Нефрологія - офіційне видання Іспанського товариства нефрології. Журнал публікує статті про основні або клінічні дослідження, пов’язані з нефрологією, високим кров’яним тиском, діалізом та трансплантацією нирок. Журнал відповідає положенням системи рецензування, завдяки чому всі оригінальні статті оцінюються як комітетом, так і зовнішніми рецензентами. Журнал приймає статті, написані іспанською або англійською мовами. Нефрологія відповідає стандартам публікацій Міжнародного комітету редакторів медичних журналів (ICMJE) та Комітету з етичних публікацій (COPE).
Індексується у:
MEDLINE, EMBASE, IME, IBEC, Scopus та SCIE/JCR
Слідкуй за нами на:
Фактор впливу вимірює середню кількість цитат, отриманих за рік за твори, опубліковані у виданні протягом попередніх двох років.
CiteScore вимірює середню кількість цитат, отриманих за опубліковану статтю. Читати далі
SJR - це престижна метрика, заснована на ідеї, що всі цитати не рівні. SJR використовує алгоритм, подібний до рейтингу сторінок Google; є кількісним та якісним показником впливу публікації.
SNIP дозволяє порівняти вплив журналів з різних предметних областей, виправляючи відмінності у ймовірності цитування, які існують між журналами різних тем.
- Резюме
- Ключові слова
- Анотація
- Ключові слова
- Вступ
- Резюме
- Ключові слова
- Анотація
- Ключові слова
- Вступ
- Матеріал і методи
- Модель тварини та визначення
- Лікування уремічними токсинами та визначення
- Статистичний аналіз
- Результати
- У мишей на дієті, багатій аденином, одночасно розвиваються хронічні захворювання нирок та судинні ураження
- Уремічні токсини індукують експресію білків позаклітинного матриксу та профібротичного цитокіну tgf-β1 клітинами haosmc
- Обговорення
- Завершення
- Фінансування
- Авторство
- Конфлікт інтересів
- Бібліографія
У пацієнтів з хронічними захворюваннями нирок спостерігається скупчення уремічних токсинів, які були визначені як патогенні агенти, пов’язані із серцево-судинною смертністю, що є дуже високим у цієї групи пацієнтів. Загальним явищем для прогресуючої ниркової дисфункції та супутнього ураження судин є аномальне накопичення білків позаклітинного матриксу (ECM) у ниркових або судинних структурах.
Вивчити внесок уремії або уремічних токсинів у виробництво цитокінів та ЕКМ в аортах уремічних тварин або клітин гладкої мускулатури аорти людини (HAOSMC).
Матеріали і методи
Використовували мишей з уремією, індукованою дієтою, багатою аденином (0,2%) протягом 2, 4 або 6 тижнів. Функцію нирок оцінювали за діурезом, рівнем креатиніну та сечовини в плазмі крові, а також дробовим виділенням натрію та судинних уражень за гістологією та експресією білка за допомогою RT-qPCR. In vitro HAOSMC інкубували з уремічними токсинами: р-крезолом 10-100 (мкг/мл) та індоксилсульфатом 25-100 (мкг/мл), окремо або одночасно. Експресію білка оцінювали за допомогою вестерн-блот та конфокальної мікроскопії.
Введення аденіну призвело до прогресуючого пошкодження нирок у мишей, потовщення стінки аорти та збільшення експресії білків TGF-β1 та ECM. Високі та комбіновані дози токсинів також індукували експресію білків TGF-β1 та ECM клітинами HAOSMC.
Уремія, утворена дієтою, багатою аденином або високими дозами уремічних токсинів, спричинила ненормальне відкладення білків ECM у судинних стінках або їх вироблення HAOSMC. Розуміння механізмів, що лежать в основі цього патофізіологічного процесу, може бути корисним для запобігання пошкодженню серцево-судинної системи, пов’язаному з прогресуванням хронічної хвороби нирок - стану, який на даний момент є незворотним і, часом, безшумним до встановлення діагнозу на просунутих стадіях.
