Вивчення експресії рецепторів прогестерону та естрогену в ендометрії овець, що харчуються нормальним раціоном та додатковим раціоном

Дослідження експресії рецепторів прогестерону в ендометрії маток-вівцематок із нормальним та додатковим харчуванням

*, ** Adriana Vasconcellos C.; ** Марко Паредес Х.; ** Даніела Нуньєс Р .; ** Едуардо Баррієнтос V.; ** Йоселін Олмазабал С. та ** Хав’єра Наваррете V.

* Відділ фундаментальних наук Медичний факультет Університету Ла Фонтера, Темуко, Чилі

** LIMBA, Лабораторія досліджень біотехнологій тварин, Університет де Ла Фронтера, Чилі.

КЛЮЧОВІ СЛОВА: креольські вівці араукана, репродуктивна система, годівля овець.

КЛЮЧОВІ СЛОВА: араукана креольська вівця; Репродуктивна система; Корм для овець.

ВСТУП

МАТЕРІАЛ І МЕТОД

Було використано 8 овець Criolla Araucana віком від 2 до 4 років, які утримувались на дослідному полі Макеуе (регіон Арауканія), які були розділені на дві рівні групи. Обидві групи утримувались на змішаній луговій основі з багаторічним райграсом та білою конюшиною (стандартна дієта). Крім того, одна з груп мала щоденний доступ після випасу до добавки з 250 г/добу вівсяного зерна і 30 г/добу сирого протеїну (доповнена дієта).

Стадія естрольного циклу була підтверджена анамнезом, гістологічним дослідженням та вимірюванням концентрації прогестерону та естрогену в крові (дані не наведені). Після жертвоприношення репродуктивну систему видаляли, негайно відокремлюючи два роги матки, один з яких фіксували у водному Буені для імуногістохімічного дослідження, а другий заморожували у рідкому азоті для вилучення РНК.

естрогену

Отримання праймерів для ампліфікації RE та RP методом RT-PCR у реальному часі. Праймери, використовувані для аналізу ПЛР у реальному часі (таблиця I), були отримані з послідовностей кДНК овець ER, доступних у базі даних GenBank, доступній на веб-сервері Національного центру біотехнологічної інформації (http://www.ncbi.nlm. nih.gov). Праймери, використовувані для ампліфікації кДНК b-актину (таблиця I), були отримані від Dzidic та ін., (2004). Біоінформаційне проектування стартерів проводилось за допомогою програми "Primer 3" (http://primer3.sourceforge.net/).

Імуногістохімічний аналіз рецепторів естрогену та прогестерону в тканині ендометрія дорослих овець, що підтримується з добавкою до їжі та без неї, вказує на існування імуногістохімічної реакції на обидва рецептори в обох групах овець (рис. 1 та 2). Імунореактивні сигнали особливо помітні на ядерному рівні в клітинах залоз ендометрія та стромальних клітинах, розташованих у карункулярних залозистих ділянках ендометрію (рис. 1 та 2). Часткова імунореакція спостерігається також у клітинах вистилаючого епітелію (рис. 1А та 2А). Спостерігається більша кількість імунореактивних клітин, а також більша інтенсивність марки обох рецепторів у тканинах ендометрія овець із добавками в порівнянні з тими, що харчуються стандартною дієтою (рис. 1 та 2). Розшифровка RP та ER була виявлена ​​в загальній РНК, витягнутій з ендометрію овець, які годували стандартним раціоном, а також додатковим раціоном (рис.

Рис. 1. Імуногістохімічна експресія ЕР в ендометрії овець без дієтичного харчування (А і С) та доповненого (В і Г). Виділяється імунореакція в клітинах строми (А і В) та в залозистому епітелії (С і D) (товста стрілка). Також вказується (тонка стрілка) відсутність імунореактивності в епітелії ендометрія та деяких клітинах залозистого епітелію. Рисунок 1 A та 1 B (400X), малюнок 1 C та 1D (1000X).

Рис. 2. Імуногістохімічна експресія РП в ендометрії овець з недоповненим раціоном (А і С) та доповненим (В і Г). Виділяється імунореакція в клітинах строми (А і В) та в залозистому епітелії (С і D) (товста стрілка). Тонка чорна стрілка вказує на відсутність імунореактивності в епітелії ендометрія та деяких клітинах залозистого епітелію. Рисунок 2 A і 2 B (400X), Рисунок 2 C і D (1000X).

Рис. 3. Виявлення транскриптів ER та RP методом RT-PCR, забарвлених бромідом
етидію (0,5 мг/мг) і візуалізується на 1,8% агарозному гелі.

Оцінка рівня експресії транскриптів ER та RP у зразках тканин ендометрія, подібних до тих, що використовуються для імуногістохімічної оцінки, вказує на те, що транскрипти ER та RP експресуються на більш високому рівні в тканинах ендометрія у овець, яких годували добавками. Їжею (рис. 4).

