Бібліометричні дані:
Citescore: 0,4 | Рейтинг журналу SCImago: 0,12 | Google Scholar: 0,0172

мікрорнк-377

Журнал відповідно до стандартів "Єдині вимоги до рукописів, що надходять до біомедичних журналів" www.icmje.org

Журнал дотримується принципів і процедур, продиктованих "Комітетом з етики публікацій (COPE)" www.publicationethics.org

Журнал дотримується принципів прозорості та найкращих практик у публікаціях DOAJ www.doaj.org

(PDF) Rev Osteoporos Metab Miner. 2017 р .; 9 (4): 139-144
DOI: http://dx.doi.org/10.4321/S1889-836X2017000400006

Ключові слова: кальцифікація судин, miR-377, SOD-2, окислювальний стрес, МЩКТ.

Вступ
Кальцифікація судин (СС) є однією з найбільш частих змін у старінні, але особливо у пацієнтів з хронічною хворобою нирок (ХХН). Збільшення активних форм кисню у відповідь на перевантаження фосфором (P), що відбувається під час CV, сприяє фенотиповій дедіференціації гладком’язових клітин судин (VSMC) від строго м’язового (скорочувального) фенотипу до остеобластичного фенотипу. 1-4. Зокрема, відомо, що перекис водню, одна з найпоширеніших активних форм кисню, здатна індукувати експресію остеобластичного фактора транскрипції Cbfa1/RUNX2 та індукувати кальцифікацію 5,6 .
МікроРНК (miRs) - це малі РНК (

22 нуклеотиди) одноланцюгові некодуючі середовища, які опосередковують посттранскрипційне приглушення генів шляхом зв'язування шляхом комплементарності підстав до 3'UTR-області цільових мРНК. МіР беруть участь у важливих біологічних процесах, включаючи проліферацію, диференціювання та розвиток тканин клітин 7,8. Недавні дослідження показали, що кілька miR є важливими регуляторами диференціації VSMC до остеобласт-подібних клітин і, отже, кальцифікації судин 9-12 .
MiR-377 виступає важливим регулятором старіння, регулюючи, серед іншого, фермент супероксиддисмутазу 2 (СОД-2) 13,14. СОД - головний антиоксидант організму, що каталізує перетворення супероксидного радикала в перекис водню. СОД-2 відповідає мітохондріальній формі ферменту. У численних роботах вивчалася роль окисного стресу як індуктора серцево-судинних захворювань, тому в даному дослідженні ми пропонуємо проаналізувати в моделі in vivo можливу роль miR-377 як регулятора мінералізації аорти.

Біохімічні маркери
Вимірювали рівень сироватки Ca, P та креатиніну та креатиніну в сечі за допомогою багатоканального автоматизованого аналізатора Hitachi 717 (Boehringer Mannheim, Берлін, Німеччина). Паратгормон сироватки крові (PTH) вимірювали методом ІФА (Immutopics, Сан-Хуан-Капрістано, США) згідно з протоколами виробника. Фактор росту фібробластів 23 (FGF23) визначали методом ІФА (Kainos Laboratories, Японія).

Денситометрія кісток
МЩКТ вимірювали в гомілці на трьох рівнях: проксимальному восьмому, дистальному сьомому/восьмому та гомілковому відділах за допомогою двоенергетичного цифрового радіологічного денситометра Hologic QDR-1000 (Hologic, Бедфорд, США), обладнаному спеціальною програмою для дрібних тварин.

Аналіз кальцифікації аорти
Кальцифікацію черевної аорти щурів аналізували із застосуванням загального вмісту Са. Для визначення загального вмісту Са фрагмент черевної аорти (найближчий до дуги аорти) гомогенізували ультратуракс (OmniHT) у 0,6 н. HCl. Після перемішування при 4 ° С протягом 24 годин зразки центрифугували. Вміст Са визначали в супернатанті методом комплексонового о-крезольфталеїну (Sigma-Aldrich, Сан-Луїс, США), і гранулу ресуспендували в лізисному буфері (125 мМ Трис та 2% SDS, рН 6,8) для екстракції білка та кількісне визначення за методом Лоурі (Bio-Rad, Геркулес, США). Вміст Са нормалізували, виражаючи себе як мкг Са на мг білка.