У пацієнтів з хронічними захворюваннями нирок спостерігається скупчення уремічних токсинів, які були визначені як патогенні агенти, пов'язані із серцево-судинною смертністю, і дуже висока ця група пацієнтів. Явищем, загальним для прогресуючої ниркової дисфункції та супутнього ураження судин, є аномальне накопичення білків позаклітинного матриксу (ECM) у ниркових або судинних структурах.
Визначити внесок уремії або уремічних токсинів у виробництво цитокінінів та ЕКМ в аортах уремічних тварин або клітин гладкої мускулатури аорти людини (HASMC).
Матеріали і методи
Мишей використовували з уремією, індукованою дієтою, багатою аденином (0,2%) протягом 2, 4 або 6 тижнів. Функцію нирок оцінювали за допомогою об’єму сечі, рівня креатиніну, сечовини, дробової екскреції натрію та пошкодження судин за допомогою гістології, а також експресії білка за допомогою RT-qPCR. HASMC інкубували in vitro з уремічними токсинами: p-крезолом 10-100 (мкг/мл) та індоксил-сульфатом 25-100 (мкг/мл) окремо або одночасно. Експресію білка оцінювали за допомогою Вестерн-блот та конфокальної мікроскопії.
Введення аденіну призвело до прогресуючого пошкодження нирок у мишей, потовщення стінки аорти та збільшення експресії білків TGF-β1 та ECM. Токсини у високих дозах та в поєднанні також індукували експресію білків TGF-β1 та ECM за допомогою HASMC.
Уремія, вироблена дієтою, багатою аденином, або високі дози уремічних токсинів індукували ненормальне відкладення білків ECM у судинній стінці або його вироблення HASMC. Розуміння механізмів, що лежать в основі цього патофізіологічного процесу, може бути корисним для профілактики серцево-судинних пошкоджень, пов'язаних з прогресуванням хронічної хвороби нирок, захворювання, на даний момент незворотним і випадковим мовчазним до встановлення діагнозу на просунутих стадіях.
Метою даної роботи було поглиблення вивчення вкладу токсинів, які накопичуються в сироватці крові уремічних хворих, на пошкодження судин і, зокрема, на аномальне відкладення ЕКМ у судинній тканині. Для цього ми використовували тваринну модель прогресуючої ХХН за допомогою введення дієти, багатої аденином, або інкубації клітин гладких м’язів аорти людини (HAOSMC) з уремічними токсинами.
Матеріал та методи Модель тварин та визначення
Метаболіти плазми та сечі визначали за допомогою комерційних наборів, згідно інструкцій виробника: креатиніну та азоту сечовини плазми (Arbor Assays LLC, Ann Arbor, MI, США). Для розрахунку дробової екскреції натрію використовували концентрацію іонів натрію в плазмі та сечі (Sodium Assay Kit, Abcam, Cambridge, UK). Спектрофотометричні визначення проводили за допомогою багатомодового планшетного зчитувача Victor X4 (PerkinElmer, Waltham, MA, США).
Лікування уремічними токсинами та визначення
HAOSMC були отримані шляхом ферментативної дисоціації аорти 5 донорів органів, відповідно до іспанських правових положень, із схвалення Комітету з етики лікарні Universitario de Getafe, як описано раніше 15, і були щедро пожертвувані доктором Санчесом. Феррер. Клітини підтримували в культуральному середовищі DMEM, доповненому 10% телячої сироватки, L-глутаміном, амфотерицином, пеніциліном та стрептоміцином. Для експериментів HAOSMC, з пасажів 3 до 10, культивували сироваткою людини (сироватка AB; BioWhittaker, Walkersville, MD, США) при 2,5% протягом 24 год і інкубували з розчиненими уреміками р-крезолом (pc) та IS (Sigma), застосовується при концентраціях уремічного діапазону: IS 25 і 100 мкг/мл і pc 10 і 100 мкг/мл, окремо або одночасно при низьких і високих концентраціях (IS + pc), для змінних часів.
Після лікування вміст клітинного білка визначали за допомогою звичайного вестерн-блот 16 з первинними антитілами проти TGF-β1, колагену I або фібронектину (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, США) або TGF-β1 шляхом імунофлюоресценції, з конфокальний мікроскоп Leica 17. .
