Одним з найважливіших компонентів окисно-відновного гомеостазу в клітинах є глутатіон. Відповідне співвідношення окислювально-відновних речовин тіол/дисульфід допомагає регенерувати інші антиоксиданти, захищає від окисного стресу, і його наявність має важливе значення для утворення внутрішньоланцюгових та міжцепочкових дисульфідних містків у білках, а отже, для згортання білка в просвіті ендоплазматичного ретикулуму (ER). Співвідношення відновленого (GSH) до окисленого (GSSG) глутатіону також залежить від типу зразка (тканини, крові, сироватки, культури клітин тощо), а також стану органел та окислювально-відновного складу. Клітинне співвідношення коливається в широких межах. Цитозольний коефіцієнт зазвичай коливається між 30: 1 і 100: 1, але через специфічний окисно-відновний гомеостаз у просвіті ER співвідношення набагато нижче, коливається від 1: 1 до 3: 1. Правильні пропорції окисно-відновних пар є важливими для нормального функціонування клітин, тому точна кількісна оцінка та пропорція є важливими для біохімічного дослідження.
Проблемою для аналізу є, з одного боку, невелика кількість доступної проби, а з іншого боку, нестабільність вимірюваних речовин. Загальновизнаним методом вимірювання є те, що кількість GSSG визначається не прямо, а опосередковано. Загальна кількість GSSG перетворюється на GSH, а кількість GSSG випливає із збільшення рівня GSH. Нашою метою було розробити метод, коли обидва члени окислювально-відновлювальної пари можуть бути визначені безпосередньо та одночасно. Для цього було обрано метод ВЕРХ-МС/МС. Враховуючи, що чутливість цих приладів може змінюватися під час вимірювання, особливо у випадку складних біологічних матриць, нам також потрібен був правильно підібраний внутрішній стандарт. Для цієї мети було обрано метил GSH.
Спочатку метод перевіряли шляхом зміщення співвідношення GSH/GSSG хімічними методами (окислення трет-бутилгідропероксиду та відновлення дитиотреїтолу) та перевіряли, чи результати, отримані нашим методом, відповідають вимогам матеріального балансу (одна з речовин, чи відповідає швидкість втрати ваги відповідає швидкості росту іншої речовини). Цей контроль також проводили на зразках мікросом і клітин.
Оскільки вільні концентрації вільних жирних кислот можуть спричинити значний окислювальний стрес у клітинах (ліпотоксичність), ми поширюємо наші дослідження на зразки, оброблені різними жирними кислотами, де метою є відстеження змін окислювально-відновного статусу глутатіону.