Предмети

Ця стаття оновлена

Резюме

Передумови:

Невідомо, чи синхронний колоректальний рак (S-CRC) розвивається переважно за допомогою генералізованого метилювання ДНК і чи є у них гірший прогноз, ніж одиночний CRC. Оскільки пухлини мікросупутникової нестабільності (MSI) можуть змішувати вплив метилювання S-CRC на результат, ми розглянули це питання в серії CRC, що характеризуються статусом BRAF та MS.

Методи:

Демографічні показники, клініко-патологічні дані та специфічне виживання (DSS) були оцінені у 881 послідовно резектованих КРС та пройшли повну колоноскопію. Всі пухлини були набрані для BRAF c.1799T> мутація та стан MS, з подальшим пошуком мутації зародкової лінії у пацієнтів з MSI CRC.

Результати:

Синхронні раки прямої кишки (50/881, 5,7%) були пов'язані з CRS стадії IV мікросателітної (MSS) (19/205, 9,3%, P = 0,001) та з HNPCC (9/32, 28%, P c. 1799T> Одна мутація (HR 2,16; 95% ДІ 1,25–3,73; P = 0,01) була незалежною від стадії провісником смерті від MSC CRC.Специфічне для виживання захворювання пацієнтів з МРТ MSI не впливало на S-CRC (HR 0,74, 95% ДІ 0,09 - 5,75, Р = 0,77).

Завершення:

Стійкі CRC для мікросупутників мають гірший прогноз, якщо діагностують S-CRC або синхронну розвинену аденому. Виникнення та підвищена агресивність синхронної запущеної неоплазії СМС не пов'язані з мутацією BRAF .

Довіритель

Дві або більше первинних колоректальних карцином виявляються у 2-5% всіх вперше діагностованих пацієнтів з колоректальним раком (CRC) (Adloff et al, 1989; Passman et al, 1996; Chen and Sheen-Chen, 2000; Oya et al, 2003; Papadopoulos et al, 2004; Latournerie et al, 2008; Nosho et al, 2009; Mulder et al, 2011). Визнання синхронного колоректального раку (S-CRC) як клінічної організації підвищило усвідомлення того, що точне періопераційне обстеження всієї товстої кишки є обов’язковим для пацієнтів, які перебувають на резекції CRC. Однак залишається невизначеним, чи має S-CRC інші прогностичні та молекулярні характеристики, ніж одиночний CRC.

Дослідження «контроль випадків», що вивчають характеристики та результати пацієнтів із S-CRC, дають суперечливі результати. Чоловіча стать (Oya et al, 2003; Latournerie et al, 2008; Mulder et al, 2011), старість (Passman et al, 1996; Papadopoulos et al, 2004; Wang et al, 2004; Mulder et al, 2011), співіснуючі аденоми (Chen and Sheen-Chen, 2000; Latournerie et al, 2008) і гірше виживання (Oya et al, 2003; Nosho et al, 2009; Mulder et al, 2011) були асоційовані з S-CRC в деяких серіях, але не в інших. Ці невідповідності, ймовірно, відображатимуть упередженість у підборі випадків індексу, а також у наборі органів управління з одиночними КПР. Зокрема, різні серії можуть мати різну поширеність ракових захворювань із мікросупутниковою нестабільністю (MSI), які пов’язані з множинними ураженнями (Pedroni et al, 1999; Dykes et al, 2003; Nosho et al, 2009; Bae et al, 2012), але також з кращим прогнозом (Gryfe et al, 2000; Malesci et al, 2007).

З огляду на складну взаємодію між результатом та різними молекулярними профілями, очевидно, що прогностичну значимість S-CRC можна безпечно оцінити лише шляхом аналізу унікальних молекулярних підгруп CRC. Крім того, аналіз слід поширити на синхронні розвинені аденоми, які також пов'язані з метахронними CRC (Moon et al, 2010). Ретроспективні пошуки синхронних аденом або S-CRC проводились у реєстрах періопераційних колоноскопій, проведених у 881 послідовного пацієнта, резектований CRC спочатку класифікували у молекулярні підкласи на основі мікросупутникового статусу та BRAF. Потім оцінювали клініко-патологічні характеристики та результати пацієнтів із розвиненою синхронною неоплазією.

