Int. J. Morphol., 30 (2): 432-438, 2012.

Порівняльне дослідження між консервативними розчинами з формалолом та без нього в плаценті людини

Порівняльне дослідження консервативних розчинів із формальдегідом та без нього в плаценті людини

* Даніель Вольф; * Пабло Вілла; * Алехандра Ніррейтер; * Сесілія Руйбал; * Густаво Арманд Угон; ** Гільєрмо Сальгадо & ***, **** Маріо Кантін

* Кафедра анатомії, медичний факультет, Університет республіки, Монтевідео, Уругвай.

** Кафедра нормальної анатомії, медичний факультет, Університет Понтифіції, Чилі, Сантьяго, Чилі.

*** Кафедра комплексної стоматології Стоматологічного факультету Університету де Ла Фронтера, Темуко, Чилі.

**** Доктор морфологічних наук, медичний факультет, Університет де Ла Фронтера, Темуко, Чилі.

КЛЮЧОВІ СЛОВА: плацента; Анатомічні прийоми; Фіксуючий розчин; Формол; Без формаліну.

КЛЮЧОВІ СЛОВА: плацента; Анатомічні прийоми; Фіксуючий розчин; Формальдегід; Без формальдегіду.

ВСТУП

Методи анатомічної фіксації та збереження призначені для того, щоб зробити тканини стійкими та захистити їх від погіршення стану. Ці методи були фундаментальними для вивчення анатомії людини та ветеринарії, використовувались для лікування різних органів та внутрішніх органів з навчальною, академічною та дослідницькою метою. Ось чому протягом історії шукали речовини, які, наскільки це можливо, підтримують природний стан організму або органів (Busdamente et al., 2007).

Рівера та ін. заявили, що методи консервації на основі формальдегіду, що застосовуються в області анатомії багатьох університетів, не є найбільш доцільними, оскільки вони мають такі недоліки для оброблених частин, як більша жорсткість, втягнення обсягу органів та втрата природний колір (Гільдебранд).

В якості альтернативної техніки фіксації та збереження структур був розроблений метод Прівеса, створений в лабораторії анатомії Першого Ленінградського медичного інституту, в основі якого лежить принцип, що високогігроскопічна речовина, така як гліцерин, постійно захоплює воду з атмосфера, яка оточує шматок, тому він не втрачає вагу, зберігає об’єм і набуває м’яку консистенцію, ацетат калію служить консервантом та регулятором кислотності, тоді як тимол характеризується своєю дезінфікуючою силою та фунгіцидом (Correa, 2005).

Макроскопічне дослідження плаценти людини має велике значення для навчання та анатомічних досліджень та підготовки зразків до гістологічних досліджень (Bustamante та ін.), А також для його клінічного дослідження, особливо коли є ускладнення під час вагітності, пологів або пологів. В останніх випадках плацента регулярно фіксується зануренням у нейтральні 3,7% або 4,0% утворені розчини (Fox et al., 1999).

Відповідно до описаного фону бажано використовувати розчини без формальдегіду для фіксації та збереження анатомічних структур. Метою цієї роботи було порівняння двох методів анатомічного збереження, одного з формальдегідом (розчин Монтевідео), а іншого без формальдегіду (метод Прівса), використовуючи плаценту людини як експериментальний орган, що оцінює макроскопічні параметри.

Матеріал і метод

Було використано 46 поодиноких плацент людини від нормальних пологів та доношеної вагітності середньою вагою більше 400 г, отриманих від Служби материнства лікарні Перейра Росселл у Монтевідео, Уругвай. Плаценти негайно піддавали промиванню судин за допомогою канюляції та фіксації канюль венозним шляхом, і їх промивали водою під постійним тиском до повного очищення судин.

Плаценти були розділені на дві групи. Перша група плацент (n = 22) була протрушена контрольованим тиском венозним шляхом розчином Монтевідео, який містить: воду (70%), формальдегід (15%), метиловий спирт (5%), етиловий спирт (5%), гліцерин (2,5%), фенілова кислота (1%) та нітрат калію (1,5%). Друга група плацент (n = 24) була перфузована розчином методу Прівеса, що містить гліцерин (45%), ацетат калію (10%), воду (40%) і тимол (5%). Обидві інфузії проводили вручну.

Потім кожну групу плаценти занурювали у відповідний розчин для збереження на 2 тижні у закритий контейнер при кімнатній температурі. Кількість розчину визначали за обсягом шматочка (плаценти), щоб вони були повністю занурені в розчин, поклавши на них тягар, щоб запобігти їх плаванню. Після закінчення часу їх виймали з розчину і залишали на повітрі при кімнатній температурі ще на 2 тижні.

