ЛАБОРАТОРІЯ КЛІТИНОВОЇ ЕНДОКРИНОЛОГІЇ (LBE)

стан

1. Наукова спрямованість лабораторії.

Галузь досліджень за останні десять років зосереджена на:

а) визнання ролі трансмембранного сегмента рецептора EGF в активації шляхів внутрішньоклітинної проліферації рецепторів EGF;

б) з’ясування змін у гормонорегульованому метаболізмі жирової тканини дією психотропних речовин на щурів;

в/з’ясування впливу ендокринної системи на виникнення та перебіг ревматоїдного артриту у людини та ад’ювантного артриту у тварин;

г/вивчення молекулярних і клітинних процесів впливу ендокринних руйнівників з естрогенною активністю на ріст і проліферацію клітин та процеси стероїдогенезу в клітинах гранульози яєчників.

2. Вибрані результати

a/Рецептор EGF - це трансмембранний (TM) мономер глікопротеїну. Зв’язування лігандів ініціює димеризацію рецепторів та активацію/фосфорилювання внутрішньоклітинної доменної тирозинкінази. Сигнальний шлях реакцій фосфорилювання-дефосфорилювання призводить до індукції проліферації, диференціації, міграції та метаболізму нормальних клітин. Надмірна експресія рецепторів з активністю тирозинкінази присутня у багатьох формах раку людини. Наші результати показали, що взаємодії між доменами ТМ є активною частиною димеризації/активації рецепторів EGF. Презумпція інгібування димеризації рецепторів шляхом впливу на взаємодії ТМ була підтверджена: i) in vitro після включення синтетичного EGFr-TM в мембрану клітин пухлини молочної залози людини, ii) шляхом трансфекції цих клітин плазмідною ДНК, що кодує ТМ. Специфічний інгібуючий ефект був продемонстрований на рівні фосфорилювання рецепторів та зменшення фосфорилювання білків внутрішньоклітинного сигнального шляху (вибрані пулікації 1).

в/Рівень гормону в синовіальній рідині суглобів може локально впливати на синовіальні та імунні клітини та модулювати перебіг ревматоїдного запалення, регулюючи вироблення цитокінів. Порівняння рівнів гормонів у синовіальній рідині коліна у хворих на ревматоїдний артрит (РА) та групи пацієнтів з незапальним ексудатом при остеоартриті показало, що рівні прозапальних естрогенів у синовіальній рідині підвищені в пацієнтів. Рівень тестостерону також трохи підвищився, але співвідношення естрадіолу/тестостерону було значно вищим у ревматистів. Крім того, в синовіальній рідині виявлено підвищений рівень прогестерону, альдостерону та гормону росту, що також сприяє активації аутоімунного запалення. У синовіальній рідині також було виявлено присутність інсуліну, гормону росту, С-пептиду та пролактину (вибрані публікації 2,3).

г/Ендокринні руйнівники - це речовини, основним ефектом яких є вплив на ендокринний гомеостаз через опосередковані рецепторами ефекти, синтез або метаболізм гормонів. Підгрупа - це ксеноестрогени, які заважають дії природних естрогенів з точки зору впливу на проліферацію клітин (канцерогенез) та стероїдогенез. До них належать похідні фенолу та фталатів, що використовуються в якості пластифікаторів, миючих засобів, пестицидів, які потрапляють в організм людини та тварин через забруднення навколишнього середовища та викид у харчовий ланцюг. Найпоширенішим ксеноестрогеном є бісфенол А (BPA), який у високих дозах пригнічував розширення кукулярно-осередкових комплексів свиней, дозрівання ядерних ооцитів, блокування мейозу та зменшення вироблення естрадіолу, стимульованого FSH, у клітинах гранульози. Іншим оригінальним результатом є знаходження інгібування базальної та стимульованої продукції прогестерону фенолами за допомогою механізму модуляції cAMP-сигнального шляху та ферментів стероїдогенезу. Негативні наслідки процесів у соматичних та статевих клітинах ксеноестрогенами можуть сприяти репродуктивним проблемам та збільшенню частоти злоякісних захворювань репродуктивних органів (вибрані публікації 4,6,8,9,10).

3. Методичні процедури, що застосовуються в лабораторії

Дослідження in vitro на клітинних лініях:

а) MCF7 - прикріплені до людини клітини раку молочної залози, яких у надмірній кількості

експресують рецептор альфа-естрогену;

b) Приєднані до андроген-чутливих до андрогенів клітин адренокарциноми простати людини,

які експресують специфічні андрогенні рецептори в цитозолі та ядерних фракціях:

i) вимірювання проліферації клітин та синтезу ДНК de novo;

ii) вимірювання експресії білків і генів, що беруть участь у механізмі проліферації

iii) вимірювання експресії білків і генів антиапоптотичного механізму дії;

в) Дослідження in vitro на первинних культурах клітин - свинячих яєчниках

i) вимірювання активності ферментів стероїдогенезу;

(ii) визначення виробництва вторинних месенджерів сигналізації.

