Для діагностики SARS-CoV-2 інфекцій можна використовувати кілька лабораторних методів:

• вірусна РНК (успадкування вірусу) пряме виявлення за допомогою ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) респіраторний зразок,

• вірусний антиген (компоненти вірусного білка) методом швидкого флуоресцентного імунологічного аналізу lвід пекучого візерунка

• антитіла проти вірусу виявлення з крові.

потрібно

Юзабіліті кожного методу тестування та інформаційне наповнення результатів, які вони надають, різні, тому їх роль у діагностичному ланцюжку різна.

1. ПЛР (RT-QPCR: РЕАКЦІЯ РЕАКЦІЇ ЛІЦЕВОЇ ОБРАТНОЇ ТРАНСКРИПТАЗИ)

Це найбільш специфічний і чутливий метод тестування для підтвердження присутності вірусу, оскільки він виявляє його спадковий матеріал (РНК) із досліджуваного зразка. Це має вирішальне значення при початковій профілактиці Covid19 щодо поширення пандемії. Тест, який зараз використовує SYNLAB, вивчає 3 стадії генетичного запасу вірусу: він також виявляє ген E, ген RdRP та ген N з високою чутливістю, тому використовувану реакцію ПЛР можна вважати дуже чутливою.

Як проводиться тест?

Зразок верхніх дихальних шляхів (із забором носа та глотки) може бути направлений на дослідження. Результат: протягом 24-48 годин після прибуття до випробувальної лабораторії.

Які переваги?

• Найкращим методом підтвердження присутності вірусу в дихальних шляхах вважається золотий стандарт

• Характеризується чудовою чутливістю та високою специфічністю

• Найкращий метод випробування на зараженість

Які його обмеження?

• Більш тривалий процес вибірки та час очікування результатів

• Відбір проб вимагає спеціального обладнання для відбору зразків та досвіду, який може виконувати кваліфікована та досвідчена особа у захисному обладнанні

• Неправильна вибірка може призвести до помилково негативного результату

• Виконання та оцінка тесту вимагає високого рівня знань, його можна проводити лише в спеціально обладнаній лабораторії молекулярної діагностики

• Процес складається з декількох етапів, що перекриваються, кожен з яких може зайняти кілька годин, тому завершення пошуку займає більше часу.

ПЛР - найдорожчий тест серед варіантів діагностики Covid19. При тестуванні окремих пацієнтів або менших спільнот це однозначно рекомендується, інші алгоритми тестування можуть використовуватися при тестуванні більших спільнот.

2. ШВИДКИЙ АНТИГЕНОВИЙ ТЕСТ

Це метод специфічного аналізу з меншою чутливістю, ніж ПЛР, але менш дорогий. Він виявляє білок S вірусу при аналізі зразків дихальних шляхів у пацієнтів, які виділяють вірус у помірній або високій кількості. В ідеалі пацієнт, швидше за все, інфікований коронавірусом, і ми хочемо це продемонструвати. Через нижчу чутливість негативний результат не виключає наявності поточної інфекції, тому це слід підтвердити методом RT-PCR.

Як проводиться тест?

Зразок верхніх дихальних шляхів (забір з носа та/або глотки) може бути направлений на дослідження. Результат: до 15 хвилин/зразок від прибуття до випробувальної лабораторії.

Які переваги дослідження?

• Високоспецифічна (на основі виявлення флуоресценції) швидка методологія підтвердження присутності вірусу в дихальних шляхах

• Це підтримує швидке прийняття рішень у ситуаціях, коли необхідно якомога швидше ізолювати заражених

• Зчитувати швидкий тест допомагає спеціальний пристрій зчитування (флуоресцентний зчитувач), тому його не потрібно оцінювати візуально

• Професійний персонал лабораторії та досвід роботи необхідні для проведення та оцінки тесту, але необов'язково проводити тест у спеціальній лабораторії молекулярної діагностики, це також можна проводити в лікарняних лабораторіях, де потрібні швидкі рішення щодо утримання пацієнта.

Які обмеження дослідження?

• Відбір проб вимагає спеціального обладнання для відбору проб та досвіду, який може виконувати кваліфікована та досвідчена особа, що має захисне обладнання

• Неправильна вибірка може призвести до помилково негативного результату

• Оскільки його чутливість нижча, ніж ПЛР, її можна застосовувати насамперед у випадках, коли частота захворювання висока, тому кількість позитивних результатів, як очікується, буде високою

• Якщо відбір проб проводиться занадто рано на початковій фазі захворювання, може виникнути негативний результат, оскільки вірусні білки виявляються пізніше в дихальних шляхах порівняно з РНК.

