реферат
Значна частина пасивного захисту, що забезпечується антимікробними препаратами в жіночому молоці, зумовлена наявністю IgA майже виключно в димерній або секреторній формі (16). Він присутній у найвищих концентраціях у перші дні після народження (в молозиві), а потім поступово знижується до базального рівня від 0,2 до 0,3 г/л (13, 14). sIgA є більш стійким до кислотних умов та протеолітичної активності кишкових ферментів, ніж сироватковий IgA (17), і виявляється, що він у значній кількості інтактний у фекаліях (17, 18). Місця дії проглоченого IgA обмежені, оскільки цей Ig може не абсорбуватися у значній кількості з кишечника (19). Показано, що молоко засвоюється протягом короткого періоду від 18 до 24 годин після народження (18), хоча значення для дитини невідоме.
Ряд антитіл sIgA було описано в жіночому молоці проти звичайних харчових антигенів, бактерій та вірусів, яким мати піддалася мати (13, 14, 20-22). Ці антитіла виявляються особливо важливими протягом перших кількох днів життя, коли продукція слизової оболонки IgA у дітей недостатня (21, 23). Після прийому всередину антитіла IgA до грудного молока пасивно захищають дитину, зв’язуючись з рецепторами IgA на просвітній поверхні ентероцитів, тим самим зменшуючи або перешкоджаючи надходженню антигену через незрілий шлунково-кишковий епітелій (24). В експериментальній моделі Уокера та співавт. (25) показали, що кишкові антитіла можуть запобігати резорбції природних білків і замість цього збільшувати поглинання деградованого матеріалу, імовірно, зв'язуючи антигени та піддаючи їх впливу кишкових ферментів. Антитіла IgA також можуть відігравати роль у виведенні потенційних харчових алергенів з людського молока, утворюючи імунні комплекси, які можуть фагоцитувати макрофаги жіночого молока (24). У попередніх попередніх дослідженнях зразки молозива у матерів, у яких у новонароджених пізніше виявлялися ознаки CMA (13) або розвивався пероральний CMA (14), низький загальний IgA (13, 14) та низький рівень специфічного IgA коров'ячого молока (13).
Метою цього дослідження було визначити вміст загального IgA в молоці та коров'ячому молоці в молозиві та жіночому молоці щодо подальшого розвитку CMA у немовлят.
методи
Предмети.
Немовлята та матері немовлят, які мають симптоми, що вказують на харчову алергію, були включені в дієту: продукти, які, як підозрюється, викликають симптоми у немовлят, напр. Коров’яче молоко, крупи (жито, пшениця, овес та ячмінь), яйця та риба були виключені з раціону матері та дитини. Здорові діти мали дієту, відповідну їх віку. Всі атопічні матері були безсимптомними (без сінної лихоманки, екземи, кропив'янки та астми) протягом періоду лактації. Під час дослідження матері не мали ліків, а ті, хто мастит протягом попередніх 4 тижнів, були виключені.
Протокол дослідження був затверджений комітетами з питань етики Шкірно-алергічної лікарні Центральної лікарні в Гельсінкі та міста Гельсінкі. Інформаційна згода була отримана від матерів на збір зразків грудного молока та на тривале спостереження за їхніми дітьми.
Шкірні проби.
Шкірні проби проводили з комерційним екстрактом коров'ячого молока (Soluprick, Allergologisk Laboratorium A/S, Horsholm, Данія) на черевній стороні передпліччя, використовуючи 1-мм верхівковий ланцет з рукою. Дигідрохлорид гістаміну (10 мг/мл; Солюприк) використовували як позитивний контроль. Реакції червоніли через 15 хвилин і вважалися позитивними, якщо середній діаметр волосся становив ≥ 3 мм, негативний контроль становив 0 мм, а позитивний контроль становив ≥ 5 мм одночасно.
Протокол коров’ячого молока та круп.
Збір зразків людського молока.
Перша проба жіночого молока була взята у матерів протягом перших 2 тижнів після народження, а потім у віці 1, 3 та 6 годин дитини. Додаткові проби були взяті під час появи симптомів CMA. У семи матерів зразки молока брали часто кожен третій день, щоб визначити точний перебіг рівня IgA в жіночому молоці. Під час грудного вигодовування на одну матір отримували в середньому 2,6 проби (діапазон від 1 до 12).
Груди промивали теплою водою перед тим, як збирати молоко ручним відсмоктувачем. Відразу після збору зразки людського молока, від 20 до 50 мл, центрифугували при 1400 x g при кімнатній температурі протягом 15 хвилин для відділення жирового шару. Згодом жир видаляли і супернатант збирали, заморожували та зберігали при -70 ° C до подальшого визначення IgA материнської людини.
Виявлення загальних IgA та IgA антитіл людського молока проти коров’ячого молока.
