чорнила

  • реферат
  • Головний
  • МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
  • Догляд та утримання тварин.
  • Експеримент 1.
  • Експеримент 2.
  • Вимірювання вироблення грудного молока та споживання грудного молока.
  • Вимірювання концентрації лептину в молоці.
  • Вимірювання концентрації лептину в сироватці цуценят.
  • Компоненти туші (співвідношення жиру до білка).
  • Статистичний аналіз.
  • РЕЗУЛЬТАТИ
  • Вага тіла матері.
  • Виробництво молока та концентрація лептину.
  • Лептин сироватки бруньки.
  • Вага тіла та споживання молока.
  • Кореляційні дослідження.
  • Склад тіла молодняку ​​у віці 25 днів.
  • ОБГОВОРЕННЯ
  • глосарій

реферат

Неоптимальне середовище для розвитку нащадків має проблеми з обміном речовин протягом усього життя. Ми оцінили вплив низькобілкової дієти матері під час вагітності та/або годування груддю на кількість молока та концентрацію лептину в післяпологові дні 7, 14 та 21 день. Контрольні матері їли 20% казеїну (С) та обмежували матерям (Р) 10% казеїну до забезпечити чотири групи: CC, RR, CR та RC (перша буква вагітності та друга лактація) для оцінки наслідків материнського харчування під час вагітності та лактації. Молочний лептин не був визначальним фактором сироваткового лептину пуповини. Лептин у сироватці цуценят не пригнічував апетит у будь-якому післяпологовому віці. Сироватковий лептин пуповини не корелює з жировою тканиною. Нарешті, нормальне збільшення постнатального лептину в сироватці пуповини стримувалось через внутрішньоутробне недоїдання. Ці дані свідчать про те, що харчування плода змінює терміни росту лептину у новонароджених і може сприяти розвитку зміненого апетиту та метаболічних порушень у подальшому житті.

Головний

Епідіологічні дослідження на людях (1) та експериментальні дослідження на тваринах (2) показали, що неоптимальне середовище на колінах та раннє неонатальне життя змінює ріст та схиляє людей до проблем зі здоров’ям протягом усього життя. Вплив обмежень матері під час вагітності та/або лактації досліджували на багатьох різних моделях. Різні фенотипи росту, ендокринної та серцево-судинної системи є результатом обмеження харчування у різних вікнах розвитку. Перинатальне недоїдання призводить до ожиріння потомства у дорослому віці через зміни в процесі розвитку центральних нервових шляхів, опосередкованих механізмами регулювання, включаючи лептин (3). Швидке відставання після раннього обмеження росту збільшує ризик ожиріння та серцево-судинних захворювань у подальшому житті (4, 5).

Одним з найважливіших факторів новонародженості, що бере участь у програмуванні розвитку, є адекватність харчування під час лактації. Грудне вигодовування зменшує ризик ожиріння в пізньому дитячому віці (6). На подальший контроль апетиту може впливати багато факторів, включаючи склад грудного молока, вміст та кількість енергії. Грудне молоко містить гормон лептин (7), що виробляється і секретується в різних тканинах, особливо адипоцитами (8), які регулюють споживання їжі та витрату енергії на рівні гіпоталамуса у дорослих тварин (8, 9). Циркулюючий рівень лептину позитивно корелює із запасами жиру (10). У перші дні післяпологового життя рівні лептину вищі за рівні, що спостерігаються пізніше у процесі розвитку (11). Кілька досліджень продемонстрували збільшення вмісту лептину в післяпологові дні (PND) на 10-14 у щурів (11). Це збільшення пов’язане з дозріванням центральних нервових механізмів, які регулюють апетит пізніше в житті. Також лептин відіграє ключову роль у програмуванні структурного та функціонального розвитку оксигенних та анорексигенних центрів гіпоталамусу в ранньому постнатальному періоді.

Ми показали, що обмеження материнського білка у щурів під час вагітності або лактації змінює постнатальний ріст, смакову поведінку та рівень лептину через 110 днів після пологів (12). Ефекти програмування розвитку на цуценят залежать від статі потомства та періоду недоїдання. Тейшейра та ін. продемонстрували зміни рівня лептину під час лактації у цуценят, матері яких зазнали обмежень щодо вмісту білка та енергії (13). На відміну від наших даних (12), концентрація лептину в сироватці крові не змінювалась після відлучення. Цю невідповідність можна пояснити різницею у розмірі посліду, яка зберігалася під час годування груддю у цих дослідженнях.

Мало уваги приділяється тому, як різні режими обмеження дієти змінюють кількість та якість молока, доступного під час лактації. Повідомлялося про зв'язок між масою нащадків, зростанням нащадків та концентрацією лептину в молоці (14). Однак у чужорідних видів, де ранній постнатальний ріст лептину відіграє вирішальну роль у дозріванні смакових центрів головного мозку, важливо визначити, чи є лептин, відповідальний за цю ключову функцію дозрівання, фетального або материнського походження.

