шлунково-кишкового

В
В 		В

Мій SciELO

Індивідуальні послуги

Журнал

  • SciELO Analytics
  • Google Scholar H5M5 ()

Стаття

  • Іспанська (pdf)
  • Стаття в XML
  • Посилання на статті
  • Як цитувати цю статтю
  • SciELO Analytics
  • Автоматичний переклад
  • Надішліть статтю електронною поштою

Показники

  • Цитується SciELO
  • Доступ

Пов’язані посилання

  • Процитовано Google
  • Подібне в SciELO
  • Подібне в Google

Поділіться

Аннали системи охорони здоров’я Наварри

друкована версія В ISSN 1137-6627

Anales Sis San NavarraВ т.29В No3В ПамплонаВ Вересень/Грудень 2006

ОРИГІНАЛЬНІ ТОВАРИ

Модуляція фізіології шлунково-кишкового тракту пробіотичними штамами Lactobacillus casei та Bifidobacterium bifidum

Модуляція фізіології шлунково-кишкового тракту за допомогою пробіотичних штамів Lactobacillus casei та Bifidobacterium bifidum

J. Barrenetxe 1, P. Aranguren 1, A. Grijalba 2, J.M. Мартнез-Пегюела 3, Ф. 1 березня та Е. Урданета 1

1. Лабораторія фізіології та харчування. Кафедра наук про природне середовище. Державний університет Наварри. Памплона.
2. Служба біохімії. Наваррська лікарня. Памплона.
3. Патологоанатомічна служба. Наваррська лікарня. Памплона.

Цей дослідницький проект фінансується за рахунок гранту Ортіс де Ланджурі від Департаменту охорони здоров’я уряду Наварри.

Ключові слова. Пробіотичні штами. Кишечник. SGLT1. PEPT1.

Ключові слова. Пребіотичні штами. Кишечник. SGLT1. PEPT1.

Вступ

Отже, метою даної роботи є вивчити, чи вживання дієт, доповнених кожним із цих пробіотиків (L. casei або B. bifidum) впливає на розвиток тварин і особливо на роботу кишечника, зокрема імунної, травної та абсорбційної. Ці результати будуть визначальними для того, щоб згодом використовувати ці мікроорганізми як терапію в різних патологічних ситуаціях.

Отримання та вирощування штамів бактерій

Тварини та дієти

Швейцарських мишей (Charles River Laboratory Animals, Барселона) протягом 28 днів та 20 г початкової маси тіла випадковим чином розподіляли у кожній з трьох експериментальних груп (n = 30-20): контроль (C), Bifidobacterium bifidum (B) та Lactobacillus casei (L). Їх поміщали в клітки (n = 5) у приміщенні з постійною температурою (22 ± 2 ° C) та вологістю та контрольованим фотоперіодом 12 год світла та 12 год темряви.

Гістологічний аналіз

Зразки товстої кишки, зібрані для гістологічного дослідження, негайно фіксували у 4% формаліні протягом 24 годин. Потім їх зневоднювали і після їх включення в парафін розрізали на шматки по 5 мм і фарбували в гематоксилін-еозин для подальшого мікроскопічного аналізу.

Отримання мишачого кишечника VMBC

Слизову оболонку ресуспендували в середовищі, що містить 100 мМ манітолу та 2 мМ N-2-гідроксиетилпіперазин-НВ'-2-етансульфонову кислоту (HEPES) при рН 7,1 за допомогою трис-гідроксиметил-амінометану. Суспензію гомогенізували в гомогенізаторі Поттера-Ельвехема (Браун, Мельсунген, Німеччина) при 3000 об/хв при 4 ° С протягом 1 хв. Потім додавали MgCl2 до кінцевої концентрації 10 мМ, і суміш інкубували протягом 20 хв на холоді та безперервному перемішуванні. Згодом його центрифугували при 2000 x g протягом 15 хв, а супернатант збирали і центрифугували при 27000 x g протягом 30 хв. Отриману таким чином гранулу ресуспендували в середовищі, утвореному 100 мМ манітолом, 0,1 мМ сульфатом магнію та 2 мМ HEPES при рН 7,4 за допомогою Tris.

