Активність ферменту панкреатичної ліпази у бройлерів, які споживають борошно з плодів плодів Roystonea regia у раціоні. Технічна примітка

активність

2 Інститут наук про тварин, поштова скринька 24, Сан-Хосе-де-лас-Лахас, Маябеке, Куба

Для визначення активності ферменту панкреатичної ліпази у бройлерів, які споживали в раціоні борошно плодового типу Roystonea regia (пальмове борошно), було використано 40 бройлерів-самців. Була застосована повністю рандомізована конструкція з чотирма обробками, які полягали в заміні 0, 5, 10 та 15% пальмового борошна. Через 42 дні їх жертвували для отримання підшлункової залози та визначали ферментативну активність ліпази підшлункової залози. Спостерігався вплив дієти на цей показник, який був більшим у курей, які споживали пальмове борошно, порівняно з контрольною дієтою (1983 проти 2500, 2566 та 3283 мл NaOH/хв/мг білка відповідно) (P Oliva et 2018). У його олії переважають олеїнова, лауринова, пальмітинова та лінолева кислоти, які містять 8 та 18 атомів вуглецю, головним чином відповідаючи за її статус джерела енергії. Пальміч є одним з основних видів альтернативної енергії, який є на Кубі, де він популярний як нетрадиційне джерело їжі для свиней (Ly et al. 2017), але без конкретних результатів для птахів.

Ядро пальми, яке перетравлюється в шлунково-кишковому тракті птахів, потребує ліполітичних ферментів. Серед них ліпаза підшлункової залози є однією з найбільш вивчених. Цей фермент може бути використаний як маркер для перетравлення цієї фракції. Отже, метою цього дослідження було визначити ферментативну активність ліпази підшлункової залози у бройлерів, які споживають у раціоні фруктове борошно Roystonea regia.

Було використано сорок восьмиденних бройлерів-самців (HE21), які утримувались у металевих клітках. Тварин піддавали експериментальному харчуванню від 8 днів до 42 днів, які формулювали відповідно до вимог, встановлених NRC (1994) для цієї категорії птахів. Контроль складався із звичайної соєво-кукурудзяної дієти. В інші три обробки було включено 5, 10 і 15% пальмового борошна, так що ізопротеїнова та ізоенергетична дієти підтримувались у початковий, ріст та кінцевий періоди. Протягом усього часу експериментів кури мали вільний доступ до води та їжі.

Пальма в натурі була отримана з провінції Маябеке. Процес сушіння полягав у від’єднанні насіння пальмових ядер вручну, а потім їх виставляли на сонце, розклавши на сушильній пластині, протягом п’яти днів поспіль.

Сухий матеріал зберігався в мішках, у закритих приміщеннях, на складах з достатньою вентиляцією та низькою вологістю. Кожні п’ять днів його подрібнювали з рештою компонентів раціону зернових та злакових культур у відповідній пропорції з метою продовження терміну служби пальмового борошна, яке швидко згіркає, і знижує його біологічну якість та смакові якості ( Оліва та ін., 2018).

За 42 дні експерименту десять курей зважували та забивали за одне лікування відповідно до методу кровотечі з яремної вени. Для цього дотримувались традиційних процедур (оглушення, кровотеча та випотрошення), рівно через дві години та тридцять хвилин після прийому тваринами їжі, з метою взяття зразків підшлункової залози та отримання гомогенату підшлункової залози. Негайно підшлункову залозу видалили з кожної курки і занурили в 4 мл/г фізіологічного розчину, між 0 і 4 ºC, для передачі в лабораторію. Органи трьох тварин гомогенізували вручну. Їх центрифугували при 5000 об/хв. протягом 10 хв при 4 ºC у холодильній центрифузі марки IEC CL31R. Гранулу викидали, а супернатант зберігали в невеликих аліквотах при -80 ° C.

Концентрацію білка визначали методом Бредфорда (1976) на спектрофотометрі Rigol UV-vis серії Ultra-3400. Розрахунок концентрацій проводили шляхом інтерполяції значень поглинання зразків у стандартній кривій бичачого сироваткового альбуміну (BSA) (0,01-5 мг/мл). Це було стандартизовано для всіх досліджуваних гомогенатів у дозі 3 мг/мл, для яких були зроблені відповідні розведення в кожному випадку. Всі аналізи проводили у трьох примірниках.

Для досягнення максимальної надійності у визначенні активності ферменту використовували запропонований лінійний діапазон для ферменту, для якого використовували час інкубації п’ять хвилин (León et al. 2014). Активність ліпази визначали методом, запропонованим Tietz and Fiereck (1966). Необхідний об'єм NaOH (50 мМ) визначали для нейтралізації виділених жирних кислот після ферментативної деградації. Система витримувалась при помірному перемішуванні при 37 ° C, і в якості субстрату використовували 3 мл оливкової олії. Активність ферменту виражали у мл NaOH/хв/мг білка.

Для статистичного аналізу результатів була використана повністю рандомізована конструкція з чотирма обробками та трьома повтореннями (по три підшлункової залози). Різниці між середніми показниками визначали згідно з Дунканом (1955), коли це було необхідно. Використовувався статистичний пакет Infostat (Di Rienzo et al. 2012).

Спостерігався значний вплив включення пальмового борошна в раціон, зокрема, на активність ферменту панкреатичної ліпази у бройлерів (фіг.1). Обробка з включенням 15% пальмового борошна значно підвищила активність ферменту щодо решти обробок. Лікування 5 і 10% не відрізнялося одне від одного. Контролем було лікування, яке показало найменшу активність (P Barberá 2016).

