,2, Рауль Санчес G, Бельгія Васкес P 1,3,
Клаудія Кастілло К 1, Вернер Міска 4
Надійшла 18 грудня 2000 року. Прийнято у виправленій версії 16 січня 2001 року.
Джерело фінансування: Програма MECE-SUP FRO-98, проект: "Посилення
Регіональний науковий, технологічний та виробничий потенціал ". Дирекція досліджень
(9735-9820), Universidad de La Frontera Temuco та DFG-GTZ-93.2157.106.100.
Відділ фундаментальних наук, Відділ доклінічних наук та Центр біотехнологій у відтворенні, Медичний факультет, Університет де Ла Фронтера, Темуко, Чилі.
Андрологічний факультет, J-L-Universität Giessen, Німеччина.
1 медичний технолог, 2 MCS, 3 бакалавр наук
Це дослідження було розроблено з наступними цілями: 1) отримати референтні значення α-глюкозидази, присутніх у насінній плазмі нормальних донорів. 2) визначити в зразках сперми нормальних донорів вплив додавання протеолітичного ферменту -хімотрипсину на активність а -глюкозидази; та 3) оцінити можливий вплив тривалості сексуального утримання на активність α-глюкозидази у серійних зразках пацієнтів з Програми кріоконсервації сперми.
МАТЕРІАЛ І МЕТОД
Після консультацій та схвалення Комітетом з етики медичного факультету, за інформованою згодою, для цього дослідження були обрані донори серед студентів нашого університету та пацієнтів, які відвідували андрологічну поліклініку, виключаючи з неї суб'єктів із попередніми захворюваннями та статевим шляхом. Оцінку α-глюкозидази регулярно визначали у насінній плазмі у пацієнтів, які потребують кріоконсервації сперми.
Вплив α-хімотрипсину на активність α-глюкозидази. Зростаючі концентрації (від 0,1 до 10 мг/мл) α-хімотрипсину 18 додавали до насінних зразків плазми нормальних донорів (n = 6), які до аналізу підтримували при -20 ° C. Згодом активність α-глюкозидази визначали кількісно. Базове значення кожного донора було попередньо визначене і вважалось 100% для порівняння зі значеннями, отриманими із зразків, до яких додавали -хімотрипсин.
Моніторинг α-глюкозидази у серійно отриманих зразках насінної плазми. Серійні зразки відібрано у 9 пацієнтів за допомогою програми кріоконсервації сперми андрологічної лабораторії UFRO. Зразки були згруповані в три групи: № 1 відповідала абстиненції 2 дні, № 2 - 4 дні і № 3 - 6 днів від початку, але всі брали послідовно, таким чином, щоб між ними, утримання завжди відповідало 2 дням. Обробка насінної плазми проводилась, як описано раніше.
Визначення еталонних величин. У нормальних донорів за допомогою параметричних методів активність нейтральної ізоформи α-глюкозидази становила 14,52-25,9 мкУ/мл (= 19,32 мкО/мл; SD = 1,13; SEM = 0,16). Нормальний діапазон коливався між 15,85-23,46 мкУ/мл у випадку непараметричних методів (рис. 1).
Вплив протеолітичних ферментів. Застосування α-хімотрипсину у зростаючих концентраціях від 0,1 до 10 мг/мл не суттєво змінило активність α-глюкозидази (рис. 2). Враховуючи, що для розчинення насінної плазми у пацієнтів із порушеннями зрідження використовували концентрації, що перевищують рекомендовані (1 мг/мл) до 10 разів.
Аналіз насінної плазми надає важливу підтримку діагностиці різних патологій, які впливають на репродуктивну систему чоловіків 19. Кількісна оцінка присутності ферменту α-глюкозидази безпосередньо корелює з функцією епідидимісу. Отже, рівні, що перевищують референтні значення, будуть безпосередньо пов’язані з пацієнтами з інфекцією, а низькі рівні свідчать про обструкцію та агенезію сім’явивідних протоків із значеннями, близькими до тих, що представлені пацієнтами з вазектомією. Щоб правильно застосувати цю методику в клінічній лабораторії, необхідно було визначити нормальні референтні значення чилійської популяції. У 50 зразках добровольців з нормальним насіннєвим аналізом застосовували параметричний статистичний метод, який при малому розмірі вибірки 17 може бути застосовним до всієї досліджуваної сукупності. Результати, отримані за нормального середнього значення 19,32 мкЕ/мл (SD = 1,13; SEM = 0,16), були дуже схожими на ті, що описані для європейської популяції (20 мкЕ/мл) 16 .
Визначення α-глюкозидази в насінній плазмі забезпечує надійну інформацію про секреторний статус придатка яєчка і особливо замінює інвазивні методи оцінки цілісності транспорту сперми від придатка до передньої уретри, виключаючи або підтверджуючи обструктивні процеси. Аналогічним чином, його послідовне визначення може бути важливим для знання еволюції гострих запальних процесів, які порушують транспортний шлях сперми з точки зору її обструктивного ефекту або його дозволу після відповідної терапії.
Листування до: Професор, д-р Рауль Санчес Г, кафедра доклінічних наук, медичний факультет, Університет де Ла Фронтера; Коробка 54-D, телефон: (45) 325000; Факс: (45) 325777. Електронна пошта: [email protected], Темуко, Чилі.
Дякую
Автори висловлюють подяку професору доктору медичних наук Роберто Матаморосу з Школи ветеринарної медицини UCTEM за його цінну співпрацю в виданні англійською мовою.