Нарешті, суміш центрифугували при 27000 х g протягом 30 хв і гранулу ресуспендували в середовищі, що містить 300 мМ манітолу, 0,1 мМ сульфату магнію та 10 мМ HEPES при рН 7,4 з Tris.

Отриману таким чином суспензію використовували для визначення Бредфордом кількості присутнього білка та вимірювання активності сахарази (EC3.2.1.48), щоб перевірити його збагачення в апікальній мембрані, що, як виявилося бути в 5 разів порівняно з вихідним гомогенатом.

Ферментна активність

Дослідження поглинання субстрату

Поглинання D-галактози визначали при 37 ° С за наявності градієнта натрію. Інкубаційне середовище, яке використовувалось при рН 7,4, складалося з 0,1 мМ D-галактози, 100 мМ NaSCN, 100 мМ манітолу, 0,1 мМ MgSO4, 10 мМ HEPES та радіоактивного субстрату, використовуваного як індикатор (1 мКі/мл D- [1-14 С ] галактоза; Радіохімічний центр Амершем, Великобританія).

Аналіз експресії білка вестерн-блот

Експресію транспортерів PEPT1 та SGLT1 у VMBC різних експериментальних груп вимірювали за допомогою вестерн-блот. Зразки розбавляли у середовищі, що складалося з 50 мМ трис-HCl, рН 6,8, 2% SDS, 10% гліцерину, 5% 2-меркаптоетанолу та 0,05% бромофенольного синього. Після кип'ятіння протягом трьох хвилин їх завантажували (50 мкг) у 12% поліакриламідний гель та розділяли електрофорезом протягом 60 хв. Потім відокремлені білки переносили в нітроцелюлозну мембрану (Hybond P., Amersham ? Pharmacia Biotech, Барселона) електрофорезом при 250 мА/100 В і 4 ° С протягом 2 год.

Статистичний аналіз

Результати виражаються як середнє значення ± ESM. Для статистичного аналізу була використана програма SPSS (версія 12.0) та застосовано тест Крускала Уолліса з відповідними порівняннями апостеріор. Відмінності між групами вважали статистично значущими, коли p

Розвиток тварин

Включення обох штамів пробіотиків до звичного раціону тварин не змінює ваги їх тіла, вказуючи на те, що це не робить жодного шкідливого впливу на розвиток цих тварин. Крім того, не спостерігалося різниці в вимірюваних параметрах крові або у вазі різних органів, що витягуються (тонка кишка, печінка, селезінка, підшлункова залоза та товста кишка).

Тому ми можемо зробити висновок, що споживання Lactobacillus casei Y Bifidobacterium bifidum це не змінює нормальний ріст і розвиток цих тварин, ані їх метаболічний стан.

Морфологія кишечника

Ці факти вказують на те, що обидва штами можуть чинити активізуючий ефект на імунну систему кишечника.

Поглинання поживних речовин та ферментативна активність у VMBC

Проаналізовано вплив доповнених дієт на фізіологію кишечника цих тварин. Як показано на малюнку 3, у всіх проведених тестах ферментативної активності (сахараза, мальтаза та амінопептидаза N) ця активність виявляється підвищеною. У випадку активності мальтази та амінопептидази N, це збільшення є чіткішим у групі, якою харчуються Біфідобактерії що в годується с Лактобактерії.

Аналіз експресії SGLT1 та PEPT1 за допомогою вестерн-блот

Фігура 5 демонструє чітке збільшення експресії транспортера PEPT1 у групах B та L порівняно з контрольною групою. Отже, здається, що спостережуване збільшення поглинання гліцилсаркозину могло бути зумовлене збільшенням експресії транспортера, відповідального за згадане поглинання.

В останні роки численні дослідження проаналізували роль пробіотичних мікроорганізмів (кислотно-електролектичних бактерій та дріжджів) у розвитку різних хронічних захворювань (рак, алергія ...), доводячи, що вони мають сприятливий ефект у їх профілактиці 34,35 .

