субхронічної

  • предметів
  • реферат
  • МЕТА:
  • результати:
  • висновок:
  • вступ
  • Матеріали і методи
  • Синтез пептидів
  • Довгострокові метаболічні ефекти (pGlu-Gln) -CCK-8 та (Pro 3) GIP [mPEG] у мишей з високим вмістом жиру
  • Біохімічний аналіз
  • Статистичний аналіз
  • результат
  • Вплив (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] та комбіноване введення пептидів на споживання їжі та масу тіла
  • Вплив (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] та комбінованого введення пептиду на ip та пероральну толерантність до глюкози
  • Вплив (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] та комбінованого введення пептиду на оцінку чутливості до інсуліну
  • Вплив (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] та комбінованого введення пептиду на ліпідний профіль крові
  • обговорення

предметів

  • діабет
  • Сигналізація поживних речовин
  • Ожиріння

реферат

Порушення дії рецептора шлункового інгібуючого поліпептиду (GIP) та активація рецепторів холецистокініну (CCK) представляє механічно різні підходи до можливого лікування діабету, асоційованого з ожирінням. У цьому дослідженні ми порівняли індивідуальні та комбіновані ефекти (Pro3) GIP [mPEG] та (pGlu-Gln) -CCK-8 як ферментативно стабільного антагоніста GIP-рецептора та агоніста молекули рецептора CCK.

результати:

Незважаючи на цей очевидний потенціал для абляції сигналів GIP-рецепторів для полегшення діабету, пов'язаного з ожирінням, немає жодних доказів зменшення споживання енергії у тварин із генетичним або хімічним нокаутом GIP-рецепторів. 3, 7 Попередні дослідження підтвердили, що GIP не впливає на харчову поведінку9, хоча більша кількість роботи свідчить про те, що генетична делеція GIP-рецепторів може зменшити кумулятивне споживання їжі у мишей, орієнтованих на яєчники. 10 Існують дані про посилення рухової активності у нокаутованих мишей GIP-рецептора 11, але подібні спостереження зроблені і у трансгенних мишей із надмірною експресією GIP. Тому прямі рухові ефекти, здається, навряд чи ляжуть в основу втрати ваги, що спостерігається у мишей зі зниженою сигналізацією GIP. Крім того, існують суперечливі повідомлення про вплив сигналізації компрометованого GIP-рецептора на витрати енергії. 13, 14 Таким чином, реалістичним підходом до подальшого посилення корисних ефектів антагонізму GIP-рецепторів було б одночасне зменшення споживання енергії.

У цьому контексті ми раніше намагалися відтворити саме такий сценарій на мишах з високим вмістом жиру шляхом спільного введення специфічного та стабільного антагоніста GIP-рецепторів, (Pro3) GIP та пептиду YY (3-36). 15 Однак ми не змогли спостерігати ефект насичення пептидом YY (3-36). 15 Поводження з ендогенною системою пригнічення апетиту канабіноїдів шляхом введення антагоніста рецептора AM251 (N- (піперидин-1-іл) -5- (4-йодофеніл) -1- (2,4-дихлорфеніл) -4-метил-1Н -піразол-3-карбоксамід) зменшив споживання їжі у діабетиків із ожирінням (об/об) та мишей з високим вмістом жиру. 16, 17 Однак ми не змогли продемонструвати синергетичний ефект лікування (Pro3) GIP у поєднанні з маніпуляцією AM251 з центральними канабіноїдними рецепторами. Крім того, клінічна придатність блокади рецепторів канабіноїдів була ретельно досліджена через появу небажаних явищ, пов’язаних з депресією та тривогою. Тому необхідний інший шлях зменшення споживання енергії в поєднанні з блокадою GIP-рецепторів.