Ми оцінили вплив годування низькобілковою ізокалорійною дієтою під час вагітності та/або лактації на кількість молока та концентрації лептину молока, доступних для цуценят при PND 7, 14 та 21, щоб визначити, чи існує кореляція між концентраціями лептину у новонароджених порівняно з концентрацією лептину молока та загальним вмістом лептину молока, що надходить цуценятам для неонатального життя щурів.

МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

Догляд та утримання тварин.

Усі процедури були схвалені Комітетом з етики для експериментів на тваринах "Intituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición, Salvador Zubirán" (INCMNSZ), Мексика. Подробиці харчування матерів, розведення та управління чотирма групами потомства були детально опубліковані (15). Коротко кажучи, матері були незайманими самками щурів-альбіносів Wistar віком 11 ± 1 тижнів і вагою 240 ± 20 г, отриманих від INCMNSZ. Самки щурів з регулярними циклами утримувались на лабораторії Purina Chow 5001 та під контрольованим освітленням (освітлення з 7:00 до 19:00 при 22-23 ° C).

Самки щурів спарювались на ніч із сертифікованими заводчиками-самцями, і день, коли сперма була у вагінальному мазку, був призначений днем ​​зачаття, день 0. У дослідженні утримувались лише щури, які були вагітні протягом 5 днів після введення самців. окремі метаболічні клітини і випадковим чином розділені на одну з двох груп, яких годували або 20% казеїном (контрольна дієта-С), або 10% казеїнової ізокалорійної дієти (обмежена дієта-R) (16). Їжа та вода були доступні за бажанням .

Їжа подавалась у вигляді плоского печива, яке тримали за решіткою, за допомогою якої щури гризли їжу. На 20 день після пологів вагітних щурів переводили в нормальні клітини за оптимальних умов пологів, які відбувались на початку дня з 9 ранку до обіду 22 дня після зачаття. День народження вважався 0 післяпологовим життям.

Вага матері, розмір посліду та вага щенят реєструвались при народженні. Так, статева відстань вимірювалася круто. Згідно з нашими опублікованими даними (12), стать оцінювали відповідно до того, чи була відстань між статями меншою (для жінок) чи більшою (для чоловіків) 2,5 мм. Щоб забезпечити однорідність випробовуваних, в дослідження не було включено послідів, що перевищували 14 або до 12-ти. Послід з 12-14 дитинчат доводили до 12 дитинчат для кожної матері, підтримуючи найближче можливе співвідношення статі 1: 1. Було визначено чотири групи: КК, у яких матерів, які отримували контрольну дієту під час вагітності, продовжували годувати контролем дієта в період лактації.; RR, при якому матері, які отримували обмежену дієту під час вагітності, продовжували отримувати обмежену дієту під час лактації; CR, при якому матері, які отримували контрольну дієту під час вагітності, отримували обмежену дієту під час лактації; та RC, в якому матері, які отримували обмежену дієту під час вагітності, отримували контрольну дієту під час лактації. Після відлучення (PND 21) усіх цуценят годували дієтою С.

Експеримент 1.

Двадцять дві матері/посліди: CC (n = 5: 5, 6 ± 0, 4 самця/посліду, 6, 4 ± 0, 4 жінки/посліду), RR (n = 6: 5, 5 ± 0, 5 пс/підстилка, 6, 5 ± 0, 5 самка/підстилка), CR (n = 6: 5, 3 ± 0, 7 самців/підстилка, 6, 7 ± 0, 7 самка/підстилка) та RC (n = 5: 6, 2 ± 0, 2 самці/підстилка, 5, 8 ± 0,2 самки/підстилка) досліджувались на виробництво грудного молока та вигодовування грудного молока. Для визначення компонентів туші випадково використовували двох цуценят чоловічої та двох жіночих особин на підстилку. Попередній аналіз відмінностей за статтю щеня не виявив ніяких відмінностей, і тому були зібрані всі дані.

Експеримент 2.

Вісімдесят матерів та плід, n = 5 для вікової групи, використовувались для вивчення концентрацій грудного молока та сироваткового лептину у цуценят. Випадково для визначення лептину в сироватці крові використовували двох самців та дві самки/посліди за вік, за винятком потомства від PND 2, в якому використовували всіх щенят кожної статі на підстилку (n = 4-8 цуценят/стать) та брали інтерв'ю . У цьому віці не було відмінностей у сироватці лептину в сироватці крові, тому ми усереднили дані щодо чоловіків та жінок.

Вимірювання вироблення грудного молока та споживання грудного молока.

О 7:00, 14 та 21 о 7:00. Цуценят вилучали у матерів протягом 4 годин, протягом яких матері харчувались за бажанням, тоді як щенят не годували. Цуценята були позначені постійним маркером на хвості. Матерів зважували на початку та в кінці 4-годинного періоду. Щенят зважували індивідуально безпосередньо перед поверненням їх матерям і знову через 1 годину.