Всі дані були проаналізовані за допомогою програмного забезпечення GraphPad Prism. Результати виражаються як середнє значення ± SEM. Оскільки кількість тварин чи експериментів ніколи не перевищувало 10, проводили порівняння з непараметричною статистикою, застосовуючи тест Крускала-Уолліса з пост-тестом Манна-Уітні (непарні дані) або тест Фрідмана з пост-тестом Вілкоксона (парний дані). Значення р 0,05 вважали значущим.
Результати У мишей на дієті, багатій аденином, одночасно розвиваються хронічні захворювання нирок та судинні ураження
Порівняльний аналіз функції нирок між контрольними тваринами та тваринами, які харчуються аденіном.
| Діурез (мкл/24 год) | ||||
| Контроль | 432 ± 49 | 421 ± 52 | 445 ± 48 | 439 ± 48 |
| Аденін | 431 ± 56 | 3968 ± 524 *, ** | 6,382 ± 615 *, ** | 6,115 ± 627 *, ** |
| Креатинін у плазмі (мг/дл) | ||||
| Контроль | 0,28 ± 0,07 | 0,26 ± 0,1 | 0,31 ± 0,06 | 0,25 ± 0,02 |
| Аденін | 0,29 ± 0,06 | 0,63 ± 0,13 *, ** | 0,70 ± 0,12 *, ** | 0,86 ± 0,07 *, ** |
| Азот сечовини плазми (мг/дл) | ||||
| Контроль | 24 ± 2 | 23, ± 4 | 26 ± 4 | 24 ± 2 |
| Аденін | 27 ± 4 | 86 ± 20 *, ** | 109 ± 23 *, ** | 126 ± 8 *, ** |
| Фракційна екскреція натрію (%) | ||||
| Контроль | 0,44 ± 0,03 | 0,42 ± 0,02 | 0,43 ± 0,03 | 0,38 ± 0,06 |
| Аденін | 0,45 ± 0,02 | 1,07 ± 0,28 *, ** | 1,09 ± 0,21 *, ** | 1,63 ± 0,49 *, ** |
Мишей годували стандартною дієтою (Control) або дієтою, багатою аденином (Adenine), протягом 2, 4 або 6 тижнів. Функцію нирок визначали шляхом вимірювання діурезу, креатиніну в плазмі крові, рівня азоту сечовини в плазмі крові та дробової екскреції натрію. Значення представлені як середнє значення ± SEM.
р 0,05 проти тиждень 0.
р 0,05 проти Контроль одночасно з лікуванням. n = 5 тварин/група.
У мишей з ХХН, індукованих дієтою, багатою аденином, розвиваються пошкодження судинної структури. Мишей годували протягом 6 тижнів або стандартною дієтою (Control), або дієтою, багатою аденином (Adenine). А) Аорти фарбували гематоксилін-еозином. Показані репрезентативні зміни. У контрольних мишей пошкоджень не спостерігалося. Зверніть увагу на потовщення середовища (зірочку) в аортах мишей аденін. Шкала шкали: 100 мкм. Збільшення × 20. Б) Морфометричний аналіз товщини середнього та радіуса світла, проведений за допомогою програмного забезпечення ImageJ та обчислення його співвідношення. Середнім радіусом вважається середнє значення 5 незалежних вимірювань у різних напрямках. Значення представлені як середнє значення ± SEM. 1 р 0,05 проти Контроль. n = 5 тварин/група.
Миші з ХХН, індуковані дієтою, багатою аденином, демонструють підвищену експресію профібротичного цитокіну TGF-β1 та генів позаклітинного матриксу в аорті. Мишей годували протягом 2, 4 або 6 тижнів стандартною дієтою (контроль, чорні кола) або дієтою, багатою аденином (аденин, чорні трикутники). Рівні мРНК TGF-β1 (A), колагену i (COL I, B) або мРНК фібронектину (C) в аорті визначали за допомогою RT-qPCR. Загальний рівень β-актину визначали як відповідний ендогенний контроль. Значення представлені як середнє значення ± SEM проти Контроль. * р 0,05 проти 2 тижні, 1 р 0,05 проти Контроль, одночасно лікування. n = 5 тварин/група.
