Вплив харчових ліпідів на скорочення гладких м’язів судин та концентрацію похідних оксиду азоту в плазмі щурів

Канделарія Альфонсо-Перес 1, Хольгер Ортіс 2, Мігель Родрігес 3, Хуан Де Санктіс 4

1 Професори додані. Секція кардіо-ниркових досліджень Інституту експериментальної медицини медичного факультету. UCV

2 доцент. Кафедра біохімії Школи медсестер медичного факультету UCV. Призначений до Інституту експериментальної медицини

3 доцент, кафедра фармакології, школа Луїса Разетті. Школа медицини

4 доцент. Інститут імунології медичного факультету. UCV

Інститут експериментальної медицини медичного факультету Центрального університету Венесуели

Канделарія Альфонсо. Інститут експериментальної медицини, відділ серцево-ниркових досліджень. Школа медицини. UCV. [email protected]. Немає передруків.

Подяка: Ця робота була частково профінансована CDCH-UCV за допомогою проектів № 09.33.5385.04 та 09.00.5704.04

Ми визначили вплив харчових ліпідів на скорочення аортальних кілець та на концентрацію похідних NO? у плазмі. Самців щурів Sprague-Dawley годували протягом 6 тижнів однією з 3 дієт: ратаріном, ратаріном плюс 5% соєвої олії або ратаріном плюс 5% пальмового олеїну + соєвою олією. Кільця аортального відділу грудної клітки фіксували у суперфузійній ванні, і відсоток сили скорочення визначали при збільшенні доз норадреналіну (1 х 10 -10 до 1 х 10 -5 М). Нітрити, нітрати та нітротирозин аналізували як похідні NO ?. Дієта з олеїном + соєю мала найвищий відсоток C18: 1, n-9 жирної кислоти, а група, яка її приймала, мала найменший відсоток сили скорочення, найвищу концентрацію нітротирозину та найнижчу концентрацію нітратів у плазмі (p

Ключові слова: Олеїн, аорта, нітротирозин, щур

Ми визначили вплив ліпідної дієти на скорочення кільця аорти та NO ? похідні в плазмі. Самці щурів Спраг-Доулі годували протягом 6 тижнів однією з 3 дієт: щуряча чау, щуряча чау більше 5% соєвої олії або щуряча чау більше 5% олеїнової пальми + соєва олія. Визначали грудне кільце аорти, яке застрягло у ванні для суперфузії, та відсоток сили скорочення до різних доз норадреналіну (1 х 10 -10 до 1 х 10 - 5 М). НІ ? аналізованими похідними були нітрит, нітрат та нітротирозин. Дієта з олеїном + соєю представляла більший відсоток жирної кислоти C18: 1, n-9. Споживані олеїн + соєва олія зменшують відсоток сили скорочення грудної аорти, збільшують концентрацію нітротирозину та зменшують концентрацію нітратів у плазмі (р

Ключові слова: олеїн, аорта, нітротирозин, щур

Вступ

В артеріальній стінці вільні радикали кисню виробляються в клітинах гладкої мускулатури та фібробластах у відповідь на ангіотензин II, який стимулює мембранну та ендотеліальну активність NADPH-оксидази. Фрідович у 1978 р. Зазначив, що кисневі радикали виникають при виробництві O2 ? 8. Високе виробництво O2 ? інактивує NO ?, оскільки при реакції вони виробляють ОНОО-9, який, збільшуючи свою концентрацію, нітрифікує цілісні та розчинні білки, у вуглеці 3 ароматичного кільця залишків L-тирозину, близьких до глутамату, виявленого у зовнішній структурі білки, утворюючи нітротирозин 10 .

Метою даної роботи було оцінити вплив дієт, збагачених олеїном + соєвими або соєвими оліями, на силу скорочення при збільшенні доз норадреналіну в аорті щурів, а також на виробництво нітротирозину, речовини, що відноситься до запальні процеси.

Концентрацію нітротирозину в плазмі визначали, використовуючи сендвіч-тест ELISA 13. Концентрацію нітриту визначали за допомогою колориметричного методу Гриса з незначними модифікаціями 14. Нітрати відновлювали до нітритів за допомогою ферменту нітратредуктази, а потім застосовували модифікований метод Гріса 14 .

