предметів

реферат

результат

Ефективність росту та склад тіла

Щури в кожній групі мали однакову початкову вагу тіла (рис. 1). Порівняно з групою казеїну, яка служила контролем у нашому експерименті, група, яка отримувала дієтичний соєвий білок, значно зменшила щоденне споживання корму (зниження на 9%, Р 0,05). Для оцінки впливу соєвих та м’ясних білків на ожиріння тіла вимірювали масу жирової тканини епідидиму та вміст ліпідів у печінці (рис. 2). Лише соєвий білок зменшував вагу епідидимальної жирової тканини (P

соєві

( A ) вага тіла; ( B ) Щоденний приріст ваги; ( C. ) Коефіцієнт конверсії корму (BWG/FI). ( D ) Щоденне споживання корму. Значення показані як середнє значення ± SD. Кількість біологічних повторів груп казеїну, сої та м'ясних білків становило 10, 10 та 40. Для панелі ( A ), проводили лінійну регресію маси тіла щурів. Захоплення, що представляє початкову масу тіла щурів, не відрізнялося для трьох груп. Схил представляє швидкість росту щурів та його статистичну значимість (P

( A ) EATW: абсолютна вага жирової тканини епідидиму; EATW ​​/ BW: відносна вага жирової тканини епідидимуму до маси тіла. ( B ) TC-L: загальний холестерин у печінці; TAG-L: триацилгліцерин у печінці. ( C. ) LW: абсолютна вага печінки; LW/BW: відносна вага печінки до маси тіла. Значення показані як середнє значення ± SD. Кількість біологічних повторів груп казеїну, сої та м'ясних білків становило 10, 10 та 40. Різні літери над смугами вказують на значну різницю в Р

( A ) Гени: значущий рівень був встановлений як Р

Порівняно з казеїнами, соєвими та м'ясними білками, у щурів були викликані різні фізіологічні та молекулярні ефекти, що свідчить про поліпшення метаболічного стану, що, ймовірно, пов'язано з різним складом соєвих та м'ясних білків. Соєвий білок - це суміш β-конгліцину та гліцину, яка становить 90% від загального білка 19. Білки м’яса набагато більш різноманітні, вони складаються з міофібрилярних (50-55%), саркоплазматичних (30-34%) та білків сполучної тканини (10-15%) 20. Порівняно з казеїном, ці структурно відмінні білки в соєвих і м’ясних білках, швидше за все, засвоюються по-різному, що призводить до різноманітного асортименту пептидів, що всмоктуються із шлунково-кишкового тракту. Дійсно, наше попереднє дослідження показало, що харчові білки різних видів тварин також специфічно перетравлювались, що призвело до продукування різних пептидів у шлунку та тонкій кишці щурів 21. За винятком білкової композиції, найважливіші критерії та маркери для оцінки якості білків у складі АА та, зокрема, фракції ЕАА у харчових білках 22 .

Згідно з нашими результатами, дієтичний соєвий білок викликав значні фенотипічні зміни у щурів, включаючи істотно зменшене споживання корму та збільшення ваги. Це означає, що соєвий білок може пригнічувати апетит і ріст щурів, чого не було у щурів, яких годували м’ясними білками. Кореляційний аналіз виявив високопозитивну кореляцію між збільшенням ваги та споживанням корму (коефіцієнт кореляції = 0,8, Р 26. Тому ми дійшли висновку, що інгібуючий ефект росту соєвого білка обумовлений пригніченим споживанням корму, яке може бути спричинене дефіцитом метіоніну. насправді дієта та обмеження метіоніну мали місце у групі соєвих білків, але щури, які годувались соєвим білком, важили на 20% менше, ніж група казеїну, але споживали лише 9% менше їжі, в результаті чого споживання корму на грам маси тіла становило (0,65 г/г маси тіла) насправді був вищим для групи соєвих білків, ніж для групи казеїну (0,57 г/г маси тіла) Отже, фактично не було обмежень у харчуванні на основі маси тіла, а лише обмеження метіоніну в соєвому білку групи.

Зниження жиру в організмі було визнано, коли потреби в енергії для росту та підтримки перевищують споживання енергії 35. Наші транскриптомічні результати показали, що на енергетичний метаболізм (окисне фосфорилювання та ланцюг транспорту електронів) у печінці не впливають дієтичні м’ясні білки, що відповідає незміненій жировій масі щурів, яких годують м’ясом. Однак, на відміну від м’ясної групи білків, печінкова експресія генів, що беруть участь в окислювальному фосфорилюванні та ланцюзі транспорту електронів, була значно збільшена у щурів, яких годували соєвим білком. У той же час ці гени суттєво перекривались з генами-мішенями Rictor, які, як вважалося, були верхнім інгібітором регулятора вищестоячого соєвого білка (Z бал = -6,090). Ріктор є ключовою регуляторною/структурною субодиницею mTORC2 і відіграє важливу роль у регуляції печінкового гліколізу та ліпогенезу за допомогою глюкокінази та Srebfl 36. Тому ми вважаємо, що вплив соєвого білка на зменшення жиру в організмі може бути пов’язаний із посиленням енергетичного обміну та зменшенням ліпогенезу, опосередкованого регуляторами транскрипції Rictor та Srebf1.

