Був розроблений спектрофотометричний аналіз, який показує великий потенціал для використання в якості аналізу точки догляду (POC) для швидкого виявлення антитіл проти целіакії.

Целіакія (CD) - це аутоімунний розлад, який, як правило, має неспецифічні шлунково-кишкові симптоми. Це вражає приблизно 1% населення світу, і більше 90% випадків не діагностується або невірно діагностується. В даний час діагноз CD базується на серології та біопсії кишечника, а виявлення антитіл IgA проти тканинної трансглутамінази (tTG) рекомендується як тест першої лінії. Ферментні імунологічні аналізи (ІФА) є налагодженим методом виявлення антитіл проти tTG, тоді як у існуючих тестах точки догляду (POC) відсутні чутливість та/або специфічність. Удосконалені методи POC можуть допомогти зменшити недодіагностику та затримку діагностики CD.

антитіл проти

У зв'язку з цим дослідники з Університету Гельсінкі (Фінляндія) розробили аналіз для виявлення антитіл проти tTG шляхом модифікації швидкого і однорідного імунологічного аналізу на основі дозволеного в часі резонансного переносу енергії Ферстера (TR-FRET), який був розроблений для серодіагностика інфекцій ханта та вірусу Зіка.

TR-FRET - явище, яке виникає, коли два флуорофори, донор і акцептор, знаходяться дуже близько. Збудження донора призводить до передачі енергії акцептору, який потім випромінює енергію на характерній довжині хвилі. Ефективність TR-FRET обернено залежить від відстані між двома флуорофорами. Фонова автофлюоресценція зводиться до мінімуму за допомогою вимірювань, дозволених за часом, що забезпечується хелатними лантанідними флуорофорами з тривалим періодом напіввиведення флуоресценції. TR-FRET широко застосовувався у дослідженнях та діагностиці для дослідження білково-білкових взаємодій та маркерів захворювань.

Дослідники модифікували швидкий, немитий метод на основі TR-FRET для виявлення антитіл, з'єднавши його з білком, що зв'язує антитіла, "L-білком" (LFRET). LFRET використовує мічений донорський антиген і мічений акцепторний білок L, який пов'язує каппа легкі ланцюги всіх класів імуноглобулінів. Якщо клінічний зразок містить антитіла проти антигену, вони наближатимуть флуорофори до тих пір, поки вони не будуть дуже близькими один до одного. Отже, сигнал TR-FRET вказує на те, що зразок містить цікавлять антитіла. Сигнал LFRET можна виміряти без необхідності в додаткових кроках незабаром після об'єднання зразка з сумішшю реагентів, що дозволяє швидко діагностувати пункт лікування.

Для дослідження антитіл проти tTG дослідники оцінили 74 пацієнта з підтвердженою біопсією CD та 70 здорових контрольних осіб, з: 1) новим аналізом tTG-LFRET та для довідки; 2) добре встановленим ОВНС; 3) наявним тестом POC комерційний. Зниження рівня IgG використовувалось для розмежування позитивних анти-tTG IgA та IgG.

Результати показали, що чутливість та специфічність аналізу POC tTG-LFRET першого покоління для виявлення CD становили 87,8% та 94,3% відповідно, відповідно до аналізів контрольного тесту POC. Для порівняння, чутливість та специфічність ОВНС становила 95,9% та 91,9% відповідно.

«Ефективність тесту була порівнянна із сучасними методами. Переважним методом є транспортування зразка до центральної лабораторії та багатоетапна процедура, яка займає кілька годин. За допомогою нового методу результати можна отримати менш ніж за півгодини, просто з’єднавши зразок та суміш реагентів, зачекавши хвилину та прочитавши результат ”, - сказав перший автор доктор Джуусо Русанен, науковий співробітник Університету Гельсінкі. «Ми сподіваємось, що наш швидкий метод може знизити поріг виявлення целіакії і, таким чином, допомогти подолати великий діагноз цього відносно поширеного стану. Крім того, вперше новий метод застосовується для діагностики аутоімунного захворювання. Це перспективний результат і спонукає до розробки подібних тестів для діагностики інших аутоімунних розладів ".

Дослідження було опубліковане в Інтернет-випуску журналу PLOS One від 26 листопада 2019 року.