Відсоток жирних кислот аналізували за допомогою газорідинної хроматографії після екстракції ліпідів хлороформом-метанолом у співвідношенні 2: 1 (об./Об.) Та водою 15. Як антиоксидант використовували 10 мг бутил-гідрокси-толуолу (BHT)/100 мл розчинника. Ліпіди переетерифікували до метилових ефірів жирних кислот, використовуючи 5 мл безводної суміші метанол: толуол: сірчана кислота у співвідношенні 90: 10: 1 (v: v: v) зі зворотним холодильником при 80 ° C протягом 1 години. Метилові ефіри екстрагували 5 мл гексану. Органічну фазу промивали водою при 4 ° С і фільтрували на папері Whatman® номер 1. Метилові ефіри жирних кислот аналізували на хроматографі Hewlett-Packard® моделі 6890, з полум'яним детектором, 30 м х капілярна колонка. 0,25 мм з INOWAX® 0,25 мкм при 200 ° C. Рухливою фазою був H2. Метилові ефіри ідентифікували, використовуючи час утримання стандартів Sigma®.

У таблиці № 1 наведено відсоток жирних кислот у дієтах, що містять 5% олеїну + сої або соєвої олії, та в групі без олійної добавки (контроль). Дієта з олеїном + соєю мала вищий відсоток пальмітинової кислоти (C16: 0) та олеїнової кислоти (C18: 1, n-9) порівняно з дієтою з соєю (р

вплив

На малюнку №1 показано відсоток скорочення аортальних кілець щурів у відповідь на збільшення дози норадреналіну. Кільця аорти групи олеїн + соя мали менший відсоток скорочення (p 1x10 -7 та 1x10 - 8 M порівняно з контрольною та групами сої.

Фігура 1.- Крива реакції дози на норадреналін у кільцях аорти щурів з дієтами, доповненими 5% різних масел. N = 5 для кожної групи. Середнє значення ± SE. Кільця аорти групи олеїн + соя мали менший відсоток скорочення (с

На малюнку №2 спостерігається концентрація нітротирозину в плазмі щурів з дієтами, доповненими 5% різних масел. Група з добавкою олеїну + соєвої олії показала значне збільшення (р 0,5) концентрації нітритів.

Малюнок 2.- Концентрація нітротирозину в плазмі щурів при дієтах, доповнених 5% різних масел. N = 5 для кожної групи, середнє значення ± SE.

Група, що отримувала 5% олеїну + соєвої олії, мала суттєву різницю (с

Список літератури

1. Edirisnghe I McCormick hallam K, Kappagoda CT. Вплив жирних кислот на ендотелій-залежну релаксацію в аорті кролика. Clin Sci (Лондон) 2006; 111: 145-151 [Посилання]

2. Saraswathi V, Wu G, Toborek M, Hening B. Індукована ендотелієм активація лінолевої кислоти: роль сигналізації кальцію та пероксинітріту. J ліпід Res. 2004; 45: 794-804 [Посилання]

3. Viner RI, Ferrington DA, Williams TD, Bigelow DJ, Schoneich C. Модифікація білка під час біологічного старіння: селективне нітрування тирозином ізоформи de SERCA2a саркоплазми ретикулуму Са 2+ -АТФази в скелетних м’язах. Біохімічний Дж. 1999; 340: 657-669 [Посилання]

4. Han B, logsdon C. CCK стимулює експресію mob-1 та активацію NF-Kappa B через протеїнкіназу C та внутрішньоклітинний Ca 2+. Am J Physil.Cell Physiol.2000; C344-C351 [Посилання]

5. Райт JR, Lefkowith JB, Schreiner G, Lacy PE. Основний дефіцит жирних кислот запобігає множинному індукованому стрептозотоцином цукровому діабету у мишей CD-1. Proc Natl Acad Sci. 1988; 85: 6137 - 6141 [Посилання]

6. Leifert WR, MC Murchie EJ, Saint DA. Інгібування серцевих потоків натрію в міоцитах дорослих щурів n-3 поліненасиченими жирними кислотами. J Фізіол. 1999; 520: 671-679

7. Dubey RK Jackson EK, Luscher TF. Оксид азоту інгібує індуковану ангіотензином II міграцію гладком'язових клітин щурів. J Clin invest 1995; 96: 141-149 [Посилання]

8. Фрідович І. Біологія кисневих радикалів. Наука 1978; 201: 875-880 [Посилання]

