реферат

Головний

Нещодавно за допомогою молекулярного клонування у хворих на гепатит був виявлений новий флавоподібний РНК-вірус, який називають GB virus-C (GBV-C) або HGV (1, 2). Хоча роль вірусу у спричиненні гепатитів, відмінних від АЕ чи інших захворювань у дорослих, залишається суперечливою, попередні дослідження показали, що HGV передається переважно парентеральним шляхом, таким як переливання крові, вживання наркотиків, гемодіаліз та інфузія продуктів плазми (2). –5). Інші можливі шляхи, такі як передача від матері до немовляти (6-8), статеві та побутові передачі домогосподарств, все ще перебувають у стадії розслідування.

нормальній

Оскільки поки що немає відповідного серологічного тесту на гостру інфекцію HGV, метод селекції залишається методом селекції шляхом виявлення вірусних геномів за допомогою тесту зворотної транскрипції-ПЛР.

Більшість раніше опублікованих досліджень щодо інфекції HGV проводили серед дорослих. Поширеність інфекції HGV у дітей недостатньо встановлена. У дітей групи ризику виявлено РНК HGV (9). Деякі повідомлення свідчать про те, що інфекція HGV була придбана в молодшому віці, ніж інші відомі типи вірусних гепатитів (10, 11). Обстеження HGV-інфекції у дітей допомогло б з’ясувати передачу та клінічне значення цього вірусу. Тому це дослідження проводили як у звичайних осіб, так і у дітей, яким переливали кров для операції на відкритому серці.

методи

Предмети . Було вивчено 200 здорових дітей, 100 хлопчиків та 100 дівчаток у віці від 6 до 12 років та за згодою батьків. З жовтня 1990 року по грудень 1992 року було проведено проспективне дослідження посттрансфузійного гепатиту, в якому взяли участь 94 дитини. Діти, чиї сироватки містили виявляється анти-HCV, а також ті, хто мав порушення функції печінки до переливання крові, були виключені з цього дослідження. Сироватки збирали до операції, а також через 1, 3, 6 та 12 місяців після операції. Про наслідки ВГС-інфекції вже повідомляли (12). Тридцять вісім з цих суб'єктів були зараховані до скринінгу на анти-HCV з липня 1992 року, тоді як решта 56 дітей були зараховані після скринінгу.

Зразки сироватки ретельно аликвотировали для запобігання вірусному забрудненню та деградації і зберігали при -80 ° C. Активність ALT в сироватці крові вимірювали на автоматизованому аналізаторі. Анти-HCV тестували комерційним ІФА другого покоління (гепатит С II; лабораторії Abbott, Північний Чикаго, Іллінойс). Поверхневі антигени вірусу гепатиту В були перевірені RIA (Abbott Laboratories). Пацієнти з позитивною РНК HGV були належним чином проінформовані та протестовані на наявність РНК HGV через 5 років після операції.

ПЛР-тест . РНК екстрагували з 50 мкл сироватки одноетапним методом тіоціанат-гуанідиній-фенол-хлороформ (13). Ізольовану РНК транскрибували зворотним способом, як описано вище, 200 пмоль випадкового гексамеру (Promega Corp., Madison, WI) та зворотної транскриптази (Superscript, GIBCO BRL Eggenstein, Німеччина) при 42 ° C протягом 45 хвилин та інактивували при 72 ° C. С протягом 15 хвилин (12). Вкладену ПЛР проводили з праймерами, отриманими з 5'-нетранслірованої області (14). Після гарячого старту 94 ° C протягом 5 хвилин проводили 30 циклів ПЛР-реакції з денатурацією протягом 30 с при 94 ° C, відпалом протягом 30 s при 55 ° C і продовженням на 1 хвилину при 72 ° C. Другий раунд ПЛР проводили таким же чином. Десять мікролітрів вкладених продуктів ПЛР піддавали електрофорезу у 2% агарозному гелі та фарбували бромідом етидію. Вкладені продукти ПЛР становили 210 п.н. Дотримувались суворих процедур, щоб уникнути забруднення протягом усього процесу ПЛР (15). Позитивний та негативний контроль сироватки використовували в кожному раунді ПЛР зворотної транскрипції, і проводили два окремі аналізи для кожного зразка.

Статистика . Для статистичного аналізу використовували тест χ 2 з корекцією Йейтса та U-тест Манна-Уітні. Значення Р (2 - 4, 16 - 18) та 2, 1% вагітних (8). Сучасні дані показали, що поширеність вірусемії HGV у нормальних дітей не суттєво відрізнялася від поширеності дорослого населення, в той час як вище, ніж поширеність анти-HCV у дітей (19). Було задокументовано, що передача ВГС від матері до дитини відбувалася з більш високою частотою, ніж ВГС, із швидкістю передачі до 30-50% (6-8), і у цих інфікованих дітей, швидше за все, розвивається стійка інфекція. Це може бути причиною високого рівня виявлення РНК HGV у здорових дітей. Подальші дослідження з використанням ПЛР та серологічних досліджень необхідні для визначення справжнього рівня поширеності шляхом виявлення теперішніх та минулих інфекцій.

Хронічні інфекції HGV були поширеними у попередніх звітах у дорослих пацієнтів від 38 до 90% (2, 4, 16, 17). У цьому дослідженні стійкість РНК HGV у дітей становить 96% через 6 місяців та 65% через 1 рік. Було помічено, що чим молодші пацієнти, тим більша ймовірність стати хронічними носіями після зараження HGV. У нашому дослідженні кліренс вірусу рідко спостерігався через 1 рік переливання. У цих дітей спостерігається стійкість вірусемії HGV до 5 років. Тривалість може бути продовжена, якщо за дітьми перевізника спостерігають протягом тривалого періоду. Здатність видалити вірус після зараження HGV, як видається, залежить від віку пацієнтів.

Незважаючи на високий рівень ВГЧ у дітей, у жодного з цих інфікованих осіб не розвивався гепатит після переливання. Навпаки, у інфікованих ВГС дітей, а також у людей, інфікованих ВГВ, розвивався гострий або хронічний гепатит. Гепатотрофного ефекту HGV у наших пацієнтів не спостерігалося. Причина гепатиту після переливання у двох інших пацієнтів залишається невідомою.

Інфекції HGV не завжди супроводжуються HCV. Ізольовані інфекції HGV часто зустрічаються у педіатричних пацієнтів. Будь-яка спроба виявити людей, інфікованих HGV, шляхом тестування лише у пацієнтів із наявною інфекцією HCV або HBV або у пацієнтів з порушеннями функції печінки виявить лише частину випадків зараження HGV.

Хоча частота зараження HGV зменшилась з 35% до 22% після введення скринінгу проти HCV, різниця не була статистично значущою. Отримані нами дані свідчать про те, що скринінг анти-HCV може не запобігти зараженню HGV, оскільки HGV-інфекції переважають у нормальній популяції, оскільки поширені інфекції HCV та поодинокі інфекції HGV.

Коротше кажучи, віремія HGV не є рідкістю у дітей, що здаються нормальними, і перевищує поширеність анти-HCV. Діти, які перенесли операцію на відкритому серці, мають вищий ризик зараження HGV, ніж дорослі. HGV-інфекція не викликала клінічного гепатиту під час 5-річного спостереження. Хоча повідомлялося про значну кількість дітей з хронічною вірусемією ВГС, їх довгостроковий результат слід переглянути.