Рекомендувати документи

розширений

Розширений тест LightCycler® MRSA для використання з приладом LightCycler® 2.0 ДЛЯ ВИКОРИСТАННЯ ДІАГНОСТИКИ VITRO ®

LightCycler MRSA Advanced Test ®

Розширений набір для лізису LightCycler

Арт. Номер: 05352894 190

Арт. Номер: 05205743 190

LightCycler MRSA Advanced Test - це якісний діагностичний тест in vitro для безпосереднього виявлення назальної колонізації метицилін-стійкого золотистого стафілокока (MRSA) для профілактики та контролю інфекцій MRSA у закладах охорони здоров’я. ® Аналіз проводиться за допомогою приладу LightCycler 2.0 на зразках мазків з носа у пацієнтів, у яких є підозра на колонізацію; підготовка зразків проводиться шляхом екстракції мазка та механічного руйнування з наступною ампліфікацією ДНК MRSA методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) та виявлення ампліфікованої ДНК за допомогою флуоресцентних специфічних зондів гібридизації. ®

ПРИНЦИПИ ПРОЦЕДУРИ

Виявлення MRSA за допомогою розширеного тесту LightCycler MRSA базується на 3 основних процедурах: •

Приготування зразків шляхом механічного перетравлення клітинної стінки бактерій

ПЛР-ампліфікація та виявлення ДНК-мішені за допомогою специфічних зондів для гібридизації

Автоматичне формування результату при аналізі кривої плавлення

Зразки мазків з носа механічно досліджують за допомогою набору Advanced Lysis LightCycler та MagNA Lyser. Порізані кінці мазка слід нагріти в лізисних пробірках, щоб інактивувати будь-які бактерії. Потім пробірки для лізису переносять у MagNA Lyser, де сирий лізат утворюється під час механічного руйнування клітинної стінки бактерії. Після короткого центрифугування скляних гранул та волокон тампону, оброблений зразок ПЛР аналізують за допомогою розширеного тесту LightCycler MRSA. Вибір цільової послідовності ампліфікації ПЛР Праймери та зонди вдосконаленого тесту LightCycler® MRSA виявляють характерну послідовність, що свідчить про включення ДНК MRSA в хромосому S. aureus касети SCCmec. Ампліфікація ®

Після завершення процедури ПЛР у реальному часі прилад LightCycler 2.0 автоматично виконує аналіз кривої плавлення. Одноцепочкові амплікони ДНК, зв’язані з зондом для гібридизації, піддаються підвищенню температури. Коли продукт ПЛР досягає певної температури, один з двох зв’язаних зондів гібридизації плавиться, що призводить до припинення флуоресцентного сигналу. Зменшення флуоресцентного сигналу відбувається за певної температури і призводить до піків плавлення, які дозволяють виявляти та диференціювати MRSA- та IC-специфічні амплікони. Автоматичне формування результату під час аналізу кривої плавлення ®

Після візуальної ідентифікації піків плавлення в смугах TMC програмного забезпечення LightCycler результати тесту передаються у призначений інструмент оцінки (програмне забезпечення мікроаналізу) і формується звіт.

LightCycler Advanced Lysis Kit ® LightCycler Advanced Lysis Kit (Арт. №: 05205743 190)

LYS (Destructive Reagent) Tris буфер, натискаючи кнопку EDTA.

Примітка: Не виймайте компакт-диск із програмою LightCycler MRSA Advanced під час перезавантаження. 5.

Після перезапуску дотримуйтесь інструкцій майстра встановлення. Натисніть кнопку, щоб розпочати встановлення MAS.

Виберіть варіант, якщо на блоці керування LightCycler буде працювати лише один користувач, або варіант, якщо більше декількох користувачів буде працювати ® на блоці управління LightCycler.

Підтвердьте успішну установку MAS, натиснувши кнопку у вікні.

Запустіть програму, використовуючи піктограму MAS на робочому столі комп’ютера.

Папка даних для файлів * .ixo та * .pdf: створюється автоматично при запуску MAS.

Підтвердьте встановлення програмного забезпечення для мікроаналізу (MAS)

Скопіюйте файли фреймів (LightCycler MRSA Advanced Proof File v1.0 CE.ixo та LightCycler ® MRSA Advanced Proof File v1.0 CE.pdf або новішої версії) із компакт-диска Advanced LightCycler MRSA v1.0 (або вище) CE у папку.

Якщо MAS ще не відкрито, двічі клацніть піктограму MAS на робочому столі та натисніть.

Виберіть у папці MRSA Advanced Proof File v1.0 CE.ixo (або вище).