9. Kooy N, Lewis S, Royall J, Ye Y, Nelly D, Beckman J. Широке нітрування тирозину при запаленні міокарда людини: докази наявності пероксинітриту. Crit Care Med. 1997; 25: 812-819 [Посилання]

10. Zheng L, Nukuna B, Brennan ML, Sun M, Goormastic M, Settle M, Schmitt D, Fu X, Thomson L, Fox PL, Ischiropoulos H, Smith JD, Kinter M, Hazen SL. Аполіпопротеїн A-I є селективною мішенню для каталізованого мієлопероксидазою окислення та функціональних порушень у пацієнтів із серцево-судинними захворюваннями. J Clin Invest. 2004; 114: 529-541 [Посилання]

11. Furchgott R. спірально вирізані смужки аорти кролика для досліджень Vitro реакцій гладких м’язів артерій. Методи Med. Res. 1960; 8: 177-186 [Посилання]

12. Фурчготт Р. та Завадзкі. J. Обов’язкова роль ендотеліальної клітини в розслабленні гладких м’язів артерій ацетилхоліном. Природа. 1980; 288: 373-376 [Посилання]

13. Є Й.З., Сильний М, Хуанг З.К., Бекеман Й.С. Антитіла, що розпізнають нітротирозин. Методи Ензимол 1996; 269: 201-209 [Посилання]

14. Гармендія СП, Гутьєррес Ю, Бланка І, Б'янко Н.Є., Де Санктіс Дж. Оксид азоту при різних типах гіпертонії під час вагітності. Клінічна наука. 1997; 93: 413-21 [Посилання]

15. Folch J, Lees M, Sloane GH. Простий метод виділення та очищення загальних ліпідів з тканин. J Biol Chem 1957; 266: 497-509 [Посилання]

16. Sundram K, Hayes KC, Siru OH. Дієтична пальмітинова кислота призводить до зниження рівня холестерину в сироватці крові, ніж поєднання лаурино-міристинової кислоти у нормоліпемічних людей. Am J Clin Nutri. 1994; 59: 841-846 [Посилання]

17. Мюллер Х, Кірхус Б і Педерсен Дж. Рівняння прогнозу рівня рівня холестерину в сироватці крові з особливим акцентом на транс та насичені жирні кислоти. Аналіз розроблених контрольованих досліджень. Ліпіди. 2001; 36: 783-791

18. Мак-Корд Дж. М., Фрідович І. Біологія і патологія кисневих радикалів. Ann Int med. 1978; 89: 122-127 [Посилання]

19. Гудфеллоу Дж., Белламі М.Ф. М.В., Джонс С.Дж., Льюїс М.Дж. Дієтичні добавки з морськими омега-3 жирними кислотами покращують системне націлювання ендотеліальної функції артерії у осіб з гіперхолестеринемією. J Am Coll cardiol 2000; 35: 265-270 [Посилання]

20. Herrera MD, Pérez-Guerrero C, Marhuenda E, Ruíz-Gutierrez V. Вплив дієтичних багатих олеїном олій (незаймана оливкова та високоолеїнова соняшникова кислота) на реактивність судин у щурів вістар-кіото та спонтанно гіпертонічних захворювань. Бр. J Nutr 2001; 86: 349-357 [Посилання]

21. Tamai O, Matsuoka H, ​​Itabe H, Wada Y, Cono K, Imazumi T. Поодинокий аферезис ЛПНЩ покращує ендотелій-залежну вазодилатацію у людей з гіперхолестеринемією. Тираж 1997; 95: 576-582 [Посилання]

22. Клебанов. Сеймур Дж. Реактивні проміжні речовини азоту та антимікробна активність: роль нітриту. Безкоштовна радикальна біологія та медицина. 1993; 14: 351-360 [Посилання]

23. Паркінсон Дж. Ф., Митрович Б, Серріл ДЖ. Роль оксиду азоту при розсіяному склерозі J Mol Med 1997; 75: 174-186 [Посилання]

24. Zabaleta ME, Bianco NE, De Santis Juan B. Рівні нітротирозину в сироватці крові у хворих на розсіяний склероз: взаємозв'язок з клінічною активністю. 1998; 26: 407-408. [Посилання]

25. Hu FB, Stampfer MJ, Manson JE, Rimm E, Colditz GA, Rosner BA, Hennekens CH, Willett WC. Споживання дієтичного жиру та ризик ішемічної хвороби серця у жінок. N Engl J Med. 1997 337: 1491-1499 [Посилання]