УНІВЕРСИТЕТ У ГРАНАДІ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ ФАКУЛЬТЕТ ФІЗІОЛОГІЧНОГО ФАКУЛЬТУТУ ІНСТИТУТ ХАРЧУВАННЯ ТА ХАРЧОВОЇ ТЕХНОЛОГІЇ ЖОЗЕ МАТАІКС ДОСЛІДЖЕННЯ СТАБІЛЬНОСТІ ДНК В СИТУАЦІЇ ХАРЧОВОЇ ФЕРРОПЕНІЧНОЇ АНЕМІЇ. ВПЛИВ НА СПОЖИВАННЯ КОЗОГО ТА КОРОВОГО МОЛОКА, ЗБАГАТОГО ТА НІ В ЗАЛІЗНОМ ДОКТОРІЧНОМ РОБОТІ SILVIA Mª HIJANO FERNÁNDEZ 2010

гранади

Редактор: Редакція Університету Гранади Автор: Сільвія Марія Хіджано Фернандес Д.Л .: GR 3091-2010 ISBN: 978-84-693-3316-7

Цей звіт про докторську дисертацію є частиною дослідницького проекту AGL2006-02301/ALI, що фінансується Генеральним управлінням науково-технічних досліджень (DGICYT) Міністерства освіти і науки.

Пан Хав’єр Діас Кастро. Докторантуру найняв в Університеті Гранади. Пані Маргарита Санчес Кампос. Професор фізіології Університету Гранади. Пані Тереза ​​Нестарес Плегесуелос. Професор, доктор університету Гранади. СЕРТИФІКУВАТИ: що дослідницькі роботи, про які йдеться у звіті про докторські дисертації: Вивчення стабільності ДНК у ситуації харчової залізодефіцитної анемії. Вплив споживання козячого або коров'ячого молока, збагаченого чи не залізом, здійснював під нашим керівництвом адвокат Сільвія МІ Хіджано Фернандес, і ми вважаємо, що це погоджується бути представленим і претендувати на ступінь доктора університетом Гранади у свій час бути призначеним у Суді. І на протокол, згідно з чинними положеннями, ми продовжуємо це в Гранаді до 17 тисяч і десяти березня.

ПАМ'ЯТЬ, ПРЕДСТАВЕНА ЛДА. SILVIA Mª HIJANO FERNÁNDEZ ПІДТРИМУЄТЬСЯ ДО СТУПЕНІ ЛІКАРА УНІВЕРСИТЕТУ ГРАНАДИ ЦЕЙ ДОКТОРСЬКИЙ РЕЗІСАЛ ПОВЕДЕНО ЗА НАПРАВЛЕННЯМ: Dr.D. Хав'єр Діас Кастро проф. Д-р Маргарита Санчес Кампос проф. Д-р Тереза ​​Нестарес Плегесуелос Лда. Пані Сільвія Мvia Хіджано Фернандес Гранада, 2010

ПОДЯКИ Я хочу висловити вдячність усім людям, які своїм терпінням, підтримкою та співпрацею зробили можливим цю дослідницьку роботу. Особливо, до мого директора, професора пані Маргарити Санчес Кампос, яка з першого моменту довірила мені, дозволивши мені бути частиною її дослідницької групи. Дякуємо за вашу відданість, любов та зацікавленість, виявлені у кожну мить роботи. Моєму директору, доктору Хав'єру Діасу Кастро, за його близькість з самого початку, мій викладач технік, з яким я поділився знахідками, виявленими в цьому дослідженні, дякую вам за те, що ви знаходитесь там день у день в подальших роботах і для вашої доступності завжди і в кожен момент, навіть на відстані. Моєму режисеру, професору пані Терезі Нестарес Плегесуелос, першій людині, яка спонукала мене розпочати цю велику пригоду, що передбачає виконання докторської дисертації. Дякую за вашу мудру пораду. Професорам пані Інмакулада Лопес Аліага та пані Марія Хосе Муньос Альферес на особистому рівні за їхню прихильність, близькість та цінну та щедру допомогу у багатьох моментах цієї роботи. Працювати з вами було дуже просто.