Натисніть кнопку, щоб вказати, що звіт LightCycler не включає індикатор.

Введіть номер партії, час закінчення терміну дії та лабораторні дані у відповідні поля у вікні Налаштування конфігурації MRSA.

Розширений набір для лізису No партії

Номер розширеного тесту MRSA №

Інформація про лабораторію особистої інформації

Виберіть тип звіту та підтвердьте за допомогою. Програма автоматично аналізує файл і відображає дані.

Роздрукувати звіт.

Відкрийте та роздрукуйте файл MRSA Advanced Proof File v1.0 CE.pdf (або вище) (розташований у папці).

Переконайтеся, що надрукований звіт MAS та роздрукований PDF містять однакові результати. Якщо ні, зверніться до місцевого сервісного центру Roche для отримання технічної допомоги.

Видалення програмного забезпечення для мікроаналізу (MAS)

Увійдіть як адміністратор на блоці управління LightCycler.

Натисніть кнопку на лотку блоку управління LightCycler.

З'явиться список встановлених програм, натисніть тут.

Виберіть варіант і підтвердьте, натиснувши кнопку.

Примітка: CD MSS включає функцію видалення та відновлення. Функцію видалення також можна використовувати для описаної процедури. Функцію відновлення можна використовувати для відновлення пошкоджених або відсутніх файлів із програмного забезпечення Micro Analysis. ®

Встановлення макросів LightCycler MRSA Advanced

Встановіть макроси * .lckit: LightCycler MRSA Advanced MCC Macro v1.0 (MRSA ® MCC_04484355001A_1.0.Ickit) або вище та LightCycler MRSA Advanced Macro v1.0 ® CE (MRSA_05352894190_1.0. Ickit) або вище від AdvancedCycler MRSA (або вище) CE CD.

Будь ласка, зверніться до розділу «Виконання макросу LightCycler».

Процедура компенсації кольорів за допомогою ® LightCycler Набір різнокольорових компенсацій для використання з LightCycler 2.0

2.0 Посібник користувача “Roche

Виконайте ці кроки, щоб створити новий файл компенсації кольору або замінити той, що закінчився. 1.

Розплавіть трубки 1, 2, 3 і 5, обережно перемішайте і коротко закрутіть.

Щоб розвести вміст пробірки 2 3 рази, змішайте:

10 мкл розчину в пробірці 2

20 мкл буфера з трубки LYS без перенесення скляних намистин ®

Прокапайте по 10 мкл кожного компонента в окремі капіляри LightCycler (20 мкл).

Капіляр 1: Трубка 1

Капіляр 2: етап розведення Е2

Капіляр 3: Трубка 3

Капіляр 4: Трубка 5

Примітка: Викиньте розведений вміст пробірки 2 в кінці циклу. 4.

Прокапайте 10 мкл буфера з трубки LYS (без перенесення скляних куль) у кожен капіляр, щоб досягти загального обсягу 20 мкл.

За допомогою укупорочного пристрою закрийте капіляри пробкою.

Центрифугуйте капіляри за допомогою LC Sample Disc Centrifuge 2.0 або стандартних адаптерів для центрифуг та центрифуг. Пробірки повинні займати такі позиції на зразку диска: a.

Положення зразка диска 1: CCB (трубка 1)

Положення диска зразка 2: CC530 (трубка 2)

Положення диска зразка 3: CC610 (трубка 3)

Положення диска зразка 4: CC670 (трубка 5)

Примітка: Не зменшуйте обсяг кожного капіляра. 7.

Перенесіть зразок диска LightCycler на LightCycler 2.0. Якщо використовується звичайна центрифуга ®, перенесіть капіляри на диск зразків LightCycler, як описано на етапі E6.

Примітка: Не змінюйте порядок реагентів на циферблаті. 8.

Запустіть і збережіть експеримент з компенсації кольорів (CCE).

Щоб використовувати макрос MRSA Advanced, зверніться до розділу “Виконання макросу Roche” в Посібнику користувача LightCycler® 2.0.

Збережіть цикл з коротким унікальним ім'ям (наприклад, MRSA_CCE_YYYMMDD-xx, Y = рік, H = місяць, N = день, xx = кількість запусків).

По завершенні запуску звіт автоматично створюється.

Роздрукувати звіт.

Запуск перевірки Звіт не вказує, чи MCC був успішним (дійсним). Дійсність запуску MCC може бути визначена лише під час першого запуску MRSA Advanced після запуску MCC. ®

Якщо звіт LightCycler Multicolor Compensation Set позначений (наприклад), прогін недійсний. Повторіть прогон.

