Андський закон 1994; 3 (2): 125-135

пролактину

ДІЯ ПРОЛАКТИНУ НА РІВНЯХ
ПЛАЗМАТИЧНИЙ ЕСТОСТЕРОН У ЩУРІВ, ЩО ПІДВИЩАЄТЬСЯ ВИСОКА ГІПОКСІЯ

Елідія Мухіка

Після 28 днів лікування визначали вагу тіла та яєчок, а також пролактин у плазмі крові (PRL) та тестостерон (T)
радіоімуноаналіз (RIA) та зміни яєчок (% AT) за допомогою світлової мікроскопії.

Тварини на висоті мають більш високі рівні PRL та T у сироватці крові, а також більш високий% AT, ніж NM. Як контрольні, так і експериментальні тварини, підняті на висоту, зменшували вагу тіла відносно рівня моря, але не тестикул. Внаслідок прийому бромокриптину та сульпіриду не спостерігалось додаткових змін у масі тіла, яєчках і% ТА.

Було виявлено полігональну кореляцію між рівнями PRL та Т в плазмі крові, спостерігаючи, що гіпо та гіперпролактинемія асоціюються з низьким рівнем Т.
На закінчення, гостра гіпоксія на висоті призводить до збільшення секреції тестостерону яєчками у щурів, що залежатиме, принаймні частково, від підвищення рівня пролактину.

Пролактин (PRL) - це білковий гормон, що синтезується в еозинофільних клітинах гіпофіза і регулюється гіпоталамусовим дофаміном, який пригнічує його секрецію (1-3). PRL необхідний для нормального функціонування чоловічих та жіночих репродуктивних шляхів (1-28). У яєчку його дія здійснюється на клітини Лейдіга, підвищуючи чутливість до ЛГ для секреції тестостерону (Т) (29-33) та. діючи на рівні поглинання киснем сперматозоїдами (34); також описано інгібуючу дію на пульсуючу секрецію лютеїнізуючого гормону (35, 36).

Гіперпролактинемія у чоловіків викликає низку порушень, які вказують на андрогенну недостатність, таких як гіпогонадизм, імпотенція, зниження лібідо, олігозоослермія та безпліддя (2, 4, 5, 13, 1624, 26-28). Інші звіти також пояснюють зміни гіпопролактинемії у репродуктивній функції чоловіків у тварин (13, 7, 3740) та у людей (41).

З іншого боку, відомо, що вплив на висоту впливає на функцію гіпофіза і яєчок як у людей, так і у тварин (42-50). З іншого боку, тубільці, як і ті, хто залишається на довгий час, демонструють пристосування до висоти (44, 45, 51-54), що відображається в достатній родючості. Різні повідомлення показують, що при гострому або хронічному впливі на висоту спостерігаються зміни в гормональній реакції (47,45-57); таким чином, у нормальних чоловіків, які зазнали хронічної гіпоксії, рівні PRI та їхня максимальна реакція на внутрішньовенну ЗГТ знижуються (58), тоді як періодичне вплив на висоту не показує відмінностей у вихідних рівнях PRI у сироватці крові (59).

Дослідження на тваринах дали суперечливі результати. Як повідомляється, PRL надає стимулюючий (14, 60-62), інгібуючий (13, 24, 27, 28, 63, 64) та двофазний вплив на секрецію Т (33).

В експериментальній гіпопролактинемії внаслідок введення бромокриптину гризунам деякі публікації вказують на те, що існує інгібування секреції Т, пов’язане (25, 39) чи ні (65) з гіпогонадизмом, а інші, що воно посилює секрецію Т (38). Введення сульпіриду, який підвищує рівень PRL, у свою чергу підвищує рівень Т (66). Атрофія яєчок спостерігалася при гіперпролактинемії, досягнутій іншими експериментальними методами (13,27,28).

Тому ми також взяли курс на огляд ефектів гіпо- та гіперпролактинемії, що утворюються у щурів введенням бромокриптину та сульпіриду (Догматил, Шпедрог), які, як відомо, інгібують (67) та стимулюють (66) секрецію ПРЛ у яєчках функціонують на рівні моря (150 м), щоб вивчити вплив цих препаратів, що вводяться щурам, виведеним на висоту (4540 м), на рівні PRL, T та в гістології яєчка.

Використовували самців щурів штаму Biologнa Andina. Усі вони народилися та вирощувались у Лімі до середнього віку 70 днів (вага від 200 до 300 грамів), в якому одну групу (АЛТ) доставляли до міста Морокоча (4540 м) на 28 днів. У цьому віці самця щура вважають статевозрілим і отримують найвищий рівень тестостерону в плазмі (12).

Тварин утримували в попередньо кондиціонованому приміщенні з контрольованою температурою, середньою температурою 22 ° C, що приймала 12 годин світла та 12 годин темряви. Їм давали воду в надлишкових умовах і годували збалансованими продуктами: відгодівлею (Nicovita), максимально уникаючи стресу, який, як відомо, стимулює секрецію пролактину (68).

