реферат

Головний

Приблизно 5% усіх випадків раку молочної залози пов'язані із синдромами спадкової схильності, і приблизно половина з них спричинена мутаціями в генах BRCA1 та BRCA2 (Hopper, 2001). Носії мутацій у генах BRCA1 та BRCA2 мають до 90% ризику раку молочної залози протягом усього життя (Rebbeck, 2002), і для цих жінок необхідні ефективні стратегії профілактики.

Матеріали і методи

предметів

Стіл в натуральну величину

Імплантація тканини молочної залози атимічним оголеним мишам

Імуногістохімічне визначення проліферації та експресії стероїдних рецепторів

Проліферативну активність оцінювали за допомогою імуногістохімії (IHC) з використанням мишачого моноклонального антитіла MIB-1 (Coulter Ltd, UK), вирощеного проти антигену, пов'язаного з проліферацією Ki67. Експресію ERα та PgR визначали за допомогою IHC з використанням мишачого анти-ERα моноклонального антитіла (клон ID5, Dako Ltd, Великобританія) та анти-PR моноклонального антитіла щура (клон KD68, Abbott Laboratories, Великобританія). Методи та розведення мікрохвильового антигену були описані вище (Clarke et al., 1997a). Зв’язування антитіл виявляли опосередковано, використовуючи відповідні біотинільовані другі антитіла, кон’югований пероксидазою комплекс авідин-біотин (ABC Elite, Vector Laboratories, Великобританія) та діамінобензидин як хромоген. Кількісну оцінку імунофарбування проводили на світловому мікроскопі та обмежували епітеліальними клітинами лололоальвеолярних кінцевих каналів. Площі, що підлягають підрахунку, були відібрані не в фокусі при малій потужності, а потім були записані повні поля великої потужності. Оцінювали принаймні 1000 епітеліальних клітин на зразок, і кількість мічених клітин виражали у відсотках від загальної кількості клітин. Інтенсивність фарбування не оцінювали.

Статистичні методи

Дані представлені як медіани разом із відповідними інтерквартильними діапазонами (IQR). Загальні зміни між групами лікування та групами ризику аналізували за допомогою непараметричного одностороннього дисперсійного аналізу Крускала-Уолліса. Якщо це виявилося значущим на рівні 5%, то попарне порівняння проводили за допомогою непараметричного U-критерію Манна-Уітні.

результат

Естрадіол стимулює проліферативну активність клітин епітелію молочної залози у всіх групах ризику

Проліферативна активність нормального епітелію молочної залози у жінок, які мають ризик раку молочної залози ( A ) у жінок високого ризику ( B ) Усі носії мутації BRCA1 або BRCA2 ( C. ) і носії мутації BRCA1 ( D ), яких імплантували атимічним оголеним мишам до (0-го дня) та через 1 тиждень лікування з контролем 0,5 мг Е2 або 2,0 мг Е2-сильних гранул. Жирні горизонтальні лінії позначають середні значення, а також зображення над стовпцями, що вказують на IQR. Цифри в дужках - це кількість зразків, доступних для аналізу в кожній групі, а значення Р вказують на значущість відмінностей між групами лікування методом непараметричного дисперсійного аналізу Крускала-Уолліса. Ctrl = керування.

Повнорозмірне зображення

Індукція експресії рецепторів прогестерону естрадіолом порушується в тканинах молочної залози від носіїв мутації BRCA

Істотних відмінностей у рівнях експресії ERa та PgR в епітеліальних клітинах молочної залози не спостерігалося між групами ризику під час збирання тканини у жінок (табл. 2). Однак через 14 днів після імплантації необроблені миші продемонстрували значне зниження відсотка PgR-позитивних клітин у всіх групах ризику (табл. 3). Це було найбільш вираженим у зразках тканин у жінок з мутаціями BRCA1, і, як результат, відсоток PgR-позитивних клітин був приблизно в чотири рази нижчим, ніж у групі ризику населення (P

естрогени

Експресія рецепторів прогестерону в нормальному епітелії молочної залози у жінок, які страждають на популяційний ризик раку молочної залози, у пацієнтів з високим ризиком та у тих, хто має мутації BRCA1 та BRCA2, імплантованих мишам оголених атимусів та лікуваних протягом 1 тижня з контролем, ( A ), 0, 5 E2 ( B ) або 2,0 мг Е2 ( C. ) -силастичні гранули. Жирні горизонтальні лінії позначають середні значення, а також зображення над стовпцями, що вказують на IQR. Цифри в дужках - це кількість зразків, доступних для аналізу в кожній групі, а значення Р вказують на значимість відмінностей між групами ризику за допомогою непараметричного дисперсійного аналізу Крускала-Уолліса. Рецептор PgR = прогестерон; PR = популяційний ризик; ЧСС = високий ризик; Усі мути = всі мутації; Тільки BRCA1 = лише носії мутації BRCA1 .