Бути розкішшю бути частиною цього проекту. З гордістю поділитися цією роботою з вами. Професорі пані Магдалині Лопес-Фріас за її доброту та прихильність. Професору Д. Еміліо Мартінес де Вікторії, директору Інституту харчування та харчових технологій, за те, що я надав у своє розпорядження приміщення, де я виконав експериментальну частину цієї дипломної роботи. Директору Департаменту фізіології, професору Марії Лопес-Хурадо Ромеро де Ла Крус, за те, що я надав мені людські ресурси для розробки цієї дипломної роботи. Елізі Алковер за її доброту у вирішенні адміністративних питань. Mercedes - хороший друг і чудовий колега по роботі, іноді дуже вражений і робить це щасливими моментами. Ти особливий. Дякую. Марії, М. Анхелесу, Сусані, Серхіо, Педро та всім моїм колегам з Інституту харчування та харчових технологій за їхню супутницю та безкорисливу співпрацю та за готовність присвятити свій час, коли мені це потрібно.

Усім моїм друзям, які хоч і не пов’язані з цією роботою, але поділяють зі мною всі мої ілюзії. Моїм батькам за турботу та турботи, за те, що вони є прикладом боротьби та відповідальності та роблять мене таким, яким я є. Моїм братам Антоніо, Хав’єру, Хесусу та Йоланді та решті моєї родини, які завжди були поруч із мною, підтримуючи та заохочуючи мене. Моєму племіннику Мауріціо, який зі своєю компанією подарував мені хвилини спокою під час письма. Сальві, моєму чоловікові, за його велику підтримку та постійне перебування поруч, хоча речі часом складні. За обмін добрими і поганими моментами. Я тебе люблю. Моїй дочці Патрісії, найдивовижнішій дівчині, яка напружено переживала всі моменти завершення цієї тези. Дякую за вашу цікавість і за те, що ви знаєте цю тезу майже як я.

Патріції, моєму життєвому успіху, я присвячую свій успіх у науці тобі.

Той, хто сумнівається і не проводить розслідування, стає не тільки нещасним, але й несправедливим. Блез паскаль.

1. ОБ'ЄКТ. 1 2. БІБЛІОГРАФІЧНИЙ СПОСІБ 2.1. Залізо в харчуванні. 3 2.1.1. Вступ. 3 2.1.2. Нестача заліза. Харчова залізодефіцитна анемія. 4 2.1.3. Клінічні прояви харчової залізодефіцитної анемії. 7 2.1.4. Лікування ферродефіциту. Пероральне перевантаження заліза. 11 2.1.5. Патології, пов’язані з перевантаженням заліза. 15 2.1.5.1. Причини перевантаження заліза. 15 2.1.5.2. Спадковий гемохроматоз. 17 2.1.5.3. Механізми токсичності заліза. 23 2.1.5.4. Наслідки перевантаження заліза. 24 2.2. Функції заліза. 28 2.3. Джерела їжі та біодоступність заліза. 32 2.3.1. Харчове використання заліза. 42 2.3.2. Вимоги. 45 2.3.3. Кишкове всмоктування та транспорт заліза. 50 2.3.4. Розподіл заліза в тканинах та поглинання клітин. 54 2.3.5. Поклади заліза та обмін речовин. 56 2.3.6. Ліквідація. 59 2.3.7. Механізм гомеостазу заліза. 60 2.4. Стійкість і структура ДНК. 67 2.4.1. Вступ. 67 2.4.2. Історична довідка. 68 2.4.3. Фізико-хімічні властивості ДНК. 70 2.4.4. Компоненти генетичного матеріалу. 71 2.4.5. Базове сполучення. 75 2.4.6. Інший тип пар основ. 78 2.4.7. Структура ДНК. 81