Кількісні змінні маси та діаметра плаценти аналізували в кожному з фрагментів, а також якісні змінні консистенції, кольору, запаху та росту мікро- та макроорганізмів. Консистенцію оцінювали з точки зору 1) нормальної або свіжої; 2) еластичний або злегка твердий; і 3) тверді або гумові. Колір класифікували як 1) натуральний, 2) темно-червоний, 3) коричневий і 4) темно-коричневий. Запах класифікували як 1) без запаху; 2) незначний запах; 3) слабкий запах і 4) подразнюючий запах. Щодо зростання макро- та мікроорганізмів, то на деяких поверхнях плаценти спостерігали наявність або відсутність макроколоній.

Збір даних проводився до миття, через 14, 21 та 28 днів. Отримані дані були введені оператором у шаблон Excel. Описовий статистичний аналіз проводили за допомогою програмного забезпечення Graphad 4.0.

Результати

Перед промиванням та фіксацією група плацент, що підлягали обробці розчином формальдегіду, мала середню масу 567,72 г, діаметр яких перевищував 20,27 ± 1,508 см (середнє значення, SD) (діапазон від 18 до 23 см), тоді як найменший діаметр спостерігалося 18,57 ± 1,561 (діапазони 15 і 21 см). Плаценти, які підлягали обробці розчином без формальдегіду, мали середню масу 641,35 г, більший діаметр 20,46 ± 1,911 см (діапазон між 18 і 26 см), тоді як менший діаметр становив 18,63 ± 1,657 см (діапазон між 16,5 і 22 см ) (Таблиця I).

На 14 день плаценти, оброблені розчином формальдегіду, мали середню масу 465,56, з більшим діаметром 19,84 ± 1,451 см (діапазон між 17 і 22 см), тоді як найменший діаметр становив 18,30 ± 1777 см (діапазон між 14 і 21 см) . Плаценти, оброблені розчином без формальдегіду, мали середню масу 530,02 г, більший діаметр 19,83 ± 1,771 см (діапазон від 17 до 24,5 см), тоді як менший діаметр становив 18,21 ± 1,641 (діапазон між 16 і 22,5 см) ( Таблиця I).

На 21 день плаценти, оброблені розчином формальдегіду, мали середню масу 467,56, діаметр яких перевищував 18,95 ± 1,558 см (діапазон між 16 і 21 см), тоді як найменший діаметр становив 17,66 ± 1,606 см (діапазон між 14,5 і 20 см) . Плаценти, оброблені розчином без формальдегіду, мали середню масу 532,40 г, більший діаметр 19,10 ± 1,452 см (діапазон між 16 і 22,5 см), тоді як менший діаметр становив 17,38 ± 1,641. (Діапазон між 15 і 21 см) (Таблиця I).

Нарешті, на 28 день плаценти, оброблені розчином формальдегіду, мали середню масу 467,40, діаметр якого перевищував 18,30 ± 1,477 см (діапазон між 15 і 20,5 см), тоді як найменший діаметр становив 17, 02 ± 1,547 см (діапазон від 13,5 до 19,5 см). Плаценти, оброблені розчином без формальдегіду, мали середню масу 532,10 г, більший діаметр 18,9 ± 1,391 см (діапазон між 16 і 22,0 см), тоді як у меншого діаметру він становив 17,23 ± 1,399 (діапазон між 15,5 і 20,5 см ) (Таблиця I).

Щодо консистенції оброблених плацент, у групі з формальдегідом на 14 день вони показали еластичну консистенцію, ставши твердою до 21-го дня, характеристика, яка зберігалася до 28-го дня, тоді як у групі без формальдегіду зміни спостерігались 21-го у напрямку до еластичної консистенції. У жодному з випадків плаценти твердої консистенції не були помітні порівняно з групою, обробленою формальдегідом. Що стосується їх кольору, то плаценти, оброблені формальдегідом, продемонстрували значні зміни відтінку, коли спостерігали їх між 14 та 28 днями, демонструючи коричневий та темно-коричневий кольори відповідно. У групі без формальдегіду до 28-го дня спостерігалася лише незначна зміна кольору з темно-червоним кольором (Таблиця II).