Щоб знекровити їх, тварину поміщали в камеру, де протягом 2 хвилин знеболювали парами ефіру, а пробу відбирали шляхом пункції очної вени під нижнім кутом ока. Ефір був обраний як анестетик, який підвищує базальний рівень пролактину, як і інші анастики, але робить це в меншій мірі, залежно від часу впливу. Обраний час був тим, який впливає найменше і не має побічних ефектів більшості анестетиків (69).

Було проведено два типи експериментів, кожен із яких мав власну контрольну групу:


Експериментальна група I: Тваринам, яким вводили бромокриптин (2 Br-а-ергокриптин): CB-154-Sandoz, у дозі 4 мг/кг. маси тіла в 0,5 мл 0,9% сольового сольового розчину в дні 0, 7, 21 і 28 експерименту для отримання гіпопролактинамічних щурів.

Контрольна група отримувала 0,5 мл 0,9% сольового сольового розчину. в той самий час.

Цю дозу CB-154 було обрано через докази того, що вона спричиняла зменшення пролактину протягом 7 днів, на відміну від інших нижчих доз (67).

На рівні моря було використано 70 тварин, 35 отримали бромокриптин і 35 0,9% сольовий розчин. Кожну групу з 35 тварин випадковим чином поміщали в клітини, що складалися з 5 тварин, утворюючи 7 груп, що налічували від 1 до 7.

На висоті використовували 50 тварин, 25 отримували бромокриптин і 25 0,9% сольовий розчин. Кожну групу з 25 тварин розміщували навмання у клітинах, що складалися з 5 тварин, маючи 5 груп з нумерацією від 1 до 5.

Через 7, 14, 21 і 28 днів після першої ін’єкції тварин зважували, відбирали пробу крові і з кожної групи (клітки) хаотично жертвували по одній тварині, щоб витягти яєчка, зважити і зафіксувати в розчині Буена і направити в гістологічну лабораторію для підготовки предметних стекол для оптичної мікроскопії.

Від кожної тварини отримували приблизно 0,5 мл. крові. Кожна проба для аналізу являє собою "пул" крові від 5 тварин, випадково поміщених в одну клітку і представляючи групу. Таким чином отримують достатньо зразків для проведення аналізів. Зразки центрифугували і плазму зберігали замороженою (-20 ° C), доки не проводили визначення пролактину та тестостерону методом радіоімунологічного аналізу (RIA).


Експериментальна група II: Тваринам, яким вводили сульпірид (N- (1 етил-2-піролідил-метил) -2-метокси-5-сульфамоїлбензамід) Догматил-Шпедрог, у дозі 1,5 мг/кг маси тіла в 0,5 мл 0,9 сольового розчину% im двічі на тиждень протягом місяця з метою отримання гіперпролактинамічних щурів (66).

На рівні моря досліджували 50 тварин, 25 отримували сульпірид і 25 сольових розчинів 0,9% в/м, також розподіляли по клітинах у групи по 5. Через 7, 14, 21 і 28 днів після першої ін'єкції тварин досліджували подібно до описаний для експерименту з бромокриптином.

Гормони вимірювали радіоімуноаналізом (RIA).


Вимірювання пролактину

Реагенти були надані А. Ф. Парлоу з Національного інституту ім
Програма гормону гіпофіза щурів для здоров'я (NIH/NIAMD) доктору Матільде де Бернал з Лабораторії фізіології розмноження Університету дель Валле, Калі-Колумбія, і пожертвована нею за цю роботу.

Позначення пролактину щурів (NIAMD-Щур-Пролактин I-2) проводили за допомогою I-125 методом хлораміну Т. Мічений гормон очищали, отримуючи PRL, 1-125 з найвищою імунореактивністю та чистотою, із специфічною активністю від 100 до 200 дюймів/нМ.

Зразки плазми аналізували, використовуючи антитіла до кролячих щурів (NIAMD-an-rat-Prolactin-S-4). Відокремлення вільної від зв'язаної фракції проводили осадженням другим антитілом - анти-кролячим гамма-глобуліном овець (Antibodies Incorporated). Результати, отримані у зразках, порівнювали шляхом прямого зчитування на стандартній кривій, отриманій з еталонним пролактином (NIAMDRP-1). Отримані значення виражаються як нг NIAMD-RPI/нуль плазми. Коефіцієнт варіації внутрішньо- та міжаналітичного аналізу становив 3,2% та 8,2% відповідно в діапазоні 03200 нг/мл.


Вимірювання тестостерону

Були використані реагенти, надані Всесвітньою організацією охорони здоров’я доктору Матільде де Бернал з Університету дель Валле, Калі-Колумбія, в рамках програми: "Програма реагуючих реагентів ВООЗ", передана нею для цієї роботи. Плазму (0,1 мл) екстрагують ефіром, а екстракти взаємодіють з антитілом до тестостерону (OMS). Зв'язану фракцію підраховували в рідинному сцинтиляційному лічильнику. Результати зчитували на стандартній кривій після корекції для відновлення. Коефіцієнт варіації внутрішньо- та міжаналітичного аналізу становив 4,5% та 7,3% відповідно, в діапазоні 0,1-40 нг/мл.