У цій роботі про вплив двох штамів пробіотиків (кислотно-електролектичних бактерій), які зазвичай використовуються в харчовій промисловості (Lactobacillus casei Y Bifidobacterium bifidum) у розвитку та фізіології кишечника здорових тварин. Кишковий бар’єр відповідає за регулювання надходження в організм поживних речовин та різних речовин, що впливатиме на харчовий статус людини, правильне підтримка якого має життєво важливе значення для запобігання розвитку різних захворювань.

Вибір концентрації бактерій, що використовується в цьому дослідженні, а також тривалість експериментального періоду базується на попередніх наукових дослідженнях 36,37 .

Експресія обох транспортерів чутлива до дієти 41-43, отже більша експресія їх може бути обумовлена ​​більшою присутністю їх відповідних субстратів у просвіті кишечника. Цей факт, в свою чергу, може бути обумовлений більшою здатністю травлення кишечника через збільшення його ферментативної активності, як описано раніше.

На закінчення здається, що обидва штами бактерій змінюють активність тонкої кишки у здорових тварин, підвищуючи їх імунну та ферментативну активність, а також змінюючи засвоєння поживних речовин. Ці факти не впливають на нормальний розвиток цих тварин, оскільки не спостерігається різниці в біохімічних параметрах, що аналізуються, або в масі їх тіла.

У цьому сенсі це дослідження сприяє безпечним рекомендаціям щодо використання цих штамів у здорових тварин і вказує на корисну роль для них при захворюваннях, що вражають шлунково-кишковий тракт.

Бібліографія

1. Уорнер, М. Маркетинг збагачених продуктів харчування тим, хто страждає від наркотиків. 2005 рік; Нью-Йорк Таймс. 28 грудня 2005 р. [Посилання]

2. Родггез, А. Комори перетворюються на аптеки. Світ XXI століття, 7 січня 2006 р. [Посилання]

3. EPIC. Європейське перспективне дослідження раку та харчування. Eur J Clin Nutr 2005; 59: 1387-1396. [Посилання]

4. Гуарнер Ф. та Малагелада-молодший. Кишкова флора у стані здоров’я та хвороб. Lancet 2003; 360: 512-519. [Посилання]

5. Saarela M, L'hteenm¤ki, L, Crittenden R, Salminen S, Mattila-Sandholm T. Кишкові бактерії та харчові продукти - європейська перспектива. Int J Food Microbiol 2002; 78: 99-117. [Посилання]

6. Шанахан Ф. Інтерфейс господаря-мікроба в кишечнику. Best Practice & Res Clin Gastroenterol 2002; 16: 915-931. [Посилання]

7. TlaskalovÃ--Hogenovà H, Sà - teG - pÃЎnkovÃЎa R, Hudcovic T, Tuà - ckovà L, Cukrowska B, LodinovÃГ-ZG - GdnGkovG R et al. Коменсальні бактерії (нормальна мікрофлора), імунітет слизової та хронічні запальні та аутоімунні захворювання. Імунологічні листи 200; 93: 97-108. [Посилання]

8. Бенгмарк С. Імуноживлення: роль біоповерхнево-активних речовин, клітковини та пробіотичних бактерій. Харчування 1998; 14: 585-594. [Посилання]

9. Філпотт М, Фергюсон Л.Р. Імуноживлення та рак. Mut Res 2004; 551: 29-42. [Посилання]

10. Ferguson LR, Philpott M, Karunasinghe N. Дієта раку та профілактика з використанням антимутагенів. Токсикологія 2004; 198: 147-159. [Посилання]

12.Kwak NS, Jukes DJ. Функціональні продукти харчування. Частина 1: розробка регуляторної концепції. Food Control 2001; 12: 99-107. [Посилання]

13 Salminen S, Ouwehand AC, Isolauri E. Клінічне застосування пробіотичних бактерій. Intern Dairy J 1998; 8: 563-572. [Посилання]

14.Hirayama K, Rafter J. Роль пробіотичних бактерій у профілактиці раку. Мікроби Infect 2000; 2: 681-686. [Посилання]

15. Kopp-Hoolihan, L. Профілактичне та терапевтичне використання пробіотиків: огляд. J Am Diet Assoc 2001; 1012: 229-241. [Посилання]