Після розморожування зразки людського молока розводили 1: 5 у PBS (pH 7,4), включаючи 0,05% Твін 20. Залишок жирного шару видаляли центрифугуванням при 17000 xg протягом 10 хвилин при 4 ° C. Супернатанти використовували для визначають антитіла IgA до коров'ячого молока та додатково розбавляють 1: 2 для вимірювання загального IgA. Загальний IgA грудного молока визначали радіальною імунодифузією, використовуючи імунодифузійні пластини LC-Partigen IgA з N Protein Standard SL як калібратором відповідно до інструкцій виробника (Dade Behring, Marburg, Germany). Результати виражаються в грамах на літр.
Статистичний аналіз.
Результати були проаналізовані досвідченим статистиком. Дані аналізували за допомогою ANOVA для повторних вимірювань з матерями як кластери. Оскільки вміст IgA був перекошений, до значень IgA застосовували логарифмічне перетворення перед монтажем моделі. Оскільки спочатку вміст IgA зменшується швидше, а потім майже на рівні, логарифм віку дитини використовували як пояснювальну змінну. В аналізі базовою моделлю було наступне: ln (вік) як випадкова та системна частина; ln (IgA) n ln (вік) * (1 галерея + 1 атопія матері + 1 симпатома), де 1 символ є змінною покажчика для символу. Незначні терміни (значущість> 5%) були виключені. Моделі порівнювали ANOVA. Для визначення статистичної значущості вікових відмінностей використовували тест Крускала-Уолліса.
Для визначення різниці пропорцій використовували тест χ 2. Аналізи проводили за допомогою програмного забезпечення S plus 4 (MathSoft, Inc., Сіетл, Вашингтон, США) та програмного забезпечення StatView 4.0 (Abacus Concepts, Inc., Берклі, Каліфорнія, США).
РЕЗУЛЬТАТИ
Клінічна характеристика досліджуваної сукупності.
Під час подальшого спостереження 48 матерів (69% з атопічною конституцією) мали дитину, у якої розвинувся клінічний вплив коров'ячого молока (14 дітей з тривалими коліками в анамнезі), у восьми (38% з атопічною конституцією) була дитина, яка тривала інфантильну коліки, але мали негативну дозу коров’ячого молока (контрольна група захворювання), а у 31 (23% з атопічною конституцією) була здорова дитина. Продемонстрована підвищена чутливість до жита, пшениці, вівса та ячменю була продемонстрована у 32 із 48 (67%) дітей із СМА. Тривалість виключного грудного вигодовування була порівнянна у немовлят із ЗМА, медіана 3,5 міс (діапазон 0 - 7 міс); у немовлят у контрольній групі захворювання медіана становила 3,0 міс (діапазон, від 1 тижні до 6 міс); а у здорових немовлят медіана становила 3,0 міс (діапазон, від 1 тижні до 6 міс). З 48 дітей із ХМА 35 (73%) годувались виключно грудним вигодовуванням на момент появи симптомів КМА. Середній вік на момент появи симптомів CMA становив 1,3 міс (діапазон, від 4 до 4 міс), а на момент клінічного випробування 4,9 міс (діапазон, 4,0 - 5,9 міс). Атопічна конституція матері корелювала з розвитком CMA у немовлят (p = 0 0003; тест χ 2).
Реакція на шкірний тест на коров’ячому молоці була позитивною у 15 із 48 (31%) пацієнтів з ІМА. У клінічному виклику коров’ячого молока 26 (54%) немовлят мали негайну реакцію та 22 (46%) затримку відповіді. Дванадцять дітей мали місцеву кропив'янку відразу після нанесення краплі коров'ячого молока на шкіру або губи. З інших 20 дітей вони мали екзему, п’ятеро мали шлунково-кишкові симптоми, а 11 реагували як на шкірне, так і на шлунково-кишкове оральне коров’яче молоко. На додаток до інших симптомів CMA, у чотирьох дітей були симптоми верхніх дихальних шляхів (гостра інфекція середнього вуха, алергічний риніт або хрипи).
Загальний та специфічний рівні IgA у грудному молоці.
Зразки молозива (дні 2-5) були отримані від семи матерів з дитиною, яка згодом розвинула ІМА, і від 22 матерів здорових дітей. ANOVA для повторних вимірювань забезпечив розрахункове значення (середнє геометричне) для IgA на 3 день 0,38 г/л (95% ДІ, 0,24-0,82 г/л) для матерів, у яких розвинувся ХМА, і 0, 82 г/л (95% ДІ) ). CI 0, 99–1, 51 г/л) для матерів, чия дитина залишалася здоровою або мала дитячу коліку, але не мала CMA (p 
Концентрація загального IgA в молоці матерів зі здоровою дитиною (відкриті кільця) та у тих, хто має немовля з алергією на коров'яче молоко (закриті квадрати) в залежності від тривалості лактації. Суцільні та пунктирні лінії представляють змодельовані геометричні засоби у матерів зі здоровою дитиною та у дітей із СМА. Для обох груп використовувались окремі моделі, які суттєво відрізняються одна від одної.
