Перегляньте статті та зміст, опубліковані в цьому носії, а також електронні зведення наукових журналів на момент публікації

Будьте в курсі завжди, завдяки попередженням та новинам

Доступ до ексклюзивних рекламних акцій на підписки, запуски та акредитовані курси

Revista Mexicana de Oftalmología (RMO) - офіційне видання Мексиканського товариства офтальмологів. Цей журнал є результатом злиття журналів: Аннали Мексиканського товариства офтальмологів, Архіви Асоціації для уникнення сліпоти в Мексиці та Вісник офтальмологічної лікарні Нуестра Сеньора де ла Луз. RMO публікує на іспанській або англійській мовах неопубліковані та оригінальні наукові статті, оглядові статті, звіти про клінічні випадки, примітки на відповідні теми, листи до редактора та спеціальні розділи, останні виключно за запрошенням, що стосуються клінічних, хірургічних, епідеміологічних та основних аспектів офтальмології.

Індексується у:

СКОПУС, ПОТУЖЕННЯ, ЕКСЕРПТА, БИЗАН і ПЕРІОДИКА

Слідкуй за нами на:

CiteScore вимірює середню кількість цитат, отриманих за опубліковану статтю. Читати далі

SJR - це престижна метрика, заснована на ідеї, що всі цитати не рівні. SJR використовує алгоритм, подібний до рейтингу сторінок Google; є кількісним та якісним показником впливу публікації.

SNIP дозволяє порівняти вплив журналів з різних предметних областей, виправляючи відмінності у ймовірності цитування, які існують між журналами різних тем.

  • Резюме
  • Ключові слова
  • Анотація
  • Ключові слова
  • Вступ
  • Резюме
  • Ключові слова
  • Анотація
  • Ключові слова
  • Вступ
  • Матеріал і методи
  • Результати
  • Обговорення та інтерпретація результатів
  • Висновки
  • Фінансування
  • Конфлікт інтересів
  • Дякую
  • Бібліографія

виявлення

Лабораторні методи, що використовуються для діагностики блефариту, кон’юнктивіту та кератиту, включають від нових обстежень до пошуку паразитів, плям на мікробіологічних культурах, що може зайняти до 2 тижнів для отримання результату.

Впровадити ПЛР для виявлення грампозитивних та грамнегативних бактерій та грибів із використанням методу, про який раніше повідомляли та адаптували до умов лабораторії молекулярної біології Центру досліджень біомедики лікарні Ла Фундасіона Нуестра Сеньора де ла Луз І.А.П. (CIB-HOL) з використанням термоциклера Axygen/Maxygene.

Виділення ДНК проводили з мікробіологічних культур грампозитивних, грамнегативних бактерій та грибів. Для визначення чутливості методу проводили послідовне розведення. ПЛР проводили для грибків та бактерій. Шукали загальних умов для проведення одноетапної ПЛР.

Використовуючи розведення ДНК, продукт ампліфікації отримували з використанням 0,12 нг бактеріальної ДНК та 0,15 нг грибкової ДНК.

Методика ПЛР є дуже важливим інструментом для виявлення ДНК бактерій та грибків, що викликають очні інфекції. Це дозволяє посилити генетичний матеріал етіологічного агента та полегшує його спостереження, отримуючи результати за менший час, ніж при звичайних методиках.

Лабораторні методи, що використовуються для діагностики блефариту, кон’юнктивіту та кератиту, починаючи від нових обстежень і закінчуючи пошуком паразитів, грамових плям та мікробіологічних культур, можуть тривати до двох тижнів для отримання результату.

Для проведення ПЛР для виявлення грибів та грампозитивних та грамнегативних бактерій за допомогою раніше повідомленого методу, адаптованого до лабораторії молекулярної біології в Центрі біомедичних досліджень, лікарні Фундасьон Нуестра Сеньора де ла Луз І.А.П. (CIB-HOL), використовуючи термоциклер Axygen/Maxygene.

ДНК з мікробних культур грампозитивних, грамнегативних та грибів були отримані для проведення ПЛР. Для визначення чутливості методу проводили послідовне розведення. ПЛР проводили для грибків та бактерій. Ми шукали загальні умови для ПЛР в один крок

Коли ми використовували розведення ДНК, ПЛР був чутливим до 0,12 нг до бактеріальної ДНК та 0,15 нг до ДНК грибкової.

Методика ПЛР є дуже важливим інструментом молекулярної біології для виявлення ДНК від бактерій та грибків, відповідальних за очні інфекції. Цей метод дозволяє посилити генетичний матеріал етіологічного агента, і результати отримуються за менший час, ніж за допомогою звичайних методик.