2.4.8. Пошкодження генетичного матеріалу. 88 2.4.9. Механізми відновлення генетичного матеріалу. 89 2.4.10. Визначення стабільності генетичного матеріалу за допомогою лужного тесту Комети. 92 2.5. Харчові особливості козячого молока. 99 2.5.1. Вступ. 99 2.5.2. Органолептичні показники. 103 2.5.3. Склад козячого молока. 104 2.5.3.1. Білок козячого молока. 106 2.5.3.2. Вуглеводи в козячому молоці. 111 2.5.3.3. Ліпіди в козячому молоці. 112 2.5.3.4. Мінеральний склад. 116 2.5.3.5. Вітамінний склад козячого молока. 121 2.5.3.6. Біоактивні фактори. 123 3. МАТЕРІАЛ І МЕТОДИ 3.1. Експериментальний дизайн. 125 3.2. Спробували дієти. 128 3.3. Аналітичні методи. 131 3.3.1. Сухий матеріал. 131 3.3.2. Жирна речовина. 131 3.3.3. Вміст білка. 131 3.3.4. Мокра мінералізація. 131 3.3.4.1. Визначення заліза. 132 3.3.5. Кількість еритроцитів, гемоглобін, гематокрит, середній об’єм корпускули та тромбоцити. 134 3.3.6. Феритин сироватки. 134 3.3.7. Сироваткове залізо, TIBC (загальна ємність зв’язування заліза) та насиченість трансферину. 135 3.3.8. Визначення стабільності генетичного матеріалу методом гель-електрофорезу ізольованих клітин (лужний аналіз комети). 135

3.3.9. Статистична обробка. 140 4. РЕЗУЛЬТАТИ ТА ОБГОВОРЕННЯ 4.1. Гематологічні показники у ЗІЗ. 141 4.2. Маса тіла, маса печінки, гепатосоматичне співвідношення та вміст заліза в ЗІЗ. 142 4.3. Стійкість генетичного матеріалу в ЗІЗ. 144 4.4. Вміст печінкового заліза в ПЕ. 148 4.5. Стійкість генетичного матеріалу при ПЕ. 150 5. РЕЗЮМЕ І ВИСНОВКИ. 163 6. БІБЛІОГРАФІЯ. 167

дієт на основі коров’ячого або козячого молока, з нормальним вмістом або з перевантаженням Fe. Основною метою цього дослідження є вивчення гематологічних параметрів, пов’язаних з метаболізмом Fe, та оцінка стійкості генетичного матеріалу ізольованих клітин (периферичні лімфоцити крові) контрольних тварин або з експериментально індукованою харчовою залізодефіцитною анемією як під час встановлення патології, так і під час одужання, після вживання дієт на основі коров’ячого або козячого молока, із нормальним вмістом або хронічним перевантаженням Fe.

2. БІБЛІОГРАФІЧНИЙ СПОСІБ 2.1. ЗАЛІЗО В ХАРЧУВАННІ 2.1.1. ВСТУП З точки зору громадського здоров’я, відсутність Віри, безумовно, є основною причиною харчової анемії. Анемія - це патологічний процес, при якому концентрація гемоглобіну (Hb) в еритроцитах є аномально низькою. Немає сумнівів, що дефіцит Fe є причиною переважної більшості анемій. Fe-дефіцитна анемія або харчова залізодефіцитна анемія (NFA) характеризується зменшенням або відсутністю відкладень Fe, низьким рівнем сироватки Fe і Hb, зниженим гематокритом і підвищенням рівня тромбоцитів (Campos et al., 1998), низьким відсотком насичення трансферином, зменшення сироваткового феритину та різке збільшення загальної здатності зв’язувати Fe або загальної здатності зв’язувати залізо (TIBC). З іншого боку, завдяки впливу на розвиток та ріст, стійкості до інфекцій та пов’язаності зі смертністю дітей у віці до двох років, вона вважається найбільшою проблемою громадського здоров’я та найпоширенішим дефіцитом харчування у світі. Крім того, дефіцит Fe негативно позначається на працездатності та руховому та психічному розвитку дітей, 3

ДНК. Виведення катехоламінів із сечею пов’язано із змінами терморегуляції, отже, у випадках, коли дефіцит Fe супроводжується важкою анемією, у суб’єктів спостерігається зниження температури тіла. Існує припущення, що під час цього процесу суб'єкт втрачає тепло, і, як наслідок, споживання кисню та рівень норадреналіну в плазмі збільшуються (Hillman and Ault, 1995). Біопсія шлунка, проведена при анемії через дефіцит Fe, показала, що у 75% випадків спостерігається різна ступінь гастриту, що супроводжується зниженням шлункової секреції, крім того, спостерігається порушення всмоктування у дітей, але не у дорослих. Oski, 1993). У лабораторних дослідженнях для діагностики дефіциту заліза зазвичай виявляються такі гематичні зміни: - гемоглобін: менше 130 г/л у чоловіків та 120 г/л у жінок - червоні кров'яні клітини: гіпохромні та мікроцитарні (середовище корпускулярного об'єму, VCM)