Зміни в сиалілюванні білка при раку передміхурової залози (результати експериментального дослідження)

Анотація:

Вступ:

сиалілюванні

Рак передміхурової залози - одна з найпоширеніших форм раку у чоловіків, де захворюваність зростає навіть у добре розвинутих країнах. Незважаючи на доступну діагностику та лікування, це третя найпоширеніша причина смерті від раку у чоловіків. Оцінка рівня сироваткового рівня специфічного для простати антигену відіграє ключову роль у діагностиці, але тест має низьку чутливість та специфічність. В даний час не існує надійного неінвазивного методу, і діагноз раку простати повинен бути підтверджений біопсією. Аномальне глікозилювання клітинних структур є важливою частиною трансформації пухлини. Метою представленого дослідження було оцінити зміни глікозилювання під час трансформації пухлини в тканині передміхурової залози

Методологія:
Ми проаналізували 24 випадки захворювань передміхурової залози, включаючи випадки доброякісної гіперплазії передміхурової залози та аденокарциноми простати з різними балами Глісона; 3 + 4, 4 + 4 і 4 + 5. Гістохімія лектину з використанням специфічних для сиалової кислоти лектинів, лейкоагглютиніну Maackia amurensis (MAL) для зв’язування α-2,3 та лейкоагглютиніну Sambucus nigra використовувалась для оцінки змін глікозилювання .) для зв'язування α-2,6. Зміни оцінювали напівкількісно, ​​а потім морфометричним аналізом.

Результати:
Трансформація пухлини в тканині передміхурової залози пов'язана зі змінами глікозилювання клітинних структур. У зв'язку з трансформацією пухлини в передміхуровій залозі ми спостерігали значне зменшення сиалілювання клітинних глікокон'югатів як при зв'язуванні α-2,6, так і α-2,3. Це зниження було більш вираженим у випадках аденокарцином з вищим балом Глісона.

Висновок:
Зміни глікозилювання можуть впливати на функціональні властивості пухлинних клітин, включаючи виживання, інвазивність та метастатичний потенціал. Оцінка експресії сиалової кислоти в тканині передміхурової залози може бути важливою для діагностики пухлин передміхурової залози, а також для кращого розуміння їх злоякісного потенціалу.

Ключові слова:
аденокарцинома простати, сіалова кислота, глікокон'югати, лектини, нейрамінідази, сіалілтрансферази,
прогностичні маркери

* Усі таблиці, графіки та малюнки, які є частиною статті, можна знайти у вкладеному PDF-файлі в кінці дослідження.

Вступ

Рак передміхурової залози - одна з найпоширеніших форм раку у чоловіків. Статистика повідомляє про понад мільйон нових випадків на рік у всьому світі. У Словаччині захворюваність на рак передміхурової залози у чоловіків поступається лише раку товстої кишки і має тенденцію до зростання. У період з 2000 по 2010 рік захворюваність майже подвоїлася (фото 1). Незважаючи на доступну діагностику та лікування, вона є третьою причиною смерті від раку у чоловіків (1).

Низька прогностична цінність обстеження PSA призвела до надмірної діагностики змін захворювань передміхурової залози (4). На основі постійних досліджень, включаючи Європейське рандомізоване дослідження скринінгу на рак передміхурової залози (ERSPC), Європейська асоціація урологів спочатку виявила, що умови для широкого скринінгу раку простати у всій популяції чітко не виконувались, і рекомендувала проводити лише пацієнтів перевіряється/пропонується після попередньої адекватної інструкції щодо ризику (5.6). Зважаючи на зростаючу частоту захворювання, в даний час широко обговорюються питання про необхідність широкомасштабного скринінгу на рак передміхурової залози. З цієї причини важливо шукати нові діагностичні процедури та маркери, які можна використовувати в діагностиці. Європейське товариство урологів закликало Європейську комісію посилити підтримку та фінансування цього дослідження.

Новим маркером у діагностиці може бути сіалова кислота. Сіалова кислота - це моносахарид, який експресується в процесі сиалілювання на кінцевих частинах глікопротеїнів на клітинній поверхні. Сіалові кислоти містяться в най-зв’язаних гліканах, часто приєднаних до основного залишку галактози, найчастіше за допомогою α-2,6 або α-2,3 глікозидного зв’язку (7). Цей моносахарид важливий у взаємодії клітин-клітин, а також між клітинами та навколишнім мікросередовищем. Він відіграє вирішальну роль у стабілізації структури глікопротеїнів та у визначенні характеристик поверхні клітин (8,9).