Холецистокінін (CCK) - це кишковий пептид, який секретується ендокринними I-клітинами у відповідь на засвоєння поживних речовин. 19 Найбільш загальноприйнятою фізіологічною роллю ЦКК є короткочасна регуляція енергетичного балансу шляхом сильної стимуляції ситості. CCK існує в декількох молекулярних формах довжиною від 58 до 39, 33, 22, 8 та 4 амінокислот, 21, але карбокси-кінцевий октапептид, CCK-8, добре зберігається серед видів і зберігає різноманітні біологічні ефекти., CCK швидко руйнується після циркулюючої секреції, що призводить до короткого біологічного періоду напіввиведення. 23 Однак ми розробили (pGlu-Gln) -CCK-8 як ферментативно стабільний аналог CCK-8 тривалої дії зі значним ефектом насичення та метаболізму. 24

Це дослідження було розроблене для оцінки відносної ефективності та комбінованої терапевтичної корисності двох перспективних нових сполук для лікування ожиріння асоційованого діабету. Ми використовували ін’єкцію (pGlu-Gln) -CCK-8 або (Pro3 GIP) GIP [mPEG] двічі на день, поодинці, антагоніст ПЕГільованого GIP-рецептора тривалої дії, 25 окремо та в комбінації з мишами з високим вмістом жиру. хронічне лікування маси тіла, прийому їжі, пероральної та внутрішньочеревної (ip) толерантності до глюкози, оцінки чутливості до інсуліну та ліпідного профілю циркулюючої крові.

Матеріали і методи

Синтез пептидів

(pGlu-Gln) -CCK-8 було отримано від Американської пептидної компанії (Саннівейл, Каліфорнія, США). (Pro3) GIP [mPEG] був придбаний у GL Biochem (Шанхай, Китай). Пептиди характеризувались мас-спектрометрією MALDI-TOF (лазерна десорбційна іонізаційна іонізаційна іонізація). 26

Довгострокові метаболічні ефекти (pGlu-Gln) -CCK-8 та (Pro 3) GIP [mPEG] у мишей з високим вмістом жиру

Біохімічний аналіз

Усі зразки крові (125 мкл) відбирали з вирізаного кінця свідомої хвостової вени у мишей, що перебувають у свідомості, у часи, показані на малюнках, і негайно центрифугували за допомогою мікроцентрифуги Бекмана (Beckman Instruments, Голуей, Ірландія, Великобританія) протягом 30 с при 13000 g. Потім отриману плазму аликвотували в свіжі пробірки Еппендорфа і зберігали при -20 ° C. Перед аналізом глюкозу в плазмі аналізували за допомогою автоматизованої процедури окислення глюкози за допомогою аналізатора глюкози Beckman II (Beckman Instruments). Інсулін у плазмі крові тестували з використанням радіоімунологічного аналізу із активованим вугіллям, модифікованим декстраном. 27 Ліпідний профіль плазми вимірювали за допомогою автоматизованого аналізатора Hitachi 912 (Boehringer, Мангейм, Німеччина).

Статистичний аналіз

Результати виражаються як середнє значення ± sem. Дані порівнювали за допомогою дисперсійного аналізу з подальшим тестом Стьюдента - Ньюмена - Кільса. Аналіз площі під кривою (AUC) розраховували, використовуючи правило трапеції з основним відніманням. Площа над аналізом кривизни була розрахована подібним чином, використовуючи найвищу точку як базову лінію. P

Ефекти двічі на день (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] та комбіноване введення пептидів на ( a ) маса тіла та ( b ) споживання їжі у мишей з високим вмістом жиру. Параметри вимірювали протягом 4 днів до та 34 днів під час (позначеної горизонтальною чорною лінією) обробки фізіологічним розчином, (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 нмоль на кг маси тіла), (Pro3) GIP [mPEG] (25 нмоль на кг маси тіла) або комбінація обох пептидів. Значення є середнім значенням ± sem для восьми мишей. * P

Вплив (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] та комбінованого введення пептиду, двічі на день, на толерантність до ip глюкози та реакцію плазми на інсулін на глюкозу у мишей з високим вмістом жиру. Аналізи проводили після обробки (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 нмоль на кг маси тіла), (Pro 3) GIP [mPEG] (25 нмоль на кг маси тіла) або комбінації обох пептидів протягом 25 днів. ( a, c ) Глюкозу (18 ммоль на кг маси тіла) вводили внутрішньовенно внутрішньо у час, зазначений стрілкою, у мишей, що голодували. ( б, д ) Також вводять AUC глюкози та інсуліну через 0-60 хвилин після ін’єкції. Значення є середнім значенням ± sem для восьми мишей. * P AP AP P погана контрольна група.