Матеріали і методи

Вивчення популяції та підгруп КПР внаслідок синхронної неоплазії

Метою дослідження було охопити 1000 послідовних пацієнтів, які перенесли операцію з резекції КРЗ в клініці та дослідницькому центрі Гуманітас у період з 2 лютого 1998 р. По 6 квітня 2006 р. Критерії виключення обмежувались наступним: (1) відсутність підслизової інвазії в патологія; (2) анастомотичний рецидив раніше резекованої колоректальної пухлини; (3) діагностика сімейного аденоматозного поліпозу; (4) КПР, пов’язаний із запальним захворюванням кишечника. Протокол був схвалений Комітетом з етики установи, а інформована згода пацієнтів на обробку їхніх персональних даних була отримана направляючим лікарем або іншими клініцистами, які брали участь у дослідженні. У попередньому аналізі записів 119 пацієнтів (жоден з яких не має S-CRC) були виключені через неповну або неякісну періопераційну колоноскопію, що призвело до остаточного дослідження у 881 пацієнта.

Підтип молекулярної пухлини

Зразки пухлини у всіх пацієнтів та всі види раку у пацієнтів з S-CRC досліджували на наявність MSI. Мононуклеотид BAT-26 та мононуклеотид BAT-25 у пацієнтів, які відповідають Амстердамським критеріям II та/або Критеріям Бетесди (n = 279), використовувались як молекулярні маркери MSI (Hatch et al, 2005; Laghi et al, 2008). ДНК отримували з вбудованих у парафін ділянок пухлин, що містять щонайменше 50% пухлинних клітин, або з мікродисекцій пухлини. Локуси BAT-25 та BAT-26 ампліфікували флюоресцеїновими праймерами та аналізували за допомогою капілярного гелевого електрофорезу (ABI PRISM 310 Genetic Analyzer, Applied Biosystems, Monza, Italy) (Aaltonen et al., 1998; Malesci et al., 2007).

У всіх CRC MSI дефект відновлення невідповідності (MMR) оцінювали за відсутністю експресії ядер hMLH1 (клон G-168-15, BD Bio Sciences, Буччінаско, Мілан, Італія), hMSH2 (клон FE11, Calbiochem, Merk Millipore, Дармштадт, Німеччина), або hMSH6 (клон 44, BD Bio Sciences) в імуногістохімії (Truninger et al, 2005). Експресія білка, що відновлює невідповідність, також була перевірена в пухлинах MSS пацієнтів, які відповідають амстердамським критеріям (n = 10). Хворі MSI CRC пройшли генетичне тестування на зародкові лінії на мутації MLH1, MSH2 та MSH6 шляхом секвенування дефектів MMR при первинному раку (Wahlberg et al, 2002). У пацієнтів з негативною мутацією був проведений ампліфікаційний аналіз зонда множинної перев'язки (probemix SALSA MLPA P003 MLH1-MSH2, probemix P248 MLH1-MSH2, probemix P072 MSH6, Medical Research Council-Holland, Amsterdam, The Netherlands).

Усі зразки CRC досліджували на наявність BRAF c.1799T> Одна мутація методом ПЛР у реальному часі, використовуючи аналіз генотипування TaqMan SNP (Applied Biosystem). Зонди TaqMan MGB були розроблені за допомогою спеціального інструменту проектування аналізу TaqMan (Applied Biosystem). Вибраними флуорофорами-репортерами були VIC для виявлення алелю дикого типу та FAM для мутантного алелю.

Секвенування всіх екзонів гена MYH проводили для оцінки мутацій зародкової лінії у всіх пацієнтів з MSS S-CRC. Ми також дослідили всі тканини MSS S-CRC, щоб виявити соматичні або зародкові мутації в екзоні 13 гена POLE та в екзоні 11 гена POLD1. .