Рис. 4. Графічне зображення рівня експресії транскриптів RE (A) та RP (B) в ендометрії доповнених та не доповнених овець. Аналіз експресії проводили за допомогою RT-PCR в реальному часі, використовуючи експресію гена b-актину як ендогенного контролю.

Зроблено висновок, що як імуногістохімічна, так і транскрипційна експресія ER та PR є вищою в ендометрії овець, які отримували доповнений раціон, порівняно з вівцями, які підтримують стандартну дієту.

ДЯКУЮ

Ми вдячні Директорії досліджень Університету де ла Фронтера, Темуко, Чилі, за фінансову підтримку, надану в рамках проекту DIUFRO 107-0017

БІБЛІОГРАФІЧНА ЛІТЕРАТУРА

Abecia J.; Соса, К.; Forcada, F. & Meikle A. Вплив недоїдання на встановлення вагітності вівцематок. Грати Nutr. Dev., 46: 367-78, 2006. [Посилання]

Кларк, Дж.; Шредер, В. та О'Меллі, Б. Механізми дії стероїдних гормонів. У підручнику ендокринології Вільямса. Видавництво В. Б. Сондерса, 1992. С. 35-90. [Посилання]

Кларк, Дж. І Мані, С. Дії стероїдних гормонів яєчників. В Knobil E., Neill J D. (Eds). Фізіологія розмноження. Raven Press, Нью-Йорк, 1994. Стор. 1011-1059. [Посилання]

Хомчинський, П. та Саккі, Н. Одноетапний метод виділення рНК кислотною екстракцією гуанідинію тіоціанат-фенол-хлороформ. Анальна біохімія., 162: 156-59, 1987. [Посилання]

Лозано, Дж.; Абеція, Дж .; Форкада, Ф .; Zarazaga, L. & Alfaro B. Вплив недоїдання на розподіл прогестерону в утрусі вівцематок під час лютеїнової фази естрального циклу. Теріогенологія, 49: 539-46, 1997. [Посилання]

Мейкле, А.; Гарофало, Е .; Тасенде, К.; Родрігес-Піньон і Шалін, Л. Регуляція гонадальними стероїдами рецепторів естрогену та прогестерону вздовж репродуктивного тракту у жіночих ягнят. Acta Vet. Scand., 42: 161-9, 2001. [Посилання]

Мейкле, А.; Тасенде, К.; Соса, К. та Гарофало, Е. Роль статевих стероїдних рецепторів у репродуктивній фізіології жіночої статки овець. Грати Nutr. Dev., 16: 385-94, 2004. [Посилання]

Скарамуцці, Р .; Кемпбелл, Б .; Даунінг, Дж.; Кендалл, штат Нью-Йорк; Халід, М.; Muñoz-Gutiérrez, M. & Somchit, A. Огляд ефектів прикорму в концентраціях репродуктивних та метаболічних гормонів та механізмів, що регулюють фолікулогенез та швидкість овуляції. Грати Nutr. Dev., 46: 339-54, 2006. [Посилання]

Соса, К.; Лозано, Дж.; Віньолес, C.; Акунья, С.; Абеція, Дж .; Форкада, Ф .; Фосберг, М. та Мейкл, А. Вплив площини харчування на експресію статевих рецепторів статевих ендометріїв у вівцематок. Наука про розмноження тварин, 84: 337-48, 2004. [Посилання]

Спенсер, Т. та Базер, В. Часові та просторові зміни в експресії гена рецептора естрогену та гена прогестерону під час естрального циклу та ранньої вагітності в овцематки. Biol. Reprod., 53: 1527-43, 1995. [Посилання]

Васкончеллос, А.; Паредес, М.; Carrasco, J. & Núñez D. Аналіз експресії рецепторів естрогену та прогестерону в ендометрії овець породи Ромні Марш та Араукана. Int. J. Morphol., 27 (1):97-100, 2009. [Посилання]

Vasconcellos, A., Sepúlveda, N., Castillo, J., Rosas, C. Наявність рецепторів естрогену та прогестерону в ендометрії допубертатних овець. Імуногістохімічне дослідження. Міжнародний J. Morphol., 23 (4): 393-6, 2005. [Посилання]

Адреса для листування:

Марко Паредес Х.
Школа медицини
Університет Ла-Фронтера
Графа 54-D
Темуко - ЧИЛІ

Отримано: 24.02.2010
Прийнято: 26.03.2010

Весь вміст цього журналу, крім випадків, коли він ідентифікований, підпадає під ліцензію Creative Commons

Тел .: (56-45) 232 5571

Факс: (56-45) 232 5600


[email protected]