ключових

  • предметів
  • реферат
  • вступ
  • Матеріали і методи
  • Джерело та обробка тканин
  • імуногістохімія
  • Джерело антитіл
  • результат
  • Імунолокалізація PDE2, PDE5, PDE11, cGKI, eNOS та віментину в кліторі людини
  • обговорення

предметів

  • Стільникова сигналізація
  • ізоферменти
  • м'язи
  • Репродуктивна біологія

реферат

Матеріали і методи

Джерело та обробка тканин

Відповідно до норм місцевого комітету з етики медичного факультету в Ганновері кліторальні тканини від середньої до проксимальної частини були отримані протягом 4-6 годин після смерті чотирьох померлих жінок (у віці від 18 до 42 років). Суб'єкти не мали відомостей про захворювання, пов'язані із статевою дисфункцією. Після висічення зразки тканин негайно поміщали в крижаний розчин 4% формальдегіду у забуференному фосфатом сольовому розчині (PBS; pH 7,4).

імуногістохімія

Зразки кліторної тканини фіксували зануренням на 4 години в крижаний розчин 4% формальдегіду в PBS (pH 7, 4) і тричі промивали протягом 24 годин крижаним PBS, що містить 15% сахарози. Зразки поміщали в Tissue-Tec (Miles Laboratories, Elkhart, IN, USA), а потім швидко заморожували в ізопентані при -40 ° C. Тканину розрізали на скибочки товщиною 8-10 мкм і розморожували на предметних предметних стеклах. Зрізи інкубували протягом 2 годин у PBS, доповненому 0,2% Triton X-100 та 1% бичачого сироваткового альбуміну, з подальшою інкубацією протягом 24 годин (при кімнатній температурі) з первинними антитілами (анти-eNOS, -sm α-актин). PDE2, -PDE5, -cGK та -vimentin) у правильному розведенні (анти-α-актин: 1: 400, анти-eNOS: 1: 1000, анти-PDE2/PDE5: 1: 250, анти-cGK: 1: 250, антивіментин: 1:40). Після промивання зрізів PBS застосовували або флуоресцеїновий ізотіоціанат, або мічені Техасом червоні вторинні антитіла (розведення 1:80 та 1: 160), а зрізи інкубували протягом 2 годин. Потім зрізи поєднували з фенілендіаміном. Візуалізацію розпочали за допомогою лазерного мікроскопа (Olympus, Токіо, Японія), а візуалізацію виконували за допомогою ViewFinder Lite (версія 2.0, Pixera, Egham, Великобританія).

Джерело антитіл

Антитіла, спрямовані проти PDE2A, PDE5A та PDE11A, були придбані у FabGennix (Frisco, TX, USA), анти-cGKI AB - у Calbiochem (La Jolla, CA, USA), α-гладком'язовий актин, -віментин та - антитіла eNOS були Sigma BioSciences (Сент-Луїс, Міссурі, США). Фрагменти F (ab) 2, кон'юговані з техаським червоним та флуоресцеїном, були отримані від лабораторій імунологічного дослідження Джексона (Вест-Гроув, Пенсільванія, США).

результат

Імунолокалізація PDE2, PDE5, PDE11, cGKI, eNOS та віментину в кліторі людини

( a - f ) Лазерна флуоресцентна мікроскопія: експресія циклічного гуанозинмонофосфату (GMP), що зв’язує фосфодіестеразу (PDE) 2 (циклічний аденозинмонофосфат (AMP) PDE, стимульований циклічним GMP; a ), фосфодіестераза (PDE) 5 (циклічний GMP) PDE; b ) забарвлений проти α-гладкої мускулатури актину ( c ), тип I протеїнкіназа (cGKI, циклічна GMP-зв’язуюча протеїнкіназа; d ) та ендотеліальну синтазу оксиду азоту (eNOS; e ) в дрібних судинах, що розсіюють субепітеліальний простір та кавернозне тіло клітора (збільшення × 40). f ) Мікрофотографія кліторної тканини, що представляє імуномаркірування для PDE11A (подвійний субстрат PDE) у нервовому стовбурі, розташованому в стромі (збільшення × 100). Вставки в листи b ), d ), f ): контрольне фарбування, що пропускає первинні антитіла (збільшення × 40).

Повнорозмірне зображення

( a - c ) Клітини, подібні до т. Зв інтерстиціальні клітини (IC), що представляють імуносигнали, специфічні для циклічного гуанозинмонофосфату (GMP), що зв’язує фосфодіестеразу (PDE) 2 (циклічний аденозинмонофосфат (AMP) PDE) в базальному епітелії клітора людини. Збільшення: × 10 ( a ), × 20 ( b ), × 100 ( c ). b ) Видуте зображення обрамленої області, показаної в листі a ), c ) продуте зображення обрамленої області, представлене в листі b ). Вставити в ( b ): контрольний колір (збільшення × 40).

Повнорозмірне зображення

a - c ) Деталі базального епітелію клітора людини: інтерстиціальні клітиноподібні (IC) клітини, які виявляють багату фосфодіестеразою (PDE) імунозабарвлення в клітинних тілах і волокнах. Збільшення: × 20 ( a ), × 100 ( b ). b ) Видувне зображення IC-подібної комірки, представлене в a ). Експресія віментину ( c ) в клітині, щоб бути IC у субепідермальному шарі (збільшення × 100). Вставте в c ): контрольний колір (збільшення × 40).

Повнорозмірне зображення

Стіл в натуральну величину

обговорення

Хоча вважається, що клітор пов’язаний з нормальним розвитком жіночого циклу статевого збудження та фази оргазму, дуже мало досліджень вивчало фізіологію цього статевого органу. 5, 6, 7 На підставі цих висновків пропонується роль NO/циклічної системи GMP у процесі жіночого сексуального збудження. Встановлена ​​центральна роль циклічного АМФ та циклічних ізоферментів GMP та PDE у контролі різних функцій тканин та фармакологічна концепція підвищення рівня циклічних нуклеотидів у тканині, наприклад за допомогою селективних інгібіторів PDE, для лікування захворювань сечостатевих шляхів), нетримання сечі, симптоми т. зв доброякісний простатичний синдром, включаючи симптоми нижніх відділів сечовивідних шляхів та непрохідність сечового міхура. 18, 19, 20 Виходячи з гіпотези, згідно з якою відповідь на сексуальну стимуляцію у жінок частково опосередковується тими самими біологічними шляхами, що і у чоловіків, було розглянуто, чи може застосування інгібіторів ФДЕ також сприяти статевим органам жінок. розслаблення гладких м’язів, що призводить до поліпшення субнормального збудження. 21

Нарешті, результати підтверджують роль циклічного передавання сигналів GMP та пов’язаних циклічних cGMP-зв’язуючих білків, таких як PDE2, PDE5 та cGKI, у контролі кліторного потоку. Крім того, здається ймовірним, що PDE2 та PDE11 також беруть участь у механізмі місцевої (нейро) передачі в кліторі.