язок

  • реферат
  • мета:
  • дизайн:
  • предмети:
  • розміри:
  • результати:
  • висновок:
  • вступ
  • методи
  • предметів
  • вимірювання
  • Агрегація тромбоцитів залежна від лептину
  • Аналітичний підхід
  • результат
  • обговорення

реферат

Щоб перевірити, чи пов'язана реакція тромбоцитів на лептин з факторами ризику метаболічного синдрому.

дизайн:

предмети:

Ми вивчили 169 хворих поспіль, середній вік = 43, 6 ± 9, 9 років, надмірна вага (N = 57) або ожиріння (N = 112).

розміри:

Кластерний аналіз був використаний для формування трьох кластерів на основі чутливості тромбоцитів до зростаючих доз лептину. Профілі факторів ризику трикластерного метаболічного синдрому порівнювали за допомогою дискримінантного аналізу.

результати:

Чутливість тромбоцитів до лептину була відсутня в кластері 1, тоді як кластер 3 мав найбільшу реакцію на агрегацію тромбоцитів для попередньої інкубації лептину. Рівень лептину в плазмі крові значно зменшився з кластеру 1 до кластера 3 у обох статей. Пацієнти кластеру 2 мали помірний профіль чутливості до лептину. Найвищі показники індексу маси тіла (ІМТ) частіше спостерігались у тих, хто не відповів, тоді як поширеність високої окружності талії, а також гіпертригліцеридемії та гіпертонії зростала із збільшенням реакції на лептин з групи 1 у групу 3. Формула фактору ризику метаболічного синдрому як специфічна для групи в 69,0% кластера 1, 54,9% кластера 2 та 55,8% кластера 3. Циркулюючий лептин, окружність талії, тригліцериди плазми та ІМТ визначали характерні закономірності факторів ризику метаболічного синдрому в кластерах.

висновок:

У амбулаторних пацієнтів із зайвою вагою та ожирінням фактори ризику метаболічного синдрому певною мірою паралельні реакції тромбоцитів на лептин. Такі кореляції включають рівень лептину в плазмі, окружність талії, тригліцериди плазми та ІМТ та можуть сприяти надмірному ризику серцево-судинних подій у пацієнтів із надмірною вагою та ожирінням.

Відомо, що ожиріння пов’язане з прискореним атеротромбозом та збільшенням частоти серцево-судинних захворювань та смертності. Кілька доказів демонструють, що метаболічні порушення, які часто супроводжують надмірну вагу, такі як резистентність до інсуліну, гіпертонія, гіпертригліцеридемія та ліпопротеїни високої щільності (ЛПВЩ), сприяють прогресуванню атеросклерозу у пацієнтів із ожирінням. 1, 2, 3 Змінений гемостатичний баланс може також сприяти надмірному ризику гострих серцево-судинних подій у людей із ожирінням. 4, 5

Лептин, продукт гена ob 6, являє собою білок, що виділяється переважно жировою тканиною, який сигналізує про розмір запасів енергії центральній нервовій системі, модулюючи активність гіпоталамічних центрів, що беруть участь у регуляції споживання їжі та енергетичного балансу. 7 Хоча лептин, схоже, відіграє важливу роль у регуляції маси тіла та енергетичного обміну, деякі дані свідчать про те, що цей гормон може брати участь в інших патофізіологічних механізмах, таких як імунна функція, ангіогенез, формування кісток, фертильність та експресія рецепторів лептину. було продемонстровано в різних тканинах. 8, 9, 10, 11, 12, 13

Метаболічний синдром - це сукупність взаємопов’язаних факторів ризику, які, мабуть, безпосередньо підтримують розвиток атеросклеротичних серцево-судинних захворювань. 22, 23 Метаболічний синдром також пов'язаний із станом гіперкоагуляції, який складається з підвищеного рівня факторів згортання (тканинний фактор, фактор VII та фібриноген), а також інгібування фібринолітичного шляху (збільшення інгібітора активатора плазміногену-1 та зменшення тканинного плазміногену активаторна активність). Крім того, асоціація метаболічного синдрому з дисфункцією ендотелію та дисліпідемією індукує агрегацію тромбоцитів, ще більше збільшуючи ризик тромботичних подій. Тому вивчення взаємозв'язку між реакцією тромбоцитів на лептин та метаболічним синдромом представляє особливий інтерес.