Око є органом, відповідальним за вловлювання світла, що є початковим процесом зору, і завдяки своєму анатомічному положенню воно постійно піддається дії різноманітних патогенів. Однак він має систему для виробництва речовин, включаючи сльозу, яка містить велику кількість хімічних сполук, таких як цитокіни, ферменти, ліпіди та електроліти, здатні утворювати імунний бар'єр, щоб зупинити будь-який мікроорганізм, який може викликати інфекцію 1 . Походження очної інфекції може бути наслідком травми, хірургічного втручання, використання контактних лінз та інших захворювань, при яких імунна система порушена, сприяючи розвитку збудників. Очні інфекції спричинені бактеріями, грибками, вірусами або паразитами. Існує багато типів очних інфекцій, і серед найпоширеніших ми можемо згадати кон’юнктивіт, кератит та блефарит або хронічне запалення повік, в основному викликане стафілококами. 2–4 .

Очні хірургічні втручання, що вражають рогівку, мають певний ризик зараження мікроорганізмами, які зазвичай населяють очну поверхню. Повідомлялося, що найбільш часто виділеними мікроорганізмами є грампозитивні бактерії, S. epidermidis, що займають перше місце за частотою, що походить від звичайної флори очної поверхні 5,10,11 .

Є й інші захворювання, які пов’язані з ризиком зараження очей. Серед захворювань, які передбачають зміну епітелію рогівки, ми можемо згадати, зокрема, аутоімунні захворювання, такі як орбітопатія щитовидної залози, синдром Шегрена та пемфігоїд. Системні захворювання, такі як цукровий діабет, хвороби колагену, метаболічний синдром або стани, що включають систему імуносупресії, також схильні до розвитку інфекційного кератиту через зниження гуморального та/або клітинного захисту 5,12–14 .

Загалом, мікроорганізми, які були причетними до збудників кон'юнктивіту, блефариту та інфекційного кератиту, мають бактеріальне походження, переважно грампозитивні 5. Гриби становлять близько 5-30% випадків, і щодо паразитів, зареєстрований відсоток нижчий, і 1-15% приписується їм. Найпоширенішим паразитом, який викликає блефарит, є Demodex folliculorum, тоді як паразитарний кератит асоціюється з Acanthamoeba sp 5,15,16 .

Лабораторні методи, що використовуються для діагностики блефариту, кон’юнктивіту та кератиту, варіюються від нових обстежень до пошуку паразитів та плям до мікробіологічних культур, що може зайняти до 2 тижнів для отримання результату 17,18. Наявність мікроорганізмів може бути у дуже малих кількостях, і це залежить від клінічного прояву інфекції; Наприклад, відверті абсцеси рогівки можуть виникати в більш нерозвинених формах, таких як кристалічна кератопатія, в якій може бути виявлений інтрастромальний інфільтрат, але з мінімальною запальною реакцією та недостатньою кількістю зразків для класичної мікробіології 19–23. Через це були розроблені методи молекулярної біології для мікробіологічної діагностики 24–26. Пряма полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) застосовувалася для вірусів, бактерій, грибків та паразитів; Вкладена ПЛР для бактеріальної ідентифікації; та ПЛР у режимі реального часу для всіх типів мікроорганізмів 27–31 .

У 2000 р. Jaegger et al. та Carrol та співавт. описав метод ПЛР для виявлення грибків та бактерій, відповідно, в зразках очної рідини 32,33. Ці дослідження повідомляють про високу чутливість методу, що є дуже важливим для діагностики очної мікробіології через незначну кількість біологічного матеріалу, який можна отримати в офтальмологічній пробі, однак для кожної лабораторії необхідно стандартизувати умови праці, отримати задовільні результати. Метою цієї роботи було відтворення цих методів для виявлення грибів та бактерій, отримання відповідних умов для цього в рамках однієї програми з використанням однакових умов для виявлення як бактерій, так і грибів; Це скоротило б час до результатів, які допомогли б пацієнту отримати швидкий та надійний результат. Робота проводилася в лабораторії молекулярної біології Центру біомедичних досліджень лікарні Фундасьон Нуестра Сеньора де ла Луз І.А.П. (CIB-HOL).

Матеріал і методи

Для вкладеної ПЛР використовували продукти ампліфікації, отримані з ПЛР для бактерій; умови були: 95 ° C/10 хв, потім 32 цикли з температурами 94 ° C/30 с, 61,4/1 хв, 72 ° C/30 с і, нарешті, температура подовження 72 ° C/3 хв. Всі продукти ПЛР ідентифікували за допомогою 1,5% електрофорезу в агарозному гелі, використовуючи умови 90 В протягом 40 хв та Gelred 10X, щоб візуалізувати їх у UV-просвітнику BioLite з УФ-світлом при 302 нм.

З отриманої суспензії бактерій концентрація отриманої ДНК становила 4 нг/мкл, тоді як для грибкової ДНК вона становила 5 нг/мкл; Для ПЛР використовували 3 мкл (12 нг) бактеріальної ДНК та 3 мкл (15 нг) грибкової ДНК. Задовільні