16. Marteau P, Seksik P, Jian R. Пробіотики та здоров'я: нові факти та ідеї. Curr Opin Biotechnol 2002; 13: 486-489. [Посилання]

17. Kaur IP, Chopra K, Saini A. Пробіотики: потенційні фармацевтичні програми. Eur J Pharmac Sci 2002; 15: 1-9. [Посилання]

18. Вагнер Р.Д., Баліш Е. Потенційна небезпека пробіотичних бактерій для імунодефіцитних пацієнтів. Бустер Інстер Пастер 1998; 96: 165-170. [Посилання]

20. Klein G, Pack A, Bonaparte Ch, Reuter G. Таксономія та фізіологія пробіотичних молочнокислих бактерій. Int J Food Microbiol 1998; 41: 103-125. [Посилання]

21.Rafter J. Пробіотики та рак товстої кишки. Найкраща практика та дослідження клінічної гастроентерології 2003; 17: 849-859. [Посилання]

22. Шанахан Ф. Пробіотики при запальних захворюваннях кишечника. Gut 2001; 48: 609. [Посилання]

23 Кіржавайнен П.В., Ель-Незамі Х.С., Салмінен С.Дж., Ахогас Дж.Т., Райт ПФА. Вплив життєздатних пробіотиків та молочних лактобактерій, що вводяться перорально, на проліферацію лімфоцитів миші. FEMS Immunol Med Microbiol 1999; 26: 131-135. [Посилання]

24. Kitazawa H, Ueha S, Shihoko Itoh S, Watanabe H, Konno K, Kawai Y et al. AT-олігонуклеотиди, що індукують активацію В-лімфоцитів, існують у пробіотику Lactobacillus gasseri. Int J Food Microbiol 2001; 65: 149-162. [Посилання]

25 Lee JW, Shin JG, Kim E, Kang H, Yim IB, Kim J et al. Імуномодулюючі та протипухлинні ефекти in vivo цитоплазматичною фракцією Lactobacillus casei та Bifidobacterium longum. J Vet Sci 2004 5; 41-48. [Посилання]

26. Kitazawa H, Ino T, Kawai Y, Itoh T, Saito T. Новий імуностимулюючий аспект Lactobacillus gasseri: індукція "Гассерокіну" як хемоаттрактантів для макрофагів. Int J Food Microbiol 2002; 77: 29-38. [Посилання]

27 Dubuquoy L, Jansson EA, Deeb S, Rakotobe S, Karoui M, Colombel JF. Порушення експресії гамма-рецептора, активованого пероксисом проліферактором, при виразковому коліті. Гастроентерологія 2003; 124: 1538-1542. [Посилання]

28. Ви HJ, Oh DK, Ji GE. Антиканцерогенна дія нового полісахариду, що містить хіроінозитол, від Bifidobacterium BGN 4. FEMS Microbiol Lett 2004; 240: 131-136. [Посилання]

29.Irigoyen A, Arana I, Castiella M, Torre P, Ibà ± ez FC. Мікробіологічні, фізико-хімічні та сенсорні характеристики кефіру при зберіганні. Food Chem 2005; 90: 613-620. [Посилання]

30. Shirazy-Beechey SP, Davies AG, Tebbut K, Dyer J, Ellis A, Taylor CJ et al. Препарат та властивості везикул мембранної щітки з тонкої кишки людини. Gastroenterol 1990; 98: 676-685. [Посилання]

31. Далквіст, А. Метод аналізу кишкових дисахаридаз. Annal Biochem 1964; 7: 18-25. [Посилання]

32. Andria G, Cucchiara S, De Vizia B, De Ritis G, Masaka G, Aurichio S. Щітка кордону та цитозольпептидазна активність тонкої кишки людини у нормальних суб’єктів та хворих на целіакію. Pediatr Res 1980; 14: 812-818. [Посилання]

33. Hopfer U, Sigrist-Nelson K, Perotto J, Murer H. Транспорт кишкового цукру: дослідження з ізольованими плазматичними мембранами. Ann NY Acad Sci 1975; 264: 414-427. [Посилання]