У цьому дослідженні ми перевірили гіпотезу про те, що чутливість тромбоцитів до лептину пов’язана зі змінними метаболічного синдрому, щоб переконатися, що респонденти характеризуються типовим клінічним/метаболічним фенотипом високого ризику.

методи

предметів

Наша серія включала 169 пацієнтів з інформованою згодою на надмірну вагу або ожиріння, яких поступово госпіталізували в амбулаторію для профілактики та лікування ожиріння в Університетській лікарні в Мессіні, Італія. Суб'єкти, які отримували лікування антитромботичними препаратами (включаючи аспірин), протизаплідними або замісними гормональними терапіями, були виключені з дослідження. Діагностичними критеріями метаболічного синдрому були ті, що були запропоновані Національною освітньою програмою США з питань холестерину - Група лікування дорослих III (NCEP ATP-III): обхват талії у чоловіків становить 102 см, а у жінок - 88 см; тригліцериди плазми -150 мг/дл; Холестерин ЛПВЩ 23 Протокол дослідження був затверджений місцевим комітетом з етики.

вимірювання

Зріст тіла вимірювали без взуття з точністю до 0,5 см; вага тіла вимірювалася без одягу з точністю до 0,1 кг; Індекс маси тіла (ІМТ) розраховували як вагу/зріст 2 (кг/м2). Окружність смуги вимірювалася посередині між нижнім краєм ребер і поперековим хребтом. Артеріальний артеріальний тиск вимірювали за допомогою сфігмоманометра Ріва-Роччі (Zenith, Рим, Італія). Значення артеріального тиску збирали у пацієнтів, які перебувають у спокої в положенні лежачи на спині протягом принаймні 5 хвилин. Перше вимірювання було виключено, а середнє з наступних трьох вимірювань, зроблених з інтервалом у 3 хвилини, враховано. Глюкоза в плазмі натще (AutoAnalyzer, Бекман, Мілан, Італія), холестерин ЛПВЩ, тригліцериди (процедура CHOP-PAP, Boehringer Biochemia, Мілан, Італія) та лептин (Human Leptin RIA kit, Linco Research Inc., St. Charles, MO, USA )). були виміряні для кожного зареєстрованого пацієнта.

Також була зібрана інформація про гормональний статус жінок (після/перед менопаузою). Аналіз враховував звички куріння та використання гіпотензивних, гіпоглікемічних та/або знижуючих жир препаратів за місяць до участі у дослідженні.

Агрегація тромбоцитів залежна від лептину

Реакцію агрегації тромбоцитів на лептин вимірювали, як описано вище. 19, 20 Коротко кажучи, після нічного голодування у кожного пацієнта в положенні лежачи на спині з кубічної вени плеча отримували пробу венозної крові за допомогою канюлі, розміщеної за 30 хвилин до збору, щоб уникнути стресового введення та підтримувати повільною інфузією сольового розчину (0,5 мл/хв). Зразки крові (25 мл) відбирали в конічну поліпропіленову пробірку, що містить 3,33 мл/л лимонної кислоти/цитрату натрію/декстрози (ACD) (що складається з 64 ммоль/л лимонної кислоти, 85 ммоль/л цитрату натрію і 111 ммоль/л декстрози ).

Багату тромбоцитами плазму (PRP) отримували центрифугуванням при 800 g протягом 20 хвилин при 4 ° C. PRP центрифугували при 2000 g при 4 ° C з утворенням м'яких гранул тромбоцитів, ресуспендованих у N-2-гідроксиетилпіперазині-N '-2. -этансульфонова кислота та гідроксид калію (HEPES) Типовий буфер (сольовий розчин, забуференний HEPES (HBS)). що складається з 145 ммоль/л NaCl, 5 ммоль/л KCl, 0,5 ммоль/л NaH 2 PO 4, 1 ммоль/л MgSO 4, 5,5 ммоль/л глюкози, 3,0 мг/л бичачого сироваткового альбуміну, 10 ммоль/л HEPES, рН 7, 4 і промивають один раз. Центрифугування проводили при 4 ° C, щоб мінімізувати спонтанну активацію тромбоцитів. 25

