предметів
реферат
Два нові похідні α-пірону, інфекктопірони A ( 1 ) і B ( 2 ) були отримані з екстракту EtOAc ендофітного гриба Stemphylium sp. 33231, виділений з мангрового заростя Brguiera sexangula var. rhynchopetala, видобувається в Південно-Китайському морі. Їх структури були з’ясовані шляхом детального аналізу складних спектроскопічних даних. Сполуки 1 a 2 були оцінені на їх антибактеріальну активність і мали широкий спектр антибактеріальної активності проти п’яти наземних патогенних бактерій.
У величезному морському середовищі існують різні екосистеми, в тому числі невикористані дотепер і географічно та таксономічно не описані організми. Морські мікроорганізми, особливо морські гриби, добре відомі як багаті джерела структурно цікавих та біологічно активних сполук. 1, 2 Хімічні дослідження ендофітних грибів, отриманих з дерев манго, особливо з субтропічного острова Хайнань, Китай, за останні роки різко збільшились. 3, 4, 5 В результаті адаптації до деяких особливих середовищ ендофітні гриби мангрових зародків створили унікальний генетичний фон та шляхи метаболізму. 6, 7, 8 Обнадійливо, що біоактивні сполуки отримували з грибів, отриманих з мангрових грибів. 9, 10, 11, 12 Ендофітні гриби також виявились перспективними джерелами нових природних продуктів із перспективними біологічними та фармакологічними ефектами. 13, 14, 15
У пошуках нових антибактеріальних природних продуктів з морських губок у Південно-Китайському морі гриб Stemphylium sp. 33231, отриманий з листя Brguiera sexangula var. rhynchopetala привернув нашу увагу. Екстракт EtOAc грибного бродильного бульйону показав антимікробну дію проти перевірених штамів бактерій. Фракціонування біоактивного екстракту, проведеного біоаналізом, призвело до виділення двох нових похідних α-пірону, інфектопірону A ( 1 ) та інфектопірон В ( 2 ) (Фігура 1). Сполуки 1 a 2 були оцінені на їх антибактеріальний ефект. Тут ми представляємо ізоляцію, з’ясування структури та біологічної активності цих сполук.
Будова сполук 1, 2 та інфектопірон.
Повнорозмірне зображення
Результати і обговорення
Виділення та ідентифікація сполук
Екстракт грибкової культури EtOAc обробляли комбінацією хроматографічних матеріалів, колонковою хроматографією на силікагелі, октадецилсіланом (ODS) та колоночною хроматографією Sephadex LH-20. Структури з'ясовували за допомогою спектроскопічних даних ЯМР та HRESI-MS.
Стіл в натуральну величину
Основна підструктура сполуки 1 a 2 за даними HMBC, кореляція 1 H - 1 H COZY та NOESY.
Повнорозмірне зображення
З'єднання 2 був виділений у вигляді тонкого світло-жовтого порошку і мав молекулярну формулу C 15 H 18 O 6 (7 ступенів ненасиченості) на основі значущого сигналу при m/z 317.0992 [M + Na] + у HRESI-MS. Дані ЯМР 1 Н та 13 C 2 (Таблиця 1) були подібними до даних 1, за винятком існування однієї додаткової метильної групи при 5 H 3, 43 та 8 C 58,4 для 7'-OMe, що узгоджується із збільшенням. в МВт 2 на 14 аму порівняно з 1 . Подальше підтвердження було отримано із спостережуваними кореляціями HMBC H-7 'до 7'-OMe, 2', 3 'та 4' (рис.2). Детальний аналіз спектрів 2D ЯМР (HSQC, 1 H - 1 H COZY, HMBC і NOESY) підтвердив, що інші частини молекули були такими ж, як у 1 . Будова сполуки 2 був ідентифікований як інфекція інфіктопірону В (малюнок 1).
Біологічні властивості інфекктопіронів А і В
Попередні результати антибактеріального тесту показали, що при концентрації 20 мкг мл-1, 1 a 2 показали широкий спектр антибактеріальної дії проти п’яти наземних патогенних бактерій. Значення MIC 1 a 2 були додатково випробувані методом мікропланшетного аналізу. Результати в таблиці (2) показали це 1 мав помірну антибактеріальну активність щодо Bacillus subtilis (ATCC 6633), Micrococcus tetragenus (ATCC 13623) та Micrococcus luteus (ATCC 9341) із значеннями MIC 10,0 мкг-1 для кожного. Поки склад 1 показав значну активність щодо S. albus (ATCC 8799) та кишкової палички (ATCC 25922) зі значеннями MIC 5,0 мкг мл-1 та 2,5 мкг мл-1. Сполуки 1 a 2 мали подібну антибактеріальну активність, але 2 показав слабшу активність щодо S. albus (ATCC 8799) з MIC 10,0 мкг мл-1. Ці результати показали, що група 7'-ОН має важливе значення для антибактеріальної активності. Обидва сполуки тестували на аналіз цитотоксичності мікротитру з використанням солі Artemia. Значної цитотоксичної активності щодо A. salina не спостерігалося при 50 мкг мл -1 .