4. Поточна науково-дослідна діяльність, поточні проекти, що вирішуються в лабораторії

VEGA 2/0107/10, 2010-2012: Участь антиапоптозу в механізмі проліферативних ефектів промислових ксеноестрогенів щодо канцерогенезу.

Проект зосереджений на більш детальній специфікації механізму проліферативних ефектів ксеноестрогенів фенольного типу з точки зору антиапоптотичної дії. Крім того, проект має на меті з’ясувати ефекти цих промислових речовин у поєднанні з природним гормоном, естрадіолом, з точки зору синергетичного або адитивного впливу на ріст клітин.

APVV-0147-10, 2011-2014. Уточнення ефекту вибраних ендокринних руйнівників, що збільшує ризик розвитку пухлин молочної залози, простати та яєчників.

Метою проекту є дослідження in vitro механізму дії окремих ендокринних руйнівників та їх сумішей з природними гормонами на:

- проліферація клітин раку молочної залози людини та клітин раку простати людини - геномні та негеномні механізми дії;

- процеси стероїдогенезу в клітинах гранульози яєчників, виявлення негеномних ефектів на інтрафолікулярні процеси (визначення внутрішньоклітинних сигнальних шляхів).

5. Список присуджених іноземних грантів

1/EK, Брюссель/CNRS Франція: Модуляція структури і функції адипоцитів дієтичним риб’ячим жиром, CIPA-CT-92-0162, 1993;

2/INSERM, Франція: Вплив кислотних кислот типу n-3 на чутливість до адипоцитів, Cooperative Est/Ouest 1994, 02/1994-12/1995;

3/INSERM, Франція: Роль трансмембранного сегмента рецепторів тирозинкінази: дослідження на окремих клітинах, 4E010B, 01/1996-12/1997;

4/EK, Brusel: 5 RP EK - Дисрегуляція ендогенного метаболізму стероїдів потенційно змінює розвиток нейронів та репродуктивної системи: Вплив пластифікаторів навколишнього середовища, QLRT - 2004 -02637, 01/2003-06/2006;

5/ŠTEFÁNIK, двосторонній словацько-французький проект з офісом-партнером INSERM U575 у Страсбурзі: Трансмембранні взаємодії в клітинній сигналізації. 2006-2007.

6. Міжнародне співробітництво

Доктор Р.Х.Ворінг, Школа біологічних наук, Бірмінгемський університет, Бірмінгем, Великобританія

Доктор. Д. Багнард та д-р. Г. Кремель, INSERM U575, Страсбург, Франція

Доктор. О. Пуйг, Ін-т. біотехнології, Гельсінський університет, Фінляндія

Доктор. Амар Беннасрун, Лабораторія взаємодій, екотоксикології, біорізноманіття, екосистем, CNRS UMR 7146 Мец

Доктор. П'єр Юбер, LISM, CNRS UPR 9027, Марсель, Франція

7. Вибір найважливіших публікацій (IF ≥2) співробітників Лабораторії клітинної ендокринології.

1. Беннасрун А., Фічкова М., Гардін А., Дірріг-Грош С., Ауніс Д., Кремель Г., Губерт П.: Трансмембранні пептиди як інгібітори сигналізації рецепторів ErbB. Клітина Mol Biol. 2004 липень; 15 (7): 3464-74. IF = 7,454

2. Імріх Р., Ровенський Я., Злнай М., Радікова З., Мачо Л., Вігас М., Коська Дж.: Гіпоталамічна пітурітарна функція осі надниркових залоз при спондиліті анкілозу. Енн Рев. Дис., 63, 671-674, 2004, IF 3916

3. Млинарцікова А., Фіцкова М., Сцукова С.: Вплив вибраних похідних фенолу та фталатів на вироблення стероїдних гормонів культивованими свинячими гранульозними клітинами. Altern Lab Anim. 2007 бер; 35 (1): 71-7, ЯК 3,203

4. Млинарцікова А., Колена Я., Фічкова М., Сцукова С.: Зміни у виробництві стероїдних гормонів клітинами гранульози яєчників свиней, спричинені бісфенолом А та диметакрилатом бісфенолу А Ендокринол Mol Cell. 2005 10 жовтня; 244 (1-2): 57-62, IF = 2,786

5. Млинарцікова А., Нагйова Е., Фіцкова М., Сцукова С.: Вплив вибраних ендокринних руйнівників на мейотичне дозрівання, розширення кумулюсів, синтез гіалуронану та прогестерону свинячими ооцитно-кумулюсними комплексами. Токсикол In vitro. Квітень 2009 р .; 23 (3): 371-7. IF = 2,473

6. Надьова Є., Камайоні А., Scsukova S., Mlynarcikova A., Прочазка Р., Немцова Л., Салустрі А.: Активація клітин кумулуса SMAD2/3 та шляхи рецепторів епідермального фактора росту беруть участь у розширенні та стероїдогенезі свинячих ооцитно-кумулюсних клітин. Mol Reprod Dev. 2011, 78 (6): 391-402. IF = 2,395