статистичний аналіз

Асоціації між синхронною неоплазією та клініко-патологічними або молекулярними характеристиками індексу CRC оцінювали за допомогою критерію χ 2 або, якщо застосовно, точного критерію Фішера для категоріальних змінних та критерію t Стьюдента для змінних. Безперервний. Патологічні та молекулярні фактори, суттєво пов'язані з S-CRC, при одновимірному аналізі були введені в багатовимірний логістичний регресійний аналіз. Криві виживання були намальовані згідно з методом Каплана-Мейєра для порівняння DSS у пацієнтів із синхронною колоректальною неоплазією. Для кращої оцінки прогностичної ролі S-CRC, а також синхронних аденом та стану MS/BRAF пухлини також використовували моделі пропорційного ризику Кокса. Для всіх статистичних тестів, Р 0,5) у пацієнтів з одиночним раком була принаймні одна чітка супутня аденома.

У таблиці 1 представлені клініко-патологічні та молекулярні характеристики індексу CRC, стратифіковані відсутністю або наявністю синхронної колоректальної неоплазії. Порівняно з пацієнтами без синхронної неоплазії, пацієнти з синхронною аденомою або раком були старшими (66,4 ± 9,9 проти 63,9 ± 11,8 років; P = 0,001), вони частіше були чоловіками (66,4% проти 53,3%; P c.1799T> Одна мутація у визначення асоціації цих двох змінних із синхронною нерозширеною аденомою, в той час як не виявлено зв'язку між статусом BRAF та розвиненими синхронними аденомами та S-CRC. Малюнок 2 показує, що мутація BRAF c.1799T> A була сильно пов'язана зі спорадичною CRC з MSI (37/62, 59,7% проти 23/787, 2,9% при MSS CCS; P c.1799T> Одна мутація. Ніяких мутацій зародкової лінії MYH та соматичних або зародкових мутацій POLE або POLD1 не виявлено у пацієнтів із S-CRC.

Повний розмір таблиці

наслідки

Взаємодія мікросупутникового статусу CRC та синхронної колоректальної неоплазії при визначенні зв'язку цих двох змінних зі стадією TNM. Поетапний розподіл синхронного CRC порівнюється з розподілом єдиного CRC, розшаровуючись за станом мікросупутника. IV стадія була суттєво асоційована з синхронною КРР у хворих на рак СМС (19/39, 48,7% проти 186/748, 24,9%; Р = 0,001). Частота захворювання IV стадії не відрізнялася у пацієнтів із РСЗ MSS без супутньої аденоми (124/495, 25,1%, посилання), із синхронною нерозширеною аденомою (36/153, 23,5%; P = 0,70) та розвинена синхронна аденома (26/100; 26,0%; Р = 0,84). Частота захворювання IV стадії у пацієнтів із MSI CRC не асоціювалась із S-CRC (7/83, 8,4% проти 1/11, 9,1%; P = 0,88). * Значення P у χ 2 або точний тест Фішера, відповідно (IV стадія порівняно з іншими).

Повнорозмірне зображення

BRAF c.1799T> Одна мутація була значно частішою (P 2 або точний тест Фішера, відповідно.

Повнорозмірне зображення

Під час середнього післяопераційного спостереження 4,3 ± 2,4 року було зафіксовано в цілому 231 смерть, пов’язану з CRC, 220 (28,0%) серед 787 пацієнтів з ХСН та лише 11 (11,7%) серед 94 пацієнтів із раком MSI (p Мутація BRAF c.1799T> A (P c.1799T> Мутація індексу раку також передбачала підвищений ризик смерті від MSS CRC, незалежно від наявності синхронної запущеної неоплазії та стадії TNM (HR 2,16; 95% CI 1,25– 3,73; P = 0,01) Синхронна розвинена неоплазія (HR 1,75, 95% ДІ 1,30–2,37, P c.1799T> Одна мутація (HR 1,74, 95% CI 1,00–3,03, P = 0,05) залишалася незалежними предикторами стадії смерть, коли в багатофакторний аналіз було введено ад’ювантну хіміотерапію на основі 5-фторурацилу (Додатковий матеріал 2). Навпаки, ні наявність синхронної запущеної неоплазії, ні стан пухлини BRAF суттєво не впливали на DSS пацієнтів з МСІ CRC.