При оцінці запаху зразків плаценти, оброблені формальдегідом, мали дратівливий запах на 14 та 21 день, зменшуючись до помірного запаху з точки зору подразнення до 28 дня, тоді як зразки, оброблені без формальдегіду, не виявляли запаху. до 28-го дня оцінки. Ні в одній з груп не спостерігалося присутності колоній мікро/макроорганізмів на жодній з поверхонь плаценти (Таблиця II).

дослідження

ОБГОВОРЕННЯ

Метод консервації без використовуваного формальдегіду або метод Прівеса показав кращі збережувальні властивості за всіма макроскопічними характеристиками, оціненими в ході наших досліджень на плацентах людини, порівняно з класичним розчином на основі формальдегіду, речовини, з яким кожен медичний працівник рано контактував дні його постійності в лабораторіях нормальної або патологічної анатомії людини (lmbus, 1985).

Використання альтернативних фіксуючих розчинів є цікавою темою розробки методів збереження та підготовки дидактичного матеріалу в галузі анатомії, а також інших дисциплін, головним чином завдяки науковим доказам його канцерогенного потенціалу, тому уникати його використання найкраще захист.

Плацента була визнана чудовим джерелом тканини для хромосомного аналізу. Cowles et al. (1995) описують використання флуоресцентної гібридизації in situ (FISH) на тканині плаценти з метою отримання інформації про хромосомні аномалії, де адекватно ідентифіковано 75 відсотків каріотипів, що спостерігаються в плаценті, що включає анеуплоїди, триплоїди та норми. Ця інформація отримується головним чином із зафіксованих формальдегідом плацент, оскільки свіжа тканина зазвичай не доступна для стандартного аналізу каріотипу. Halder & Park (1999) оцінили придатність фіксації формаліну в різних тканинах за допомогою FISH, отримавши ефективність 14, 5 та 0% для збережених плацент для одно-, подвійного або потрійного кольору FISH відповідно. Ці результати вказують на низький рівень виявлення хромосомної плоїдії у фіксованій формальдегідом плацентарній тканині.

З іншого боку, важливо згадати, що будь-який метод, що застосовується для збереження плаценти, повинен проводитися своєчасно. Jauniaux та ін. (1991) вказують, що найкращі результати збереження отримуються при перфузії відразу після пологів з тиском, що підтримується нижче 60 мм рт. Ст., Де електронна мікроскопія демонструє хорошу збереженість клітинної ультраструктури. Однак у випадках, коли його негайне виконання важко, перфузійну фіксацію можна виконати до 6 годин після пологів із задовільними гістологічними результатами, однак ультраструктурно через 10 хвилин після пологів відбудуться ішемічні зміни, і вже не спостерігається час некрозу сильного ультраструктурного некрозу. Крім того, за допомогою гістоморфометричного аналізу вони продемонстрували, що існують суттєві відмінності між кінцевими ворсинками плаценти при фіксації без перфузії порівняно з перфузійними плацентами.

Ці ускладнення, пов'язані з токсичністю, не обов'язково ставлять під загрозу медичну освіту з анатомії, а навпаки, дають можливість використовувати кращі та безпечніші засоби фіксації. Ми виявили, що розчин формальдегіду можна замінити методом Прівеса для фіксації плаценти, що призводить до отримання якісніших зразків та уникнення негативних наслідків для здоров’я людей, що зазнають впливу фіксованих тканин.

На закінчення, використовуючи альтернативні розчини, які вигідно замінюють формальдегід, такі як формула Прівеса, використана в нашому дослідженні, краще зберігають макроскопічні характеристики плаценти, такі як їх текстура, колір і гнучкість, не створюючи подразнюючого запаху, зупиняючи процес розкладання до місяць. Після отриманих результатів ми маємо можливість екстраполювати його на дрібних тварин і мати перспективи для застосування на людському трупі.

БІБЛІОГРАФІЧНА ЛІТЕРАТУРА

Ballenguer, J. J. Деякі ефекти формальдегіду на верхні дихальні шляхи. Ларингоскоп, 94: 1411-3, 1984. [Посилання]

Бустаманте А. М. Ф.; Prieto G. R. H. & Binvignat, G. O. Збереження плаценти людини. Анатомічна техніка. Int. J. Morphol., 25 (3): 545-548, 2007. [Посилання]

Корреа, А. Ф. Збереження сухих анатомічних шматочків методом Прівеса. Електронний журнал ветеринарної медицини REDVET, VI (5), 2005. Доступно за адресою: www.veterinaria.org/revistas/redvet/n050505/050515.pdf [Посилання]

Каулз, Т. А.; Elder, F. F. & Taylor, S. Ідентифікація аномального хромосомного комплементу в закріпленій формаліном, вплавленій парафіном плацентарній тканині. Пренат. Діагн., 15 (1): 21-6, 1995. [Посилання]