Процедура фіксації яєчок:

Відразу після екстракції та зважування яєчка поміщали цілими у розчин Буена (пекринова кислота: 15 мл, 40% формальдегід: 5 мл, оцтова кислота Q.P: 1 мл). Через годину полюси вирізали, а через 2 години зробили поперечний переріз, залишивши в цьому розчині на 24 години. Через цей час безперервне промивання струменем води проводили ще протягом 24 годин; потім їх поміщали в 50% -ний спирт на 6 годин, пізніше передавали в 70% -ний спирт, де вони залишались, поки їх не відправили в гістологічну лабораторію для монтажу та фарбування гематоксилін-еозином.

Зміни, представлені яєчком, виражаються як кількість канальців на поле, де представлений деякий тип змін, виражений у відсотках (% AT). На слайд оцінювали 100 канальців.


Статистичний аналіз

Результати аналізували за допомогою дисперсійного аналізу, регресійного аналізу та тесту Стьюдента для t парних даних. Значення, рівні 0,05 або менше, вважаються статистично значущими.

Вага тіла та яєчок:

Вплив на висоту дорослих самців щурів знизив масу тіла на 7-й день впливу і викликає пошкодження яєчок, що описується як відшарування та дезорганізація зародкового епітелію, наявність багатоядерних клітин та потовщення судин, а також нормальна популяція Лейдіга клітини; сперматогенез зберігається в неушкоджених канальцях. При впливі висоти змін ваги яєчок не спостерігалося.

Відсотки гормональних показників, отримані від контрольних тварин АЛТ, оброблених бромокриптином або сульпіридом при МЛ або АЛТ, відносяться до середніх значень протягом усього експерименту (7, 14, 21 і 28 днів) контролю в ML., і які вважаються 100%.

У щурів, які отримували бромокриптин на рівні моря, приріст маси тіла менше, ніж у необроблених; Через 28 днів контролери рівня моря набрали 32% від початкової маси тіла, а ті, хто отримував бромокриптин, лише 17%. На 21 добу маса яєчок тварин, які отримували бромокриптин на рівні моря, перевищує показник на 14 добу (p Таблиця 1).


Вплив бромокриптину на рівень моря (SL) і висоту (ALT)

Через 7 днів бромокриптин вводять підшкірно в дозі 0,4 мг/кг маси тіла. У щурів, які піддаються гострому впливу АЛТ, він не змінює рівні PRL у плазмі, що досягається при дозі 4 мг/кг (p Таблиця 2). Бромокриптин (4 мг/кг), введений щурам при ML, знижує рівень PRL у плазмі крові, будучи значним (p Таблиця 3).


Вплив сульпіриду на NM та на ВИСОТУ

Сульпірид, призначений щурам на рівні моря, поступово підвищує рівень PRL у плазмі крові (p Таблиця 4).


Рівні Т у плазмі крові відповідно до рівня PRL у плазмі крові

У таблиці 5 ми спостерігаємо, що спостерігається збільшення рівня плазми T паралельно збільшенню рівнів PRI, плазматичних як на рівні моря, так і на висоті, до концентрацій PRI між 41-60 нг/мл. Вище цих рівнів PRL у плазмі крові значення Т у плазмі мають тенденцію до зниження.

Щоб визначити, чи впливають рівні PRI та T у плазмі крові на рівні T, була проведена кореляція між концентраціями PRL та T, використовуючи дані, отримані на рівні моря та на висоті у контрольних та оброблених щурів, знаходячи полігональну кореляцію. (Y = 5 sin2x, r = 0,876, с

PRL необхідний для нормальної роботи яєчок і нормального росту допоміжних статевих органів. На рівні яєчок PRL збільшує та підтримує рецептори ЛГ, діючи синергічно з ЛГ у секреції тестостерону (Т). На рівні статевих органів він діяв би синергічно з Т, безпосередньо або збільшував би перетворення Т в дигідротестостерон (ДГТ) у тканині-мішені (29-33, 70, 71).

При гострому впливі на зріст чоловіків (45,46,85) та тварин (42-44,56, 72, 76-84) відбувається зміна функції чоловічих статевих залоз, причому пошкодження яєчок проявляється змінами в сперматогенезі, таких як олігозооспермія та азооспермія; зниження маси яєчок у щурів (49, 50, 80, 82) та підвищення Т в плазмі крові у чоловіків (86) та тварин (56).

У цій роботі ми вивчаємо вплив висоти на рівень PRL у плазмі крові, порівнюючи їх з рівнем Т у плазмі та порівнюючи з рівнем моря. Для того, щоб отримати рівні
низький і високий рівень PRL, ми використовуємо введення бромокриптину та сульпіриду відповідно. Бромокриптин стимулює рецептори дофаміну на рівні гіпоталамусу та гіпофіза, а отже, пригнічує секрецію пролактину, демонструючи у самців щурів також зниження рівня
тестостерон (67,89). Сульпірид блокує дофамінові рецептори (66), і крім підвищення рівня пролактину в сироватці крові, він також підвищує рівень тестостерону (15).

Наші результати показують, що підняті на висоту щури збільшують значення пролактину в плазмі крові (с