ЛІТЕРАТУРА
1. Iusem N, Pineiro L, Blaquer J, Belocopitow E. Ідентифікація головного секреторного глікопротеїну з епідидимісу щурів: взаємодія зі сперматозоїдами. Biol Reprod 1989; 40: 307-16. [Посилання]
2. Бедфорд Дж. Статус та стан придатка яєчка людини. Хам-плей 1994; 9: 2187-99. [Посилання]
3. Guerin J. Ben Ben H, Cottinet D, Rollet J. Активність насіннєвої альфаглюкозидази як маркер патології епідидиму у незозоспермічних чоловіків, які консультуються на предмет безпліддя. J Андрологія 1990; 11: 240-5. [Посилання]
4. Kalla N, Kaur S, Ujwal N, Mehta U, Joos H, Frick J. Активність альфаглюкозидази в епідидимісі щурів за різних фізіологічних умов. Міжнародний. J Андрологія 1997; 20: 925. [Посилання]
5. Purvis K, Egdetveit I. Сегментний розподіл -глюкозидази, орнітиндекарбоксилази та поліамінів в епідидимісі людини. J Reprod родючість 1993; 97: 575-80. [Посилання]
6. Castellón E, Huidobro C. Андрогенна регуляція секреції глюкозидази в культурах епітеліальних клітин з епідидимісу людини. Хам-плей 1999; 14: 1522-7. [Посилання]
7. Tremblay R, Chapdeline P, Maihot J. Активність -1,4-глюкозидази в спермі людини: варіації кількості та рухливості сперматозоїдів. Родючість і стерильність 1979; 31: 592-3. [Посилання]
8. Paquin R, Chapdelaine R, Dubé J, Trembay R. Подібні біохімічні властивості насінної плазми людини та епідидимальної -1,4-глюкозидази. J Андрологія 1984; 5: 277-82. [Посилання]
9. Cooper T, Yeung C, Nashan D, Jockenhövel F, Nieschlag E. Поліпшення оцінки функції епідидиму людини за рахунок використання інгібіторів для аналізу альфа-глюкозидази в насінній плазмі. Міжнародний J Андрологія 1990; 13: 297-305. [Посилання]
10. Sandoval L, Díaz M, Rivas F. a -1,4- глюкозидазна активність та наявність клітини зародкового епітелію в спермі для диференціальної діагностики обструктивної та необструктивної азооспермії. Арка андрологія дев'ятнадцять дев'яносто п'ять; 35: 155-8. [Посилання]
11. Spiessens C, D 'Hooghe T. Wouters E, Meuleman C, Vanderschueren D. a -глюкозидазна активність у насінній плазмі: прогностичне значення для результату внутрішньоутробного запліднення та запліднення in vitro. Родючий стерил 1998; 69: 735-9. [Посилання]
12. Krause W, Bohring C. Чому ми визначаємо активність -глюкозидази в спермі людини під час обробки безпліддя?. Андрологія 1999; 31: 289-94. [Посилання]
13. Людвіг М, Куммель С, Шредер-Принтцен R-H, Вейднер В. Оцінка параметрів насінної плазми у хворих на хронічний простатит або лейкоцитоспернію. Андрологія 1998; 30: 41-7. [Посилання]
14. Peña P, Risopatrón J, Bizama R, Jorquera C, Henkel R, Miska W, Sánchez R. Кількісне визначення альфа-глюкозидази без кислотної ізоформи у безплідних пацієнтів. Вплив запалення на репродуктивні шляхи чоловіків. Родючий стерил 1998; 70 (доповнення) 1: R-497. [Посилання]
15. ХТО. Лабораторний посібник для дослідження взаємодії сперми людини та спермо-цервікального слизу. Кембриджський університет, 1992. [Посилання]
16. Chapdelaine P, Tremblay R, Dubé J. P-нітрофеніл-Dglucopyranoside як субстрат для вимірювання активності мальтази в спермі людини. Клінічна хімія 1978; 24: 208-11. [Посилання]
17. Генрі Р, Кеннон Д, Вінкельман Дж. Клінічна хімія, основи та методи. Том І, 2-е видання. Барселона: Редакційні фільми, 1980; 35365. [Посилання]
18. Кон, Юнг, Пфлігер-Брус, Еберль, Шилл, Шуппе, Гофман. Das Spermiogramm, Praktische Anleitungen. Zentrum fúr Dermatologie und Andrologie; Arbeitsgruppe Medizinasubildung. Justus-Liebig-Universitat Giessen. Gaffkystrasse 14, 35385 Гіссен. CD-ROM, (c) 1998. [Посилання]
19. ХТО. У Rowe PJ, Comhaire FH, Hargreave TB і Mellows HJ (ред.) Посібник зі стандартизованого дослідження та діагностики безплідної пари. Преса Кембриджського університету, Кембридж, Великобританія. 1993. [Посилання]
20. Zöpfgen A, Priem F, Sudhoff F, Jung K, Lenk S, Loening SA, Sinha P. Взаємозв'язок між якістю сперми та насінними компонентами плазми крові карнітином, а-глюкозидазою, фруктозою, цитратом та гранулоцитарною еластазою у безплідних чоловіків у порівнянні з нормальне населення. Хам-плей 2000; 15: 840-5. [Посилання]
21. Sanchez R. Peña P, Miska W, Henkel R. Визначення мінливості конденсації хроматину сперми та насінної α-глюкозидази щодо сперміограми. Преподобний Мед Чилі 2000; 128: 483-489. [Посилання]
Весь вміст цього журналу, крім випадків, коли він ідентифікований, підпадає під ліцензію Creative Commons
Бернарда Морін 488, Провіденсія,
Графа 168, пошта 55
Сантьяго, Чилі
Тел .: (56-2) 2753 5520