Фазель, Дж. Х .; Морель, П. та Гейлуд, П. Стратегія виживання для анатомії. Lancet, 365 (9461): 754, 2005. [Посилання]

Фокс, Г. Е.; Ван Весеп, Р .; Resau, J. H. & Sun, C. C. Ефект занурення фіксації формальдегіду на вагу плаценти людини. Арх.Патол. Лабораторія мед., 115 (7): 726-8, 1991. [Посилання]

Halder, A. & Park, Y. Ідентифікація відповідної тканини із зафіксованого формаліном перинатального розтину матеріалу для виявлення хромосомної плоїдії за допомогою міжфазної FISH. Indian J. Med. Res., 110: 102-6, 1999. [Посилання]

Молоток, Н.; Леффлер, С.; Фея, C.; Бехманн, І. та Стейнке, Х. Заміна формальдегіду в грубій анатомії можлива. J. Natl. Інститут раку, 103 (7): 610-1, 2011. [Посилання]

Хільдебранд, М. Анатомічні препарати. Біклі та Лос-Анджелес, Університет Каліфорнії, 1968. [Посилання]

Міжнародне агентство з дослідження раку (IARC). Формальдегід, 2-бутоксиетанол та 1-трет-бутокси-2-пропанол (том 88, 2-9 червня 2004 р.). Монографії IARC з оцінки канцерогенних ризиків для людей, 2004. Доступно за адресою: http://www.cie.iarc.fr/htdocs/announcements/vol88.htm. [Посилання]

Міжнародне агентство з дослідження раку (IARC). Всесвітня організація охорони здоров'я. Деревний пил і формальдегід. Монографії IARC про оцінку канцерогенних ризиків для людей. Том 62. Ліон, IARC, 1995. [Посилання]

Imbus, H. R. Клінічна оцінка пацієнтів із експозицією формальдегіду, пов’язаною зі скаргами. J. Allergy Clin. Immunol., 76: 831-40, 1985. [Посилання]

Жоніо, Е.; Москозо, Дж. Г.; Ванесс, М.; Кемпбелл, С. та Драйвер, М. Перфузійна фіксація для морфологічного дослідження плаценти. Гул. Pathol., 22 (5): 442-9, 1991. [Посилання]

Морет де Арсія, О. Дж. Внесок у вивчення токсичних ефектів формальдегіду, 1990 р. Доступно за адресою: http://www.complucad.com/frolga.htm [Посилання]

Олсен, Дж. Х .; Єрсен, С.; Хінк, М.; Фаурбо, К.; Breum, N. O. & Jensen, O. M. Професійний вплив формальдегіду та підвищений ризик раку носа у людини. Int. J. Cancer, 34: 639-44, 1984. [Посилання]

Пріето, Р .; Смок К. та Рохас, М. Досвід блогу: Порівняння плаценти. Int. J. Morphol., 29 (2): 432-5, 2011. [Посилання]

Рівера, М. С.; Боніно, Ф.; Фіоретті, К.; Галан, М.; Гігена, С.; Мойн, Р .; Мугелар, Х.; Natali, J. & Quinteros, R. Багатовимірний аналіз, застосований до стадії дегідратації в техніці пластифікації нирок коня. Int. J. Morphol., 27 (3): 855-9, 2009. [Посилання]

Thrasher, J. D. & Kilburn, K. H. Токсичність ембріонів та тератогенність формальдегіду. Арх. Здоров’я., 56 (4): 300-11, 2001. [Посилання]

Viegas, S.; Ладейра, C.; Nunes, C.; Мальта-Вакас, Дж .; Гомес, М.; Бріто, М.; Mendonca, P. & Prista, J. Генотоксичні ефекти при професійному впливі формальдегіду: Дослідження в лабораторіях анатомії та патології та виробництві формальдегідних смол. J. Ок. Med. Toxicol., 5 (1): 25, 2010. [Посилання]

Адреса для листування:

Алехандра Вероніка Ніррейтер

Кафедра анатомії
Школа медицини УДЕЛАР
Авда.Граль.Флорес 2125
C.P.: 11800
Монтевідео
УРУГВАЙ

Отримано: 16.08.2011
Прийнято: 23.01.2012

Весь вміст цього журналу, крім випадків, коли він ідентифікований, підпадає під ліцензію Creative Commons

Тел .: (56-45) 232 5571

Факс: (56-45) 232 5600


[email protected]