Повнорозмірне зображення
Стіл в натуральну величину
Рівні антитіл IgA до коров'ячого молока в молоці корелювали із загальним рівнем IgA (r = 0,39; р
Концентрація специфічного IgA коров’ячого молока в молоці мам зі здоровою дитиною (відкриті кільця) та тих, у кого є дитина з CMA (закриті квадрати) в залежності від грудного вигодовування. Суцільна лінія представляє змодельований геометричний діаметр. Для обох груп була використана загальна модель, оскільки рівні IgA були порівнянними в групах.
Повнорозмірне зображення
Рівні загальних антитіл IgA, специфічних для коров'ячого та грудного молока, були порівнянними у матерів немовлят із коліками, але без КМА (контрольна група захворювання), та у пацієнтів із здоровими немовлятами. Вміст загальних та специфічних антитіл IgA проти коров'ячого молока в жіночому молоці не корелював з атопією матері.
ОБГОВОРЕННЯ
Як зазначалось у цьому дослідженні, низький рівень молозива та людського IgA-молока може схилити потомство до розвитку ММА. Далі ми виявили, що низький загальний рівень IgA в жіночому молоці пов’язаний не з атопією матері, а з алергічним станом дитини.
Немовлята можуть мати алергічні реакції під час виключного грудного вигодовування (29). Існує припущення, що алергічні реакції на їжу у цих немовлят спричинені проникненням невеликої кількості білка, що споживається годуючими матерями, у грудне молоко та виявленим імунологічними методами в жіночому молоці (13, 27, 30). Насправді присутність харчових білків у жіночому молоці не рідкість. Наприклад, бета-лактоглобулін був виявлений у молоці 75% матерів, які споживають коров'яче молоко (30). Однак попередні дослідження показали, що кількість білків коров'ячого молока або продуктів його розпаду, що виділяються з молоком, не пов'язані з розвитком CMA (14). Це свідчить про те, що антигени коров’ячого молока в жіночому молоці, мабуть, були не єдиними факторами, що впливали на індукцію та підтримку алергічних симптомів коров’ячого молока немовляти.
Кілька факторів, таких як sIgA, сприяють контрольованому надходженню кишкових антигенів з тонкої кишки. Багато з цих факторів недостатньо розвинені в неонатальному періоді. Як повідомляється, ці антитіла до sIgA з’являються в кишкових секретах лише через кілька місяців внутрішньосвітлової антигенної стимуляції місцевим попередником плазматичних клітин, що продукують sIgA (31). Тому дуже ймовірно, що в стані відносного дефіциту sIgA, який виникає в ранньому дитинстві, чужорідні білки можуть легко отримати доступ до системного кровообігу (24). Однак ця тенденція незрілого кишечника новонароджених до надмірного надходження чужорідних антигенів через слизовий бар'єр компенсується пасивним захистом поверхні кишечника, який зазвичай забезпечується потраплянням молозива людини (24). Багато факторів, що потрапляють в жіноче молоко, можуть сприяти дозріванню кишкового бар'єру, одночасно забезпечуючи секреторні антитіла в просвіті кишечника для усунення чужорідних антигенів на поверхні кишечника (32-34), що, ймовірно, зменшує ризик сенсибілізації. Дефіцит IgA в молоці може призвести до підвищеного впливу слизової оболонки кишечника на потенційні алергени та збільшити ризик харчової алергії.
У цьому дослідженні загальний рівень антитіл IgA до грудного молока був найвищим у молозиві, швидко знижувався протягом 1-2 тижнів і залишався стабільним на рівні 0,2-0,3 г/л протягом декількох місяців в обох групах матерів. Ці значення порівнянні зі значеннями, виявленими в попередніх дослідженнях (13, 14). У матерів з дітьми з ХМА зниження було менш вираженим через нижчі вихідні значення. Більш високі концентрації sIgA в жіночому молоці протягом перших кількох тижнів лактації можуть пояснити, чому більшість дітей із ХМА не виявляли симптомів, що свідчать про ХМА, до 2-4 тижнів. У цьому дослідженні було відібрано більше зразків молока, ніж під час лактації, від тих матерів, у яких у дітей розвинувся КМА, ніж у дітей із здоровими немовлятами. Однак це було враховано при моделюванні.
Нарешті, ми представляємо докази захисного ефекту антитіл проти молозива та людського IgA-молока проти розвитку CMA у немовлят. Це може бути пов’язано з виведенням на поверхню кишечника чужорідних харчових антигенів. Низький рівень IgA в жіночому молоці може схилити нащадків до розвитку харчової алергії.
скорочення
алергія на коров’яче молоко
Дякую
Автори дякують Dr. Кайсу Юнтунен-Бекман за надання послуг, д-р. Arja Hakulinen для набору пацієнтів та відбору проб та Hanna Oksanen для статистичного аналізу даних. Ми також дякуємо Маржо Лепоньємі за його чудову технічну допомогу.