Планшети підраховували (Coulter International Corporation, Маямі, Флорида, США) і ресуспендували в HBS-буфері при концентрації 0,5 - 1 х 10 8 планшетів/мл. Аликвоти (0,4 мл), що містять 1 ммоль/л CaCl 2, розподіляли в кювети агрегометра. Аліквота HBS була використана як еталон для позначення 100% в експериментах з оптичної агрегації. Реакцію агрегації на агоніст контролювали оптично (PACKS4, Helena Laboratories, Бомонт, ТЕ, США). Коефіцієнт пропускання світла постійно порівнювався з коефіцієнтом пропускання світла від HBS. Агрегація тромбоцитів виражалася як% від максимальної агрегації.

Для вивчення впливу лептину на індуковану агоністом агрегацію 0,4 мл суспензії тромбоцитів попередньо інкубували з лептином 5, 10, 25, 50 або 100 нг/мл (Linco Research Inc., Сент-Чарльз, Міссурі, США) протягом 5 хвилин, а потім стимулювали аденозиндифосфат (ADP) (Sigma Chemical Co., Сент-Луїс, Міссурі, США) 2 мкмоль/л (Sigma Chemical Co., Сент-Луїс, Міссурі, США).

Аналітичний підхід

Пацієнтів об'єднували у три кластери за допомогою K-аналітичного кластерного аналізу на основі їхньої% максимальної агрегаційної реакції на АДФ 2 мкмоль/л після попередньої інкубації зі збільшенням доз лептину. Через нерівномірний розподіл% максимального агрегування, дані трансформувались із логотипом. Кластерний аналіз дозволяє групувати пацієнтів у кластери, які мають помітний профіль агрегації тромбоцитів у відповідь на збільшення доз лептину. Квадратні евклідові відстані були розраховані для оцінки різниці або відстані між пацієнтами у багатовимірному просторі, що визначається% максимальної агрегації. Чим менша відстань, тим більша спорідненість між пацієнтами, тобто між їх профілями агрегації тромбоцитів.

Модель була змушена сформувати три кластери, оскільки єдине дослідження, що порівнювало респондентів та пацієнтів, які не реагували, проводили з пластинами від бідних донорів. 21 Будь-яке апріорне визначення моделей реакції тромбоцитів від донорів із ожирінням на основі наявних знань може обмежити наше розуміння взаємозв'язку між реакцією тромбоцитів на лептин та факторами ризику метаболічного синдрому. Раніше ми повідомляли, що надмірна вага та ожиріння пов’язані з поступовим прогресивним зниженням чутливості тромбоцитів до лептину. Отже, ми дійшли висновку, що змушення моделі сформувати три кластери може бути гарною стратегією згідно з гіпотезою, що між невідповідачами та респондентами буде середній рівень чутливості тромбоцитів.

результат

Середній вік пацієнтів, які брали участь у дослідженні, становив 43,6 ± 9,9 року. Більшість пацієнтів були жінки (66,9%), і 112 із 169 пацієнтів мали ІМТ, що перевищував або дорівнював 30 кг/м2. Найчастіше спостеріганими факторами ризику метаболічного синдрому є низький рівень холестерину ЛПВЩ (47,9%) та висока окружність талії (46,7%), потім високий кров'яний тиск (38,5%), гіпертригліцеридемія (35,5%) та гіперглікемія (33, 5%). 7%). Статус постменопаузи був наявний у 37,2% жінок, які потрапили на навчання.

% Максимальної агрегаційної реакції на попередню інкубацію із збільшенням доз лептину у трьох виявлених кластерах наведено в таблиці 1. Пластинки пацієнтів кластеру 1 (не реагували) не мали відповіді на лептинову інінкубацію, а% максимальної агрегації було подібним до ADP 2 мкмоль/л . (log-трансформований% від максимального агрегування = 0,4 ± 0,3). Навпаки, тромбоцити у пацієнтів кластеру 3 (з високою чутливістю) мали дуже високу чутливість до лептину, який починався з концентрації 10 нг/мл із чітким співвідношенням доза-реакція. Кластер 2 (помірно чутливий) мав профіль залежно від лептину агрегації тромбоцитів між групами в групах 1 та 3. Концентрації лептину в плазмі були вищими у тих, хто не відповів, порівняно з середньою та високою реакцією, і стать не впливала на ці результати. (Рядок 1).