Повнорозмірне зображення

Вплив гранул високих доз E2 на експресію PgR в епітелії молочної залози людини в усі моменти часу після початку лікування показано на малюнку 3. У зразках тканин із групи популяційного ризику експресія PgR була максимальною через 1 тиждень. Обробка високою дозою гранул Е2 і цей рівень підтримувався протягом решти експериментального періоду. Навпаки, відповідь у групі всіх мутацій була послаблена, так що відсоток PgR-позитивних клітин у зразках з цієї групи був значно нижчим, ніж у популяції групи ризику, не тільки до початку лікування, але і після 2 тижнів після лікування (P

Вплив лікування Е2 з часом на експресію рецепторів прогестерону в епітелії молочної залози у жінок із популяційним ризиком раку молочної залози (♦) порівняно з жінками високого ризику (▪) та особами з мутаціями BRCA1 та BRCA2 (▴). Середні значення представлені суцільними символами, тоді як смужки помилок вказують на показник IQR, а цифри в дужках - зразки, доступні для аналізу в кожній групі. * P ** P *** P 1 день-1 зменшив експресію Ki67 у цих трьох групах ризику порівняно з 0,5 мг лише Е2 (P -1 тиждень -1) при популяційному ризику, підвищений = ризики та групи всіх мутацій у порівнянні до 0,5 мг лише Е2 (Малюнок 4А, В і С, Р

Нормальна проліферативна активність епітелію молочної залози у жінок, які мають ризик раку молочної залози ( A ), люди високого ризику B ), пацієнти з мутаціями BRCA1 та BRCA2 ( C. ) і носії мутації BRCA1 ( D ) після імплантації мишці неозброєним оком мишей та лікування 0,5 мг Е2 протягом 1 тижня, після чого 2 тижні Е2 у комбінації з ТАМ або фульвестрантом. Жирні горизонтальні лінії вказують медіани, а також цифри у верхній частині стовпців, що вказують на IQR. Цифри в дужках - це кількість зразків, доступних для аналізу в кожній групі лікування, а значення P вказують на значимість відмінностей між групами лікування за допомогою непараметричного дисперсійного аналізу Крускала-Уолліса. Ctrl = управління; 0,5 мг Е2 = обробка 0,5 мг Е2-силікатних гранул; ТАМ = тамоксифен (1 мг миші-1 день-1); FUL = фульвестрант (миші 5 мг -1 тиждень -1).

Повнорозмірне зображення

Також була досліджена здатність ТАМ та фульвестранту зменшити ефекти лікування високою дозою (2 мг) Е2 на експресію Ki67 клітин епітелію молочної залози (дані не наведені). Обидва антиестрогени могли зменшити вплив Е2 на проліферацію у всіх групах ризику, але їхні ефекти були досить мінливими, оскільки рівні лікарських засобів у сироватці крові, досягнуті за допомогою вищезазначених режимів дозування, були недостатніми для подолання високих рівнів E 2 у плазмі крові, досягнутих після лікування 2 мг Гранула Е2.

обговорення

Підводячи підсумок, ми показали, що стимульована Е2 проліферація епітелію молочної залози, зібрана у жінок з гетерозиготними мутаціями в генах BRCA1 і BRCA2, може бути скасована як SERM (TAM), так і антиестрогеном (фульвестрант), що не має агоністичних ефектів. Ми також показали що змінена експресія PgR є фенотипом, пов’язаним з мутаціями в генах BRCA1 та BRCA2. Ми прийшли до висновку, що раннє лікування антиестрогеном має бути ефективним у профілактиці раку молочної залози у жінок із високим ризиком.

Дякую

Це дослідження фінансувалось Фондом наукових досліджень лікарні Крісті та фармацевтичною компанією AstraZeneca. Дякую доктору Алану Уейклу з Астразенеки за надання фульвестранту, використовуваного в цьому дослідженні, та д-р. Джон Койн (лікарня лікарні університету Південного Манчестера) за допомогу в гістологічному дослідженні використаних зразків.