Змінене сіалілювання часто супроводжує злоякісну трансформацію, сприяючи підвищенню агресивності та росту пухлини. Клітини пухлини набувають нових властивостей, які дозволяють їм вирватися з імунної системи організму, впливати на здатність вторгуватися в навколишні тканини і метастазувати. У багатьох пухлинах було показано, що зміна сиалілювання білка пов’язана з біологічною поведінкою пухлини та прогнозом пацієнта. Сіалілювання впливає на апоптоз (10), неоваскуляризацію (11) в пухлині та впливає на стійкість до хіміо- та променевої терапії (12,13). Зміни рівня сіалової кислоти також можна продемонструвати у сироватці крові пацієнтів. Різницю в рівнях сиалової кислоти в сироватці крові виявили у пацієнтів із доброякісними ураженнями та злоякісними пухлинами (9).

Таким чином, оцінка сиалілювання може представляти цікавий прогностичний або діагностичний маркер щодо його можливого використання в рідкій біопсії. Таким чином, метою цього дослідження було оцінити зміни в сиалілюванні глікокон'югатів щодо трансформації пухлини в тканині передміхурової залози.

Методологія

Основою дослідження стали архівні мікроскопічні препарати тканин передміхурової залози, закріплені формаліном і вкладені в парафін з джерел Інституту патологічної анатомії Медичного факультету Карлового університету. Відповідно до встановлених патологічних діагнозів ми відібрали загалом 24 зразки. Ми зупинились на випадках непухлинних змін простати (6 пацієнтів), аденокарциноми простати з різними показниками Глісона; 3 + 4 (6 пацієнтів), 4 + 4 (6 пацієнтів) та 4 + 5 (6 пацієнтів).

Ми неодноразово гістопатологічно оцінювали їх згідно з опублікованими критеріями ВООЗ. Ми зробили два паралельних зрізи з вибраних предметних стекол та гістохімічно забарвили їх двома типами лектинів. Ми використовували аглютинінSambucus nigra (SNA), специфічний для зв'язування α-2,6, та лейкоагглютинін Maackia amurensis (MAL), специфічний для зв'язування α-2,3 сиалової кислоти. Депарафінізовані препарати промивали протягом 5 хвилин у PBS (у забуференному фосфатом сольовому розчині з 0,5% BSA, 0,05% NaN 3 0,005% Tween, pH 7,2). Слайди інкубували протягом 90 хвилин у розчині/мл біотинільованої СНС та MAL (Vector, Carpinteria, CA) при кімнатній температурі. Після триразового промивання в PBS предметні стекла інкубували з комплексом стрептавідинпероксидази протягом 30 хвилин і після багаторазового промивання фарбували розчином діамінобензидину протягом однієї хвилини. Потім предметні стекла фарбували гематоксиліном.

Ми оцінювали препарати в світловому мікроскопі, зосереджувались на оцінці позитивності цитоплазматичної та просвітньої мембран оцінюваного маркера. Оцінювали всю область підготовки, оцінку Глісона визначали для кожного оцінюваного поля, і кожне поле оцінювали окремо. Ми висловили висновки напівкількісно, ​​використовуючи напівкількісний бал, наступним чином:

  • негатив 0,5 слабкий, відп. нерегулярний позитив
  • добре оцінюваний регулярний позитив
  • сильний регулярний позитив
  • дуже сильний регулярний позитив

На наступному кроці ми кількісно визначили інтенсивність позитиву за допомогою гістоморфометричного програмного забезпечення ImageJ, v. 1,52p (14,15) і виражається як бали інтенсивності DAB (SDI), де 0 - мінімальна теоретична інтенсивність, 1 - максимальна теоретична інтенсивність. Напівкількісний показник позитивності DAB (SDP) виражається як середнє значення індивідуальних оцінок ± SEM. Результати оцінювали статистично за допомогою статистичного програмного забезпечення Graph Pad Prism за допомогою непараметричного тесту Крускала-Уолліса, значення p Наш веб-сайт використовує файли cookie. Вони використовуються, наприклад, для аналізу відвідуваності цього веб-сайту або для подальшого вдосконалення сайту за допомогою анонімної статистики та персоналізації реклами.
Переглядаючи веб-сайт, ви погоджуєтесь з принципами захисту персональних даних та використання файлів cookie. Я згоденПолітика конфіденційності