34. Ezendan J, van Loveren H. Пробіотики: імуномодуляція та оцінка безпеки та ефективності. Nutr Rev 2006; 64: 1-14. [Посилання]

35. Mc Garr SE, Ridlon JM і Hylemon PB. Дієта, анаеробний бактеріальний метаболізм та рак товстої кишки: огляд літератури. J Clin Gastroenterol 2005; 39: 98-109. [Посилання]

36 Neudeck BL, Loeb JM, Faith NG. Lactobacillus casei змінює опосередковане hPEPT1 опосередковування гліцилсаркозину в клітинах Caco-2. J Nutr 2004; 134: 1120-1123. [Посилання]

37. Roller M, Rechkemmer G, Watzl B. Пребіотичний інулін, збагачений олігофруктозою, у поєднанні з пробіотиками Lactobacillus rhamnosus та Bifidobacterium lactis модулює кишкові імунні функції щурів. J Nutr 2004; 134: 153-156. [Посилання]

38. Лінія постійного струму. Пробіотики як функціональна їжа. Nutr Clin Pract 2003; 18: 497-506. [Посилання]

39. Yasui H, Ohwzki M. Посилення імунної відповіді в клітинах пластиру Пейєра, культивованих Bifidobacterium breve. J Dairy Sci 1991; 74: 1187-1195. [Посилання]

40. Commane DM, Shortt CT, Silvi S, Cresci A, Hughes RM, Rowland IR. Вплив продуктів ферментації про- та пребіотиків на трансепітеліальну резистентність у моделі інтровіру товстої кишки. Nutr Cancer 2005; 51: 102-109. [Посилання]

41 Shiraga T, Miyamoto K, Tanaka H, ​​Yamamoto H, Taketani Y, Morita K. Клітинні та молекулярні механізми дієтичної регуляції на кишковий H +/пептидний транспортер щурів PepT1. Гастроентерологія 1999; 116: 354-362. [Посилання]

42.Адібі С.А. Регулювання кишкового транспортера олігопептидів (Пепт-1) у стані здоров'я та хвороб. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2003; 285: G779-G788. [Посилання]

43. Феррарі РП. Дієтичне регулювання розвитку кишкового транспорту цукру. Biochem J 2001; 360: 265-276. [Посилання]

44. Ян СК, Чень Й.Й., Шан Х.Ф., Ченг Т.Ю., Цоу СК, Чень МР. Вплив синбіотиків на мікрофлору кишечника та активність травних ферментів у щурів. World J Gastroenterol 2005; 11: 7413-7417. [Посилання]

45. Demirer S, Aydintug S, Aslim B, Kepenecki I, Sengul N, Evirgen O et al. Вплив пробіотиків на радіаційно-індуковану травму кишечника у щурів. Харчування 2006; 22: 179-186. [Посилання]

46. ​​Dock DB, Aguilar-Nascimento JE, Latorraca MQ. Пробіотики посилюють відновлення атрофії кишечника при експериментальному недоїданні. Biocell 2004; 28: 143-150. [Посилання]

47 Smirnov A, Perez R, Amit-Romach E, Sklan D, Uni Z. Динаміка муцину та мікробна популяція в тонкому кишечнику курки змінюється за допомогою дієтичних добавок пробіотиків та стимулювачів росту антибіотиків. J Nutr 2005; 135: 187-192. [Посилання]

48 Barrenetxe J, Aranguren P, Grijalba A, Martínez-Pe ± uela JM, Marzo F, Urdaneta E. Вплив дієтичного кверцетину та сфінгомієліну на поглинання кишкових поживних речовин та ріст тварин. Br J Nutr 2006; 95: 455-461. [Посилання]

Адреса для листування
Доктор Олена Урданета
Відділ наук про природне середовище
Державний університет Наварри
Кампус ArrosadГa с/н
31006 Памплона
Телефон 948 168470
Факс: 948 168930
Електронна адреса: [email protected]

В Весь вміст цього журналу, крім випадків, коли він ідентифікований, перебуває під ліцензією Creative Commons