Стіл в натуральну величину

Рівні лептину в плазмі крові у трьох кластерах.

Повнорозмірне зображення

Вік, стать, звички куріння та статус менопаузи не розрізняли три групи. Пацієнти із зайвою вагою (ІМТ = 25–29,9 кг/м 2) частіше зустрічались у пацієнтів з високим рівнем відповіді, тоді як особи, що страждали ожирінням (ІМТ = 35 кг/м 2 і більше), частіше у пацієнтів без відповіді. На відміну від цього, поширеність високої пропускної здатності зростала із збільшенням реакції на лептин від кластера 1 до кластера 3. Високий рівень тригліцеридів у плазмі крові, холестерин ЛПВЩ та артеріальний тиск були більш поширеними у пацієнтів із середньою та високою реакцією порівняно з тими, хто не відповів. Глюкоза в плазмі крові не суттєво асоціювалась зі ступенем чутливості тромбоцитів до лептину, а також із застосуванням гіпотензивних, гіпоглікемічних та ліпіднизницьких препаратів (табл. 2).

Стіл в натуральну величину

Дискримінантний аналіз виявив дві дискримінантні функції, перша з яких була дуже важливою (Таблиця 3). У групі 1 була висока згода між фактичним та передбачуваним членством у кластері (не відповідає). Домовленість була справедливою щодо кластерів 2 та 3 (помірний та високочутливий): 10,9% пацієнтів у кластері 2 та 21,5% пацієнтів у кластері 3 були класифіковані як функціонально належать до кластеру 1 (таблиця 4). Загальна кореляційна матриця в групах показала, що коефіцієнт співвідношення між ІМТ та обхватом талії становив 0,20.Коефіцієнт Каппи становив 0,41, що відповідає справедливій та помірній загальній згоді між фактичним та передбачуваним членством у кластері. Коли ми виключили ІМТ та окружність талії з дискримінантної моделі, лише 44,4% випадків були правильно класифіковані. Відповідні значення, отримані шляхом включення ІМТ, лише обхвату талії або обох змінних, становили 52, 6, 53, 8 та 60,0%.

Стіл в натуральну величину

Стіл в натуральну величину

Високоефективний коефіцієнт Box M показав, що ризик неправильної класифікації дискримінантною функцією був дуже низьким, тобто визначення окремих профілів реакції тромбоцитів на лептин було дуже надійним. Серед змінних, розглянутих в аналізі, концентрація лептину в плазмі, окружність смуги, тригліцериди плазми та ІМТ суттєво сприяли дискримінантній функції (табл. 5). Коли ІМТ був виключений з аналізу, коефіцієнт окружності смуги трохи збільшився з 0,427 до 0,499. Вік, стать, звички куріння, статус постменопаузи, глюкоза в плазмі натще і використання антигіпертензивних, гіпоглікемічних або ліпід-ліпідних засобів не сприяло функціонувати. 1 або 2.

Стіл в натуральну величину

обговорення

Нові результати цього дослідження є свідченням того, що пацієнтів із надмірною вагою або ожирінням можна згрупувати на основі їх ступеня здатності реагувати на тромбоцити на лептин, і що фактори ризику метаболічного синдрому можуть сприяти визначенню клінічного профілю респондентів.

Як чутливі, так і нечутливі тромбоцити здорових донорів експресують лише довгу сигнальну форму ObRb, тоді як жодна не експресує коротку несигнальну форму. Знижена експресія ObRb на мембрані тромбоцитів та/або варіанти ObRb з низькою спорідненістю можуть бути використані для пояснення нереактивності лептину. 21 Наші результати розширюють результати, про які повідомляється у звіті Giandomenico et al. 21, демонструючи існування трьох скупчень пацієнтів із надмірною вагою або ожирінням з різним ступенем чутливості тромбоцитів до лептину. Крім того, циркулюючий лептин та вибрані метаболічні фактори ризику можуть розрізняти кластери, тобто сприяти визначенню значущих клінічних закономірностей, пов’язаних з реакцією тромбоцитів на лептин.