Дослідження експресії генів
Екстракцію РНК проводили методом тіоціанат-гуанідиній-фенол-хлороформ. Копію ДНК (кДНК) синтезували за допомогою набору зворотної транскрипції Taqman MicroRNA (Applied Biosystems, Фостер-Сіті, США). Експресія гена miR-377 була проаналізована методом ПЛР у реальному часі (qPCR) на системі Stratagene Mx3005P QPCR (Agilent Technologies, Санта-Клара, США). Для ПЛР використовували аналіз на вимогу, розроблений Applied Biosystems з використанням специфічних оліго- та флуоресцентних зондів Taqman. Для кількісного визначення та нормалізації використовували експресію ядерної РНК U6.

Вестерн-блот
Після перенесення мембрани інкубували протягом 12 годин з антитілами проти SOD-2 (1: 1000, Cell Signaling Technology, Danvers, США) та анти-GAPDH (1: 5000, Санта Круз Біотехнологія, Даллас, США). Вторинне зв’язування антитіл було виявлено за допомогою набору ECL Advance Western Blot Detection Kit (Amersham Bioscience, Бакінгемшир, Великобританія) та системи моделювання зображень VersaDoc 4000 (Bio-Rad).

Статистичний аналіз
Для статистичного аналізу результатів була використана програма SPSS 17.0. У випадку змінних з нормальним розподілом порівняння груп лікування проводили за допомогою дисперсійного аналізу (ANOVA) з тестом Бонферроні. У випадку змінних з ненормальним розподілом використовували тест Крускала-Уолліса.

Результати
Нефректомія зменшила кліренс креатиніну - ефект, який не посилювався у тварин, які отримували дієту з високим вмістом Р (табл. 1). Спостерігалося помірне, але незначне збільшення рівня Р у сироватці крові у нефректомізованих тварин, що було більш помітним у тих, хто отримував дієту з високим вмістом Р. Однак невелике збільшення рівня Р у сироватці крові було пов’язане з більш значним підвищенням рівня Р у сироватці крові. FGF23. Рівень FGF23 у сироватці збільшився удвічі при проведенні нефректомії, тоді як підвищення рівня Р у сироватці крові становило менше 50%. Подібним чином, у тварин, які отримували раціон з високим вмістом Р (CRI + PA), рівні FGF23 зросли вдвічі порівняно з нормальним режимом харчування (CRI + PN), при цьому збільшення рівня Р у сироватці крові становило менше 25%.

Нефректомія не впливала на зміни МЩКТ у гомілці, хоча в групі CRI + PA МЩКТ у проксимальній частині гомілки значно зменшилася порівняно з групою CRI + PN та порівняно з групою Sham (Таблиця 1).
У групі IRC + PN вміст Са в аорті збільшився в 3 рази порівняно з групою Шам. Збільшення щодо групи Шам було збільшено до 17 разів у групі IRC + PA. Експресія miR-377 зменшилася на 65% при нефректомії, при цьому ніякого додаткового ефекту не спостерігалося при дієті з високим рівнем P. Насправді кліренс креатиніну був біохімічним параметром, який був найбільш сильно пов'язаний з експресією цього miR. ( r = 0,83; p = 0,001). На відміну від цього, сироватка P не асоціювалася з експресією miR-377 (r = -0,302; p = 0,34).
Експресія білка SOD-2 явно зростала при нефректомії (більш ніж у 3 рази), ефект, який був більш вираженим у тварин, нефректомізованих дієтою з високим вмістом Р (більше ніж у 6 разів).

Конфлікт інтересів: Автори заявляють, що не мають конфлікту інтересів.

Маніпуляції з експериментальними тваринами проводились відповідно до положень чинного законодавства (Директива Європейського Союзу 2010/63/ЄС та Королівський указ 53/2013 від 1 лютого).