Якщо набір різнокольорових компенсацій LightCycler не отримує прапорця, перейдіть до наступного кроку.

Примітка: Якщо негативний контроль (NC) або ® MRSA (+) C постійно недійсний під час розширеного тесту LightCycler MRSA, файл компенсації кольору LightCycler може бути несправним. Повторіть процедуру компенсації кольору або зверніться до місцевого сервісного центру Roche за технічною допомогою.

Створіть об’єкт компенсації кольорів (CCO).

Увімкніть режим сканування кольорової компенсації та натисніть кнопку.

Створіть коротку, унікальну назву; для того, щоб бути чітко ідентифікованою за допомогою програм мікроаналізу (MAS), загальноприйнята назва об’єкта компенсації кольорів: MRSA_CCO_YYYMMDD-xx (Y = рік, H = місяць, N = день, xx = кількість прогонів).

Цей об'єкт використовується для подальшого аналізу тестів, проведених за допомогою розширеного тесту LightCycler MRSA.

Підготовка зразків та контролю.

Позначте трубку з гвинтовою кришкою LYS відповідно до кожного зразка пацієнта.

Примітка: Не розмічайте трубки у верхній частині ковпачка. 2.

Вийміть тампон з транспортного контейнера.

Помістіть одну головку тампона в трубку LYS.

Тримайте тампон за його ручку близько до краю трубки, вставте його на кілька міліметрів від дна трубки і згинайте ручку до краю трубки, поки він не зламається. Ви також можете ножицями вирізати ручку тампона біля краю трубки. Протріть краї ножиць між кожним тампоном тканиною, змоченою 70% -ним етанолом (або Мікрозидом).

Примітка: Використовуйте марлю, щоб мінімізувати ризик забруднення при розбитті мазка. Для кожного тампона використовуйте нову марлю. 5.

Щільно закрийте кришку LYS.

Підготовка негативного контролю

Примітка: NC-реагент повинен бути підготовлений одночасно з випробовуваними зразками. 1.

Позначте трубку з гвинтовою кришкою LYS відповідно до кожного негативного контролю.

Примітка: Не розмічайте трубки у верхній частині ковпачка. 2.

Помістіть стерильний тампон у контейнер для транспортування. Список рекомендованих тампонів див. У розділі «Інші матеріали, які потрібні, але не надаються».

Інкубуйте 1 хвилину при кімнатній температурі.

Вийміть тампон з транспортного контейнера.

Помістіть одну головку тампона в трубку LYS.

Тримайте тампон за його ручку близько до краю трубки, вставте його на кілька міліметрів від дна трубки і згинайте ручку до краю трубки, поки він не зламається. Ви також можете ножицями вирізати ручку тампона біля краю трубки.

Примітка: Використовуйте марлю, щоб мінімізувати ризик забруднення при розбитті мазка. Щільно закрийте кришку LYS.

Підготовка зразків та контролю

Нагрівання зразків та негативний контроль при 95 ± 2 ° C протягом 2 хвилин у сухому нагрівальному блоці.

У MagNA Lyser зразки та негативний контроль порушуються протягом 70 секунд при 5000 об/хв. Докладніше про використання див. У Посібнику користувача MagNA Lyser.

Зразки центрифуги та негативний контроль при кімнатній температурі при 8000 - 20 000 х г протягом 1 хвилини.

Примітка: Оброблені зразки можна зберігати при температурі від -15 до -25 ° C протягом 30 днів, при температурі від 2 до 8 ° C протягом 6 днів та при температурі від 15 до 25 ° C протягом 1 дня. Приготування реагенту 1.

Розморозити реагент MRSA RXNMX та MRSA DETMX та MRSA (+) C при кімнатній температурі. Переконайтесь, що реагенти повністю розморожені перед використанням.

Вихрово реагуйте MRSA RXNMX та MRSA DETMX та MRSA (+) C протягом 3-5 секунд та короткочасно центрифугуйте у центрифузі, щоб зібрати матеріал на дні пробірки.

Приготуйте робочий реагент основної суміші в стерильній силіконовій поліпропіленовій пробірці для мікроцентрифугування для відповідної кількості зразків та контрольних елементів, що перевіряються. (Для вказівки використовуйте таблицю 1).

Примітка: Необхідні об'єми включають 2 реакції негативного та позитивного контролю та надлишковий об'єм з урахуванням мертвих об'ємів та полегшення піпетування від змішувальної трубки до капілярів РХ. Примітка: За необхідності використовуйте мікротрубку (VWR P/N 2017-688) або еквівалент для полегшення відкриття MRSA RXNMX та MRSA DETMX.

Таблиця 1. Приготування робочого реагенту Master mix