Високі дози уремічних токсинів індукують експресію профібротичного цитокіну TGF-β1 або білків позаклітинного матриксу в клітинах гладких м’язів судин. Клітини гладкої мускулатури аорти людини інкубували із середовищем із 2,5% сироваткою людини протягом 24 годин. Згодом їх обробляли протягом 2, 4, 6 або 24 год (A, C і D) або 24 год (B) уремічними токсинами: індоксилсульфатом (IS 100 мкг/мл), паракрезолом (pc 100 мкг/мл ) або суміш обох (ІС + шт 100 мкг/мл). Показані репрезентативні вестерн-плями TGF-β1 (A), колагену i (COL I, C) та фібронектину (D). Рівні GAPDH визначали як їх відповідні ендогенні контролі. Стовпчики представляють значення денситометричного аналізу нормалізованих блотів проти ендогенного контролю. Експресію TGF-β1 аналізували за допомогою імунофлюоресценції (B). Показані репрезентативні зображення фотографій, отриманих за допомогою конфокальної мікроскопії (× 100). Значення представлені як середнє значення ± SEM. * р 0,05 проти Контроль (КТ, необроблені клітини).
Основними висновками цього дослідження було те, що уремія індукує експресію профібротичного цитокіну TGF-β1 та накопичення білків ECM в аортах мишей, у яких прогресуюча уремія індукована багатою моделлю дієтичного введення в аденін, і що уремічні токсини індукують експресію цих самих білків у клітинах HAOSMC.
Нарешті, концентрації токсину, використані в цьому дослідженні, знаходяться в межах, зазначених для пацієнтів з уремією (1-100 мкг/мл) 28, і вони можуть досягти загальних значень у сироватці крові 236 та 105 мкг/мл для ІС та р-КС відповідно у пацієнтів на гемодіалізі 28 та менше 4,9 та 46 мкг/мл для ІС та р-КС відповідно у пацієнтів із ХХН, які не перебувають на діалізі, про яких існує дуже мало інформації. Крім того, високий рівень обох токсинів спостерігався у пацієнтів з 1-5 стадіями ХХН, коли прогресивні проти. непрогресивні 16. Наші результати, як in vitro, так і in vivo, вказують на те, що саме у більш високих дозах або часом від 4 тижнів аденіну спостерігається значне збільшення виробництва та/або накопичення білків ECM.
У цій роботі вперше продемонстровано, що уремічні токсини, що накопичуються у пацієнтів із кінцевою стадією ХХН, індукують експресію білків цитокінів TGF-β1 та ECM за допомогою HAOSMC, що може пояснити механізм ураження судин та ECM накопичення, виявлене in vivo, відбувається в моделі прогресуючої ХХН, індукованої дієтою, багатою аденином.
Ця робота фінансується Інститутом охорони здоров'я Карлоса III (ISCIII) та фондами FEDER (PI14/02075, PI17/00625, PI17/01513), фондами FEDER та програмами ISCIII RETIC REDinREN (RD12/0021/0006 та RD16/0009/0018 ), Мадридська автономна громада (NOVELREN-CM REF: B2017/BMD-3751), Університет Алькали (CCG2016/BIO-043) та Фонд Сенефро (Сенефро-2016) до LCB, та Фонд Реналь Ініго Альварес де Толедо ( FRIAT).
Дієго Родрігес-Пуйоль та Лаура Каллерос поділяють напрямок цієї роботи.
Конфлікт інтересів
Автори заявляють, що у них немає конфлікту інтересів.
- Як вибрати дієту при захворюваннях нирок
- Дієти з високим вмістом білка та захворювання нирок більше доказів очевидного
- Контроль обсягу та гіпертрофія лівого шлуночка у пацієнтів із термінальною стадією захворювання нирок
- Як я можу запобігти хронічним захворюванням нирок Пацієнт Клас Версія для друку
- Дієти з високим вмістом білка та хвороби нирок більше доказів очевидного - дієтолог