Специфічне для виживання захворювання пацієнтів із ХРН за статусом РС та інвазивним синхронним раком. Синхронний CRC суттєво впливав на специфічну для виживання хворобу пацієнтів з раком MSS, але не тих, хто страждає пухлиною MSI (криві Каплана-Мейєра, log-rank тест).

Повнорозмірне зображення

Виживання захворювання, специфічне для пацієнтів з MSS CRC, стратифікованим синхронною колоректальною неоплазією. Наявність синхронної запущеної неоплазії, але не такої при синхронній нерозширеній аденомі, негативно вплинуло на виживаність пацієнтів з КРР (криві Каплана-Мейєра, тест лонг-рангу).

Повнорозмірне зображення

Повний розмір таблиці

Обговорення

У цьому великому госпітальному дослідженні пацієнтам із МСК КРЗ було значно гірше, якщо їм спочатку діагностували S-CRC або навіть синхронну аденому із запущеною хворобою. Висновок є важливим, оскільки він сприяє надзвичайно суперечливому питанню, породженому тим фактом, що більшість досліджень не визнають жодної зв'язку між S-CRC та поганим прогнозом (Passman et al., 1996; Chen and Sheen-Chen, 2000; Papadopoulos та ін., 2004; Latournerie et al, 2008), тоді як єдине перспективне дослідження повідомляло про більш високу смертність у пацієнтів з множинними первинними видами раку (Nosho et al, 2009). Зокрема, наше дослідження унікальне тим, що досліджувало прогностичну роль S-CRC у молекулярно визначених підгрупах CRC, щоб уникнути незрозумілого ефекту раку MSI, який частіше виникає як синхронні злоякісні пухлини, але також має кращий загальний прогноз. Крім того, BRAF c.1799T> Мутація, встановлений маркер CIMP і поганий прогноз (Samowitz et al, 2005b; Weisenberger et al, 2006), не була пов'язана з MS-S-CRC, вказуючи на те, що ні поява, ні результат нестабільний хромосомний синхронний рак, ймовірно, обумовлений ефектом епігенетичного поля.

Нарешті, наше дослідження не виявило жодної мутації зародкової лінії MYH, яка не підтвердила раніше повідомлену асоціацію між гомозиготними або гетерозиготними гетерозиготними мутаціями та S-CRC (Cleary et al, 2009), а також мутацій зародкової лінії/сомнолу/POLE або POLD1, які мають нещодавно були пов’язані з множинними CRC або аденомами (Palles et al, 2013). Клірі та ін. (2009) виявили мутації MYH у BRAF c.1799T> Мутація як єдиний маркер метилювання ДНК. Хоча статус BRAF підтверджений як високоспецифічний та відтворюваний маркер раку з метилюючим фенотипом (Weisenberger et al, 2006), ми не могли виявити деякі потенційно ідентифіковані метильовані пухлини в аналізі множинних маркерів CIMP. Однак ми вважаємо, що відсутність зв'язку між MSS S-CRC та статусом метилювання пухлини в нашій серії не може бути поставлена ​​під сумнів на підставі цього обмеження. Нарешті, синхронні зазубрені аденоми, які можуть співіснувати з розвиненою колоректальною неоплазією (Álvarez et al, 2013), безумовно, були недооцінені в серії, зібраній, коли про ендоскопічне висічення "гіперпластичних" уражень було мало або зовсім не відомо.

На закінчення, наше дослідження демонструє, що раки MSS, які мають фенотип множинних поширених уражень, представляють переважну більшість S-CRC, не пов'язані з мутацією BRAF і мають гірший прогноз, ніж відповідні одиночні пухлини. Зв'язок між негіпермутованою множинною запущеною неоплазією та поганим прогнозом може мати важливі наслідки для післяопераційного нагляду та допоміжних терапевтичних стратегій.

Змініть історію

Додаткова інформація

Файли зображень

Додатковий матеріал 1

Документи Word

Додатковий матеріал 2

Ця робота випущена за стандартною ліцензією на публікацію угоди. Через 12 місяців робота буде доступна безкоштовно, а умови ліцензії зміняться на ліцензію Creative Commons Attribution-NonCommercial-Share Alike 3.0 Unported.