Інсулінорезистентність є основною складовою метаболічного синдрому 37. Попереднє дослідження припустило, що соєвий білок може зменшувати секрецію інсуліну підшлунковою залозою, що, в свою чергу, було пов'язано зі структурою амінокислот у плазмі після споживання соєвого білка 38. Однак деякі епідеміологічні дослідження показують, що тваринні білки можуть збільшити ризик діабету 39. Uhe та ін. (1992) виявили, що прийом бичачого бичачого, курячого або рибного білка не змінює рівень інсуліну у людей 40. У цьому дослідженні ми виявили, що рівень інсуліну в плазмі крові значно зменшувався як соєвими, так і м’ясними білками порівняно з групою казеїну, припускаючи, що як соєві, так і м’ясні білки мають потенційний вплив на покращення чутливості до інсуліну.

Матеріали і методи

Заява з етики

Самців щурів Sprague Dawley (SD) придбали в 3-тижневій Шанхайській лабораторії досліджень тварин при Китайській академії наук. Тварин поселяли парами в контрольованому середовищі з 12-годинним циклом світло-темно (12:12 год цикл зворотного світла/темряви, 23 ° C). Експеримент на тваринах проводився відповідно до Посібника з догляду та використання лабораторних тварин з Нанкінського сільськогосподарського університету (Нанкін, Китай) та Академії сільськогосподарських наук провінції Цзянсу (номер ліцензії SCXK (Su) 2002-0029). Все розроблено з метою мінімізації кількості використовуваних тварин та мінімізації їх страждань. Щури були акліматизовані за 1 тиждень до дослідження і мали вільний доступ до води та стандартного щура під час експерименту.

дієта

Стіл в натуральну величину

Експериментальний протокол

Коли щури прибули до лабораторії, усіх щурів протягом 7 днів годували стандартною дієтою AIN-93G, щоб адаптуватися до очищеного раціону та нових умов. Згодом щурів випадковим чином розділили на одну з шести груп (n = 10 на групу), тобто групи казеїну, сої, свинини, яловичини, курки чи риби. Щурів годували цими дієтами протягом 7 днів. Вагу тіла та споживання їжі вимірювали кожні 2 дні. У день жертвоприношення щурів позбавляли їжі за 4 години до жертви, але їм надавали вільний доступ до води. Щурів знеболювали шляхом вдихання ефіру. Кров відбирали шляхом орбітальної пункції та виділяли плазму. Отримано печінкову та епідидимальну жирові тканини, зважені та швидко заморожені в рідкому азоті. Усі зразки зберігали до -80 ° C.До аналізу Для полегшення порівняння між соєвими та м'ясними білками порівняно з казеїном всі дані з чотирьох груп м'ясного білка, включаючи дані про фізіологічну, плазмову та експресію генів, були об'єднані та проаналізовані як група. окремі м’ясні білки.

Вміст жиру в печінці та визначення плазмових параметрів

Вміст ТАГ та ТК печінки визначали за допомогою комерційних наборів, придбаних у Інституті біоінженерії Нанкін Цзяньчен (Нанкін, Китай). Плазмові концентрації TAG, TC, глюкози, сечовини та загального білка аналізували за допомогою автоматизованого аналізатора Hitachi 7180 (Токіо, Японія). Концентрацію інсуліну в плазмі крові визначали за допомогою радіоімуноаналізу, придбаного у Пекінському інституті біологічних технологій (Пекін, Китай). Визначення моделі гомеостазу інсулінорезистентності (HOMA-IR) 47 розраховували за рівнянням IR = (інсулін натще в мО/L × глюкоза натще в мМ)/22, 5. Концентрації АА без плазми визначали за допомогою Hitachi L- Аналізатор 8900 AA (Токіо, Японія).

Профілювання експресії генів у печінці шляхом секвенування РНК

Виділення РНК, побудова бібліотеки та послідовність

Загальну РНК печінки виділяли за допомогою набору реагентів RNAiso (Takara, Далянь, Китай). Послідовність РНК з трьох біологічних реплікатів з кожної групи була введена в BGI Tech (Шеньчжень, Китай). Коротко, виділені зразки РНК обробляли ДНКазою I для видалення ДНК і збагачували за допомогою магнітних гранул оліго (dT). MRNA була фрагментована на короткі фрагменти (приблизно 200 п.н.) і перетворена у дволанцюгову кДНК. CDNA очищали магнітними кульками і адаптери перев'язували до фрагментів. Фрагменти збагачували ампліфікацією ПЛР. Бібліотечна продукція була послідовно розподілена на машині Illumina HiSeq 2000 (BGI, Шеньчжень, Китай).

Ідентифікація диференційовано експресованих генів

Статистичні методи

За винятком даних RNA-seq, усі статистичні аналізи проводились із використанням SPSS версії 16.0 (Чикаго, Іллінойс). Дієтичний ефект на вимірювані змінні аналізували шляхом одностороннього дисперсійного аналізу (ANOVA), а середні показники порівнювали шляхом множинного порівняння з найменш значущою різницею (LSD). Статистичну значимість визначали за P