Рисунок 1 Ферментативна активність ліпази підшлункової залози у бройлерів, які споживають різний рівень шроту з королівського пальмового горіха

Відповідно до Gonçalves et al. (2010), такі харчові фактори, як вторинні метаболіти, також можуть модифікувати активність панкреатичної ліпази. Ці автори заявили, що відсутність високомолекулярних полімерних флавоноїдів, яким приписують дію, що пригнічує активність ліпази підшлункової залози, здійснюючи специфічну взаємодію з ферментом, зазвичай присутній у плодах інтенсивного забарвлення, таких як виноград. Хоча плоди пальми мають чорнувато-коричневе забарвлення, під час якісного фітохімічного скринінгу, проведеного на борошні цього фрукта, присутність вторинних метаболітів була виключена (Ly et al. 2017), що пояснювало б результат отримані.

Barberá (2016) продемонстрував, що зміни у складі раціону, залучаючи різні джерела ліпідів та жирних кислот, можуть спричинити зміни в активності ферменту ліпази. Хоча важливо враховувати, що секрети підшлункової залози реагують на харчовий стимул, активність цих ферментів, потрапляючи в слизову оболонку кишечника, може також впливати на бройлерів (León et al. 2014), як спостерігається в цьому дослідженні.

Підвищена активність панкреатичної ліпази може збільшити перетравлення ліпідів, що може бути корисно для тварини, оскільки відомо, що ці біомолекули виконують кілька важливих біологічних функцій в організмі. Серед них можна зазначити, що вони складають структурні компоненти мембран, а також форми транспортування та зберігання катаболічного палива. Вони також діють як захисне покриття на клітинній поверхні, що пов’язано з розпізнаванням клітинних клітин, видовою специфічністю та тканинним імунітетом. Вони також мають інтенсивну біологічну активність, оскільки серед них є деякі вітаміни (A, B, D, E і K) та гормони.

Зроблено висновок, що включення борошна з пальмових фруктів у раціони для бройлерів підвищує активність ферменту підшлункової ліпази, що робить можливим перетравлення ліпідів у шлунково-кишковому тракті.

Barberá, A. 2016. Вплив матриксу та типу жиру на засвоюваність ліпідів та білків деяких рибних продуктів. Кандидатська дисертація. Escola Tècnica Superior d’Enginyeria Agronòmica i del Medi Natural, Політехнічний університет Валенсія, Валенсія, Іспанія. стор. 42 [Посилання]

Бредфорд, М. 1976. "Швидкий і чутливий метод кількісного визначення кількості мікрограмів білка за принципом зв’язування білка з барвником". Аналітична біохімія, 72 (1-2): 248-254, ISSN: 0003-2697, DOI: 10.1016/0003-2697 (76) 90527-3 [Посилання]

Ді Рієнцо, Дж. А., Казановес, Ф., Бальзаріні, М. Г., Гонсалес, Л., Таблада, М. і Робледо, К. 2012. ІнфоСтат. версія 2012, [Windows], Національний університет Кордови, Аргентина: Grupo InfoStat. Доступно: http://www.infostat.com.ar [Посилання]

Дункан, Д.Б. 1955. "Багаторазові випробування та багаторазові випробування F". Біометрія, 11 (1): 1-42, ISSN: 0006341X, DOI: 10.2307/3001478 [Посилання]

Goncalves, R., Mateus, N. & De Freitas, V. 2010. “Вивчення взаємодії ліпази підшлункової залози з проціанідинами оптичними та ферментативними методами”. Журнал сільськогосподарської та харчової хімії, 58 (22): 11901-11906, ISSN: 0021- 8561, DOI: 10.1021/jf103026x [Посилання]

Леон, М. V, Коліна, Дж. Дж., Ріко, Д., Араке, Х., Россіні, М., Кастаньєда, М. В. і де Арвело, E.E.R. 2014. "Активність ферментів трипсину підшлункової залози та ліпази у свиней, які харчуються борошном підзігуао (Bactris gasipaes HBK) та синтетичним лізином". Журнал факультету ветеринарних наук, UCV, 55 (1): 11-17, ISSN: 0258-6576 [Посилання]

Ly, J., Ayala, L. & Delgado, E.J. 2017. «Харчова цінність пальмичей у свиней та фактори, що впливають на неї». Дослідження тваринництва для розвитку сільських територій, 29 (4), Доступно: https://www.lrrd.cipav.org.co/lrrd29/4/ly29064.html [Посилання]

N.R.C. (Національна наукова рада). 1994. Потреби птиці в поживних речовинах. 9-е виправлене видання за редакцією National Academies Press, Вашингтон, округ Колумбія, США. стор. 176, ISBN: 0309048923 [Посилання]

Оліва, Д., Мартінес, М., Хіменес, Л. та Лі, J. 2018. “Особливості продуктивності вирощування свиней, що харчуються дієтами з королівського горіхового шроту”. Кубинський журнал сільськогосподарських наук, 52 (2): 1-8, ISSN: 2079-3480. [Посилання]

Тіец, Н.В. & Fiereck, E.A. 1966. "Специфічний метод визначення сироваткової ліпази". Clinica Chimica Acta, 13 (3): 352-358, ISSN: 0009-8981, DOI: 10.1016/0009-8981 (66) 90215-4. [Посилання]

Отримано: 29 липня 2019 р .; Затверджено: 08 січня 2020 року