Як обговорювалося нижче, для обґрунтування наближення приросту маси тіла для виробництва молока було використано чудову кореляцію між збільшенням ваги матері та щенят. Відносне споживання молока розраховували з абсолютного споживання їжі/маси тіла щеняти.

Вимірювання концентрації лептину в молоці.

Молоко отримували на PND 7, 14 і 21. Цуценят відбирали у матерів протягом 4 годин, після чого матері отримували 0,8 U окситоцину (ip), а молоко зціджували через 15 хвилин. Зразки вихрово перемішували, аликвотували і заморожували при -20 ° C до аналізу. Зразки молока розморожували при температурі 37 ° C перед піпетуванням і ретельно перемішували перед піпетуванням, щоб забезпечити однорідність зразків. Концентрацію лептину молока визначали RIA з використанням комерційного набору для щурів від Linco Research, Inc. з межею виявлення 0,5 нг/мл з використанням зразка 100 мкл. Зразки молока аналізували в двох примірниках.

Вимірювання концентрації лептину в сироватці цуценят.

О 7:00 ранку у матерів протягом 4 годин забирали 7, 14 і 21 щенят, протягом яких щенят не годували. Всі зразки були отримані від щурів, що голодували, щоб уникнути варіації лептину. Нащадки у віці 2 днів не постили. Між 11:00 і 12:00, щенят було швидко вбито обезголовленням за допомогою гільйотини гризунів (Thomas Scientific, NJ). Кров туші збирали в поліетиленові пробірки і давали їй згортатися при 4 ° С протягом 1 години. Зразки крові центрифугували при 1500 g протягом 15 хвилин при 4 ° C. Зразки сироватки витримували при -20 ° C до тестування. Концентрації лептину у юнацьких сироватках визначали RIA за допомогою комерційного набору для щурів від Linco Research, Inc. Кожен зразок сироватки тестували двічі.

Компоненти туші (співвідношення жиру до білка).

У віці 25 днів щурів швидко приносили в жертву, як описано вище, і тримали замороженими в невеликих поліетиленових пакетах до аналізу. Голови та шлунково-кишковий тракт були виключені з дитинчат і не були включені в аналіз. Після зважування (волога вага) кожну половину тушки розрізали на невеликі шматочки, поміщали в тарований склянку і сушили при 60 ° C до постійної ваги. Втратою ваги вважається вага води. Висушені тіла подрібнювали і брали аликвоти. Жир визначали гравіметрично випаровуванням розчинника з аликвоти екстракту гексан-ізопропанолу методом Сокслета та загального азоту методом Кельдаля (17).

Статистичний аналіз.

Дані тварин, які підстилають послідовність, усереднювали, а аналіз проводили лише на підставі посліду. Усі дані представлені як середнє значення ± стандартна похибка середнього значення. Статистичний аналіз проводили за допомогою ANOVA з подальшим тестом Тукі. Тест непарного t також використовувався для порівняння даних чоловіків та жінок. Кореляція вироблення грудного молока, споживання грудного молока, лептину сироватки крові молодих та неповнолітніх та ваги щенят розраховувались за допомогою кореляції Пірсона. стор

Лептин сироватки бруньки. Середнє значення ± SEM, n = 5 літрів окремих горіхів. * Максимальне значення лептину в одній і тій же групі, р 0,05), навіть коли всі групи та різні дні були об'єднані (r = 0,04, p = 0,7). Співвідношення лептину та лютеїну з молочного молока в Чехії було вищим, ніж у СК, у всіх вікових групах (с

Споживання грудного молока як функція виробництва молока на (A) PND 7 (r = 0, 14, p = 0, 6), (B) 14 (r = 0, 8, p

Лептин у сироватці пуповини у залежності від прийому молока (A) CC (r = 0, 3, p = 0, 3), (B) RR (r = 0, 003, p = 0, 9), (C) CR (r = 0, 1, p = 0, 7), (D) RC (r = 0, 5, p = 0, 07) та (E) усі групи та дні (r = 0, 3, p = 0, 01). Середнє значення ± SEM, n = 5 літрів.

Повнорозмірне зображення

Існувала позитивна кореляція між абсолютним споживанням молока (г/год) та масою тіла щенят (г) у групах CC, CR та RC при PND 7, 14 та 21 (p

Маса тіла дитинчат (A) як функція абсолютного споживання молока: CC (r = 0, 76, p = 0, 001), RR (r = 0, 28, p = 0, 3), CR (r = 0, 9, с

Склад нащадків тіла (співвідношення жиру до білка) на чоловіках PND 25 (чорна лінія) та жінках (біла лінія). Середнє значення ± SEM, n = 5 літрів. p PND