Стіл в натуральну величину
методи
Прес-форми
Штам грибів Stemphylium sp. 33231 був виділений із мангрового штаму Brguiera sexangula var. rhynchopetala, видобутого в Південно-Китайському морі в серпні 2012 року. Штам зберігався в ключовій лабораторії хімії тропічних рослин Міністерства освіти, Університету хімії та хімічної інженерії, Нормальний китайський університет Хайнань, Хайнань. Штам грибів культивували в 30 л рідкого середовища з глюкозою в картоплі (15 г глюкози і 30 г морської солі в 1 л настою картоплі, в 1 л колб Ерленмейера, кожна з яких містить 300 мл культурального середовища) при 25 ° С без струшування.4 тижні.
Ідентифікація грибка
Гриб був ідентифікований відповідно до його морфологічних характеристик та протоколу молекулярної біології шляхом ампліфікації 18S рРНК та секвенування області ITS. Дані послідовності були подані до GenBank під номером приєднання KF479349, а штам грибів визначено як Stemphylium sp.
Загальні експериментальні процедури
Силікагель (Qing Dao Hai Yang Chemical Group Co., Циндао, Китай; 200-300 меш), октадецилсилильний силікагель (YMC, Кіото, Японія; 12 нм-50 мкм) і Sephadex LH-20 (GE Healthcare, Шанхай, Китай ) використовували для колонкової хроматографії (CC). Пластини з силікагелем із попереднім покриттям (Yan Tai Zi Fu Chemical Group Co., Яньтай, Китай; G60, F-254) використовували для ТШХ. Спектри ЯМР 1 Н та 13 C реєстрували на AV-спектрометрі Bruker (Bruker, Цюріх, Швейцарія) при 400 МГц у CDCl 3 або DMSO-d 6. Хімічні зсуви δ повідомляються в проміле, використовуючи тетраметилсилан (TMS) як внутрішній стандарт, а константи зв’язування (J) у Гц. Спектри ESI-MS та HRESI-MS вимірювали на мас-спектрометрі Q-TOF Ultima Global GAA076. ІЧ-спектри реєстрували на спектрофотометрі Nicolet 6700 (Thermo Fisher Scientific Co., Шанхай, Китай).
Добування та ізоляція
Культури грибків фільтрували через тонку прокладку і фільтрат екстрагували EtOAc (3 х 30 л, по 10 годин кожна). Екстракти EtOAc концентрували у вакуумі, отримуючи маслянистий залишок (25,2 г). який піддавали дії силікагелю CC (петролейний ефір/EtOAc v/v, 100: 0 - 100: 100) з отриманням п’яти фракцій (Fr. 1 - Fr. 5). О. 4 виділяли CC на силікагелі, елююючи петролейним ефіром - EtOAc (1: 1), потім піддавали дії Sephadex LH-20 CC, елююючи нафтою-CHCl 3 -MeOH (2: 3), і далі очищали за допомогою октадецилсилілієвої кремнієвої кислоти. гель елюювали 50% MeOH/H 2 O, отримуючи з'єднання 2 (6,2 мг). О. З'єднання 5 виділяли CC на силікагелі, елююючи петролейним ефіром-EtOAc (1: 2), потім піддавали дії Sephadex LH-20 CC, елююючи нафтою-CHCl 3 -MeOH (2: 3), і далі очищали за допомогою октадецилсилильного кремнезему. елюювали 40% MeOH/H 2 O, отримуючи вказане в заголовку з'єднання 1 (11,2 мг).
Фізичні властивості сполук 1 a 2
Інфектопірон А ( 1 ): світло-жовтий порошок; УФ (MeOH) λmax (log δ) 334 (1, 12), 213 (2, 29) нм; ІЧ (KBr) νmax 3429, 1572, 1408 см-1; ЯМР 1 Н та 13 C: див. Таблицю 1; HRESI-MS m/z 303.0840 [M + Na] + (розраховано для C 14 H 16 O 6 Na, 303, 0839).
Інфектопірон В ( 2 ): світло-жовтий порошок; УФ (MeOH) λmax (log δ) 309 (0,95), 211 (2,20) нм; ІЧ (KBr) νmax 3429, 1570, 1413 см-1; ЯМР 1 Н та 13 C: див. Таблицю 1; HRESI-MS m/z 317.0992 [M + Na] + (вичислено для C 15 H 18 O 6 Na, 317, 0995).
Антибактеріальні тести
Антибактеріальну активність визначали щодо п’яти наземних патогенних бактерій, включаючи Staphylococcus albus (ATCC 8799), E. coli (ATCC 25922), B. subtilis (ATCC 6633), M. tetragenus (ATCC 13623) та M. luteus (ATCC 9341). тест мікропланшетів. 18