Повнорозмірне зображення

Після перорального прийому глюкози рівень глюкози у плазмі крові був значним (P

Вплив двічі на день (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] та комбіноване введення пептидів на пероральну толерантність до глюкози та реакцію плазми на інсулін на глюкозу у мишей з високим вмістом жиру. Аналізи проводили після обробки (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 нмоль на кг маси тіла), (Pro 3) GIP [mPEG] (25 нмоль на кг маси тіла) або комбінації обох пептидів протягом 25 днів. ( a, c ) Глюкозу (18 ммоль на кг ваги тіла) вводили перорально, у час, зазначений стрілкою, у мишей, що голодували на ніч. ( б, д ) Також дається AUC глюкози та інсуліну в плазмі крові через 0–60 хвилин після ін’єкції. Значення є середнім значенням ± sem для восьми мишей. ** Р

Ефекти введення двічі на день (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] та комбінованого введення пептиду на оцінку чутливості до інсуліну у мишей з високим вмістом жиру. Аналізи проводили після обробки (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 нмоль на кг маси тіла), (Pro 3) GIP [mPEG] (25 нмоль на кг маси тіла) або комбінації обох пептидів протягом 25 днів. ( a ) Інсулін (20 МО на кг маси тіла) вводили внутрішньовенно внутрішньо в час, зазначений стрілкою, у мишей, що голодували. b ) Також показана площа глюкози в плазмі вище значень кривої протягом 0-60 хвилин після ін’єкції, розрахована з використанням рівня глюкози в плазмі в нульовий момент часу групи віднімання, обробленої фізіологічним розчином, для кількісного визначення повного ефекту кожної схеми лікування. ± тут для восьми мишей. ** Р

Вплив двічі на день (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] та комбіноване введення пептидів на ліпідний профіль крові у мишей з високим вмістом жиру. ( a - d ) Параметри вимірювали через 34 дні лікування фізіологічним розчином двічі на день (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 нмоль на кг маси тіла), (Pro3) GIP [mPEG] (25 нмоль на кг маси тіла) або комбінацію обидва пептиди. Значення є середнім значенням ± sem для восьми мишей. ** P AP AP P погана контрольна група.

Повнорозмірне зображення

обговорення

Послідовно з покращеною толерантністю до глюкози, незважаючи на незмінні рівні інсуліну, лікування (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] або комбінацією обох пептидів асоціювалося з нижчими концентраціями глюкози під час тестів на чутливість до інсуліну. Відсутність адитивного терапевтичного ефекту в цьому випадку, мабуть, зумовлена ​​індукцією основних антирегуляторних механізмів у насувається гіпоглікемії, оскільки рівень глюкози після ін’єкції інсуліну знизився до 3. Крім того, дані свідчать, що CCK є важливим регулятором чутливості до інсуліну під час годування з високим вмістом жиру. Це також означало б, що спостережуваний сприятливий вплив на гомеостаз глюкози з кожною схемою лікування є прямим наслідком зниження ожиріння та, як наслідок, посиленої дії інсуліну. 34 Враховуючи подібність щодо втрати ваги, це видається вірогідним поясненням.

На закінчення це дослідження припускає, що ін’єкція (pGlu-Gln) -CCK-8 або (Pro3) GIP [mPEG] двічі на день є ефективним засобом поліпшення метаболічного контролю у мишей з високим вмістом жиру. Це узгоджується з думкою, що обидва сполуки представляють цікаві та захоплюючі нові підходи до лікування діабету, пов’язаного з ожирінням. Відсутність адитивного ефекту (pGlu-Gln) -CCK-8 та (Pro3) GIP [mPEG] вимагає подальших досліджень, але припускає, що комбінована активація рецепторів CCK та пригнічення дії рецепторів GIP не є актуальною при лікуванні ожиріння асоційований діабет.