Збільшення окружності талії сильно пов’язане зі зниженням чутливості до інсуліну28, а ожиріння живота є одним з найважливіших факторів ризику метаболічного синдрому. 22, 28, 29, 30 У фізіологічних умовах відомо, що інсулін зменшує агрегацію тромбоцитів за рахунок зменшення реакції тромбоцитів на АДФ і тромбін. 31, 32 Тромбоцити у інсулінорезистентних пацієнтів мають знижену чутливість до антитромбоцитарних ефектів інсуліну, 33 і можна припустити, що більша інсулінорезистентність у пацієнтів з більш вираженим ожирінням ожирінням може сприяти профілю чутливості тромбоцитів до лептину у наших пацієнтів. вивчення.

Дисліпідемія також може сприяти збільшенню активації тромбоцитів. Встановлено, що тригліцериди плазми збільшують агрегацію тромбоцитів і частоту венозної тромбоемболії, тоді як ці побічні ефекти зворотні холестерином ЛПВЩ. Оскільки метаболічний синдром характеризується дисбалансом підвищеного окисленого ліпопротеїну низької щільності (ЛПНЩ) та зниження рівня холестерину ЛПВЩ, це, швидше за все, призведе до гіперагрегації. Іншою особливістю дисліпідемії при метаболічному синдромі є значне підвищення рівнів ліпопротеїдів дуже низької щільності (ЛПНЩ), які, як було показано, індукують вироблення тромбоцитів тромбоцитів А2 шляхом зв'язування ліганду CD36. Ліганд CD36 сприяє доставці жирних кислот з утворенням тромбоцитів тромбоцитів, які стимулюють агрегацію тромбоцитів, індуковану колагеном. 38

Отримані нами дані не демонструють, що залежна від лептину агрегація тромбоцитів причинно пов'язана з факторами ризику метаболічного синдрому. Дійсно, як реакція тромбоцитів на лептин, так і метаболічний синдром можуть бути різними ефектами одного і того ж стану захворювання, тобто резистентності до інсуліну. Однак не виключено, що співіснування сприйнятливості до лептину та вибраних факторів метаболічного ризику може повідомляти про чітко визначений профіль високого ризику в популяції із надмірною вагою або ожирінням у амбулаторних пацієнтів, а також слід проводити подальші дослідження для уточнення прогностичного значення такої асоціації.,

Наше дослідження також має деякі обмеження. Концентрації інсуліну в плазмі крові не вимірювали. Тому неможливо точно оцінити ступінь резистентності до інсуліну та його внесок у наші результати. Однак вибрані фактори ризику метаболічного синдрому, такі як окружність талії та тригліцериди, сильно пов'язані зі зниженою чутливістю до інсуліну. 28 Крім того, як показують результати однофакторного аналізу, взаємозв'язок між кластерами та певними факторами ризику метаболічного синдрому, такими як окружність талії та холестерин ЛПВЩ, може бути нелінійною. Ця проблема, можливо, зменшила дискримінаційну здатність цих змінних у нашому дослідженні. Нарешті, конструкція поперечного перерізу не дає можливості перевірити, чи збільшується залежна від лептину агрегація тромбоцитів із втратою ваги, покращення чутливості до лептину та зниження рівня лептину. Хоча дефіцит калорій спричиняє більші гемостатичні реакції на лептин у осіб із нормальною вагою, 39 цей висновок слід повторити в перспективі у пацієнтів із надмірною вагою та ожирінням.

На закінчення наше дослідження показує, що здатність агрегації тромбоцитів до лептину та метаболічний синдром тісно пов'язані. Наше дослідження надає додаткову підтримку гіпотезі, що безпосередня взаємодія адипоцитів з тромбоцитами може сприяти надмірному ризику серцево-судинних подій у пацієнтів із надмірною вагою та ожирінням. На основі наших та попередніх досліджень представляється розумним перевірити, чи характерна картина реакції агрегації тромбоцитів на лептин характеризує пацієнтів з особливо високим ризиком серцево-судинних ускладнень.