• Підходить лише для якісного тестування, не показує кількості, тому результат може бути лише позитивним чи негативним

3. СЕРОЛОГІЧНІ ТЕСТИ (ВИЗНАЧЕННЯ СПЕЦИФІЧНИХ АНТИТЕЛІВ COVID-19 В ЗРАЗКАХ КРОВІ)

Серологічні тести виявляють антитіла до вірусу в зразку крові. Методології виявлення антитіл дають уявлення про реакцію організму, тому інформаційний вміст аналізів відрізняється від процедур прямого виявлення вірусів. Хоча тестування ПЛР та антигену може підтвердити наявність вірусу, серологічні тести досліджують, чи не стикалися ми з вірусом раніше, чи вже розпочалася конкретна відповідь. Самі по собі серологічні тести не підходять для виявлення гострої інфекції, але вони можуть допомогти в повній діагностиці захворювання, вони можуть доповнити безпосередні методи виявлення збудників, роблячи оцінку їх результатів більш складною. Може допомогти виявити безсимптомно інфікованих або людей з ослабленим імунітетом.

Швидкі тести на антитіла

Ці тести використовуються для швидкого виявлення специфічних до Covid19 антитіл (IgM та IgG) у крові. Багато з цих тестів також продаються в Угорщині, але не має значення, які дані тестів виробника доступні для даного тесту, яка ефективність (чутливість, специфічність, відтворюваність) тестів і наскільки їх можна перевірити в практика професійною лабораторією.

Як проводиться тест?

Рекомендується проводити тест на сироватці рідної проби крові. Результат: до 15 хвилин/зразок від прибуття до випробувальної лабораторії.

Які переваги дослідження?

• Можна швидко, навіть біля ліжка

• Тести з найкращими цінами

• Для зчитування результатів не потрібен спеціальний пристрій, тест-касету можна оцінити візуально

Які обмеження дослідження?

• Більш неточні порівняно з автоматизованими тестами на антитіла (див. Нижче), оскільки хибні результати частіше зустрічаються у швидких тестах

• Недотримання часу зчитування може призвести до помилкових результатів

• Не використовуйте у великих кількостях для місцевого використання та малювання кінчиками пальців

• Чутливість та обсяг тесту можна збільшити, якщо відбір проб проводиться не з кінчиків пальців, а з венозної крові в професійних лабораторних умовах

• Це дає лише якісний результат, тому він менш придатний для оцінки зміни реакції антитіл з часом

• Результат може бути помилково негативним, якщо відбір проб проводиться на ранніх стадіях захворювання

• Антитіла, вироблені проти подібних білків інших вірусів, можуть викликати перехресні реакції, що може призвести до хибнопозитивного результату! (На специфічність залежить те, який антиген, що виробляється вірусом, тестується і наскільки він специфічний для вірусу SARS-CoV-2.)

• Невідомо, чи забезпечують перевірені антитіла IgG тривалий захист пацієнта від подальших інфекцій SARS-CoV-2.

• Оцінка результатів ускладнюється тим фактом, що IgM, характерний для гострої імунної відповіді, може навіть тривалий час бути присутнім у крові, навіть якщо вірус більше неможливо виявити в дихальних шляхах і може призвести до помилкових висновків (інфекція класифікується як гострий).

На що слід звернути увагу при виборі тесту?

• Чи має тест діагностичний рейтинг? (Кілька доступних на ринку тестів можна використовувати лише для дослідницьких цілей!)

• Чи відома надійність різних виробничих серій? (Одна серія випробувань може продовжувати працювати, тоді як інша більше не діє. Виробник повинен перевірити та переконатися, що серії, вироблені в різний час, однакової якості.)

• Чи є дані про те, які патогени були протестовані на перехресну реактивність, що може призвести до можливого хибнопозитивного результату?

• Чи доступні дані про стадію захворювання та кількість пацієнтів, які пройшли тестування на ефективність (чутливість та специфічність)?

Зважаючи на вищевикладене, настійно рекомендується вимагати таких тестів у професійного постачальника лабораторних послуг, де є досвід для інтерпретації результатів.

Автоматизовані тести на антитіла (ІФА та інші імуноаналізи)

Ці аналізи виявляють виявлення антитіл класу імуноглобулінів класу IgG або IgA/IgM до ГРВІ-CoV-2 на високоефективних автоматах та доповнюють методи прямого виявлення патогенів. Вони також можуть бути використані для збору епідеміологічних даних. Для належної оцінки результатів виявлення антитіл (подібно до інших інфекційних захворювань) для тестування серологічного статусу необхідно протестувати дві проби пацієнта, одну з гострої фази, яка становить 1 тиждень захворювання, а іншу через 2 - 4 тижні.

Як проводиться тест?

Тест можна проводити на сироватці нативного зразка крові. Результат: протягом декількох годин після прибуття до лабораторії.

Які переваги дослідження?

• Автоматизований, тому він також підходить для великої фільтрації

• Менше помилково позитивних чи помилково негативних результатів, оскільки його чутливість та специфічність набагато кращі за результати швидких тестів на антитіла

• Кращі тести якості показують, що антитіло продукується проти білка S1 вірусу, що дозволяє підвищити специфічність

• Контрольована якість, випробувані, надійні тести

Які обмеження дослідження?

• Деякі тести дають лише якісні результати, тому вони менш придатні для оцінки змін реакції антитіл з часом.

• Результат може бути помилково негативним, якщо відбирати проби на ранніх стадіях захворювання, однак чутливість може бути підвищена, якщо кілька антитіл (наприклад, IgA/IgM та IgG) тестувати разом для відбору проб пізніше в процесі захворювання.

• Помилково позитивний результат може бути отриманий, якщо виявлено антитіло, вироблене проти іншого антигену вірусу (антитіла, вироблені проти інших вірусів, таких як SARS-CoV-1, можуть викликати перехресні реакції)

Важливо!

• Жоден із серологічних тестів не підходить для підтвердження гострої інфекції!

• Жоден із методів дослідження крові не може довести або виключити можливе зараження будь-яким зразком крові! Тест на сироваткову пару (два зразки пацієнта у дві фази захворювання) може бути підходящим для уточнення серологічного статусу, але це не повинно виключати поточної заразності без виявлення вірусу. Одночасне використання RT-PCR та скринінг антитіл забезпечує більший рівень безпеки при виявленні та ізоляції інфекцій!

Підсумовуючи:

Якщо результат ПЛР і результат антитіл негативні, ви можете бути впевнені, що існує велика ймовірність зараження вірусом. Однак він також не має захисту, тому все одно потрібно бути обережним, звертати увагу на профілактику (носіння маски, соціальна розлука, зменшення контакту, регулярна дезінфекція рук тощо)

• якщо результат ПЛР і результат IgM негативні, а результат IgG позитивний, ви, швидше за все, вже стикалися з вірусом і захищені. Ви можете бути впевнені, але все ж будьте обережні! (Може відбутися повторне зараження, оскільки вірус може мутувати!)

• У всіх інших випадках обов’язково проконсультуйтеся зі своїм лікарем загальної практики або зв’яжіться з відповідними органами через офіційні канали Національного центру громадського здоров’я (NNK).!

Про вірус

• ГРВІ-CoV-2 - це вірус, який належить до сімейства коронавірусів і викликає важкий гострий респіраторний синдром.

• Поширюється переважно шляхом краплинної інфекції, кашлю чи чхання при контакті з інфікованими пацієнтами.

• Інкубаційний період інфекції становить у середньому три-сім днів (максимум 14 днів).

• Симптомами є в основному: температура, кашель, утруднене дихання та втома.

• У більшості пацієнтів інфекція є легкою гарячковою хворобою, але може розвинутися важкий гострий респіраторний дистрес-синдром (ГРДС), особливо у людей похилого віку або хронічно хворих.

• У деяких випадках хвороба закінчується смертю, виходячи з поломки вікової групи, ймовірність смертності становить від 0,2-14,8% у віковій групі 10-80 років.

• Чоловіки майже вдвічі частіше помирають, ніж жінки.

• У лютому 2020 року Covid19 назвав ВООЗ хворобу, спричинену ГРВІ-CoV-2. РНК вірусу виявляється найраніше, антиген починає ставати позитивним через кілька днів, а рівень антитіл становить приблизно. Він починає підніматися в крові через 7-10 днів від початку зараження.

Вам стаття стала цікавою? Поділіться з друзями!