Виробництво рекомбінантних білків Одним з найважливіших досягнень технології рекомбінантних ДНК є те, що досліджувані білки можуть вироблятися у великих кількостях і відносно легко за допомогою генної інженерії.
У підрозділі про вектори було зазначено, що вектори виразів повинні використовуватися для вираження послідовності, кодованої вставками.
- Основи біохімії та молекулярної біології Цифровий підручник
- Розмножуються шкірні паразити
- Лікування паразитів троянд
Ой, дорогие мои… - сказав вдруг Соши.
Вектор експресії повинен містити елементи ДНК, які розпізнаються транскрипційним та синтезуючим білок клітиною господаря. У разі бактеріальної клітини-господаря ці бактеріальні промотор і транскрипційний термінатор-глікокон'югати необхідні для взаємодії гельмінта-хазяїна, а також послідовність Шайна-Дальгарно, необхідна для трансляції, щоб зв’язати мРНК з рибосомою. RBS: місце зв'язування рибосоми.
Завдяки універсальній природі генетичного коду, безінтронні еукаріотичні кДНК також можуть експресуватись у бактеріях. Білок, вироблений з рекомбінантної ДНК, навіть якщо він має таку ж послідовність, що і вихідний білок, витягнутий із природного джерела, називається рекомбінантним білком.
Клітина-господар може бути не тільки бактерією, але також еукаріотичними дріжджами, наприклад Ці клітини-господарі також здатні гетерологічно експресувати, тобто продукувати білки інших видів, а не власних. Кожна система має переваги та недоліки, а також власні вектори виразу. Додамо, що існують системи експресії in vitro, де глікокон’югати взаємодіють із системою гельмінтів-господарів, але рибосоми з клітинних екстрактів можуть використовуватися для отримання рекомбінантних білків, хоча в меншій мірі, ніж у методах in vivo, ці системи передували гетерологічним системам у часі, див. Генетичний екстракт клітин колі, який використовується для злому коду.
Червоний шлях до міцного здоров'я - Пол Джакомін - TEDxJCUCairns
Системи експресії прокаріотів Карта типового вектора експресії прокаріотів та необхідних елементів ДНК також часто використовувалась у минулому для промоції промотору оперону лактози, але найпопулярніші вектори включають промотор, що використовується бактеріофагами Т7. Існує ряд різних способів гарантувати, що ген РНК-полімерази Т7 присутній у клітині-хазяїні в індуцибельній формі.
Основи біохімії та молекулярної біології
На додаток до промотору, вектори експресії також містять інші регуляторні глікокон'югати у взаємодії гельмінта-господаря. З регульованою експресією А експресію рекомбінантного білка можна включити додаванням синтетичного та неметаболізується індуктора IPTG, коли клітина-господар вже накопичилася у великих кількостях. Це захищає від можливого токсичного впливу чужорідного білка. Зверніть увагу, що на показаній карті вектора експресії також показано ген репресора lac, тому білок-репресор виробляється в надмірних кількостях у клітині і може інгібувати не тільки лак-оперон бактеріальної хромосоми, але й транскрипцію присутнього вектора експресії у декількох примірниках., прив’язаних до lac-операторів.
Найпершим рекомбінантним людським білком для медичного застосування є Е.
Основи біохімії та молекулярної біології
глікокон'югати у взаємодії з гельмінтами-господарями. Цей рекомбінантний інсулін бачили раніше. Діабетики отримували свинячий інсулін замість людського, що в деяких випадках викликало імунну відповідь. Багато інших білків, які можна використовувати терапевтично, наприклад, фактори згортання крові або гормони росту, також виробляються з генетично модифікованими бактеріями.
Додаткові можливості для отримання рекомбінантних білків Як вже згадувалося, рекомбінантний білок може продукуватися в еукаріотичній експресійній системі, в культурі клітин, але в трансгенних організмах, див. Наступний підрозділ. Коли використовуються більш складні та дорогі експресійні системи замість дешевих та легких у вирощуванні бактеріальних клітин?
Причин цьому може бути кілька. Якщо мета полягає в надмірному експресії білка, то не впевнено, що білок ссавців буде продукуватися в природному вигляді в клітині прокаріотів - його згортання може бути недостатнім, наприклад, за відсутності еукаріотичних білків медсестер, відсутніх у бактерії. потрібно.
Відповідними клітинами-господарями є клітини дріжджів, комах та ссавців.
Високоефективні системи виробництва білка розроблені з використанням специфічних для клітин комах векторів бакуловірусу. Ними можуть заражатися не тільки клітини, але і личинки молі, а рекомбінантні білки можна витягувати з лялечок як білковий продукт.
Чим еукаріотичні вектори експресії відрізняються від прокаріотів? По-перше, клонування завжди відбувається у бактерій, тому використовуються вектори, які також містять бактеріальний реплікон. Промотор, необхідний для експресії вставки, повинен, звичайно, перебувати у взаємодії еукаріотичних глікокон'югатів з гельмінтом-господарем.
Сильні вірусні промотори чудово піддаються надмірній експресії, найчастіше промотор цитомегаловірусу. Вектори можуть містити додаткові регулюючі елементи, такі як підсилювач.
Ще однією експериментальною причиною вибору еукаріотичної системи як господаря є те, що вони хочуть вивчити рекомбінантний білок у своєму власному середовищі. Ще однією перевагою, яку вже згадано, є те, що будь-які посттрансляційні модифікації білка не відбуваються або не відбуваються належним чином у прокаріоті. Якщо функцію білка потрібно вивчати внутрішньоклітинно, дуже корисно використовувати т. Зв Спочатку білок 27 кДа з тихоокеанської медузи Aequoria victoria, троє дослідників Осаму Шимомура, Мартін Чалфі та Роджер Цієн отримали Нобелівську премію за відкриття та життєздатність участі аскарид у генетичній інженерії.
Основи біохімії та молекулярної біології
Після складання GFP зазнає ковалентної модифікації киснем у повітрі, утворюючи внутрішньомолекулярний флуорофор, утворений виключно з трьох амінокислотних залишків поліпептидного ланцюга. Він випромінює зелене світло при збудженні синім світлом.
- Лікування гельмінтозу гостриків
- Антигельмінтні препарати для дітей до 2 років
Девушка, яку я шукаю, може бути .
Щодо білка зеленого бета-бареля, див. Злитий білок реалізується на рівні рекомбінантної ДНК таким чином, що область кодування GFP і область кодування тестового білка утворюють одиницю трансляції.
Конструкція злиття сконструйована шляхом видалення стоп-кодону з кінця кодуючої області N-кінцевого білка, і глікокон'югати взаємодіють з господарем-гельмінтом в тій же рамці зчитування, що і стартовий кодон партнера по злиття. Таким чином, загальний глікокон’югати з відкритим зчитуванням у взаємодії гельмінта-господаря ORF: утворюється відкрита рамка зчитування, з якої утворюється злиття, також відоме як химерний білок.
Основи біохімії та молекулярної біології Цифровий підручник
Кодуюча область гнучкого лінкера часто вставляється між кодуючими областями двох білків, дозволяючи двом ланцюгам самостійно звиватися після синтезу на рибосомі і обом бути функціональними в даній клітині-хазяїні. Флуорофор, утворений автокаталізом трьох амінокислот, маркується зеленими кульками PDB: 1EMA Є також вектори, які містять різнокольорові варіанти GFP, що утворюються в результаті мутагенезу, спрямованого на сайт, наприклад.
DsRed: закодований червоним кольором як злитий тег. Ці термоядерні мітки можуть збуджуватися світлом різної довжини хвилі і мати своє випромінювання в іншому місці. Вони можуть бути використані для легкого моніторингу коекспресії та внутрішньоклітинної локалізації коекспресії двох білків різного кольору або їх взаємодії.
Результатом такого експерименту є колокалізація зеленого та червоного злитого білка, який на зображенні показано жовтим. На лівій та середній фігурах два білки трансфікували окремо в клітинні лінії ссавців.
- Стандарт лікування аскаридозу
- Найпростіші паразити - симптоми у людини
Перший з них був представлений всіма даними.
- Основи фармакології Цифровий підручник У новонароджених можуть бути глисти
- Цифровий підручник з аеробіки та фітнесу - Zumba - хороший спалювач жиру
- Внутрішня медицина Діагностика Методи діагностики цифрових підручників Гострики
- Цифровий підручник з птахівництва - Як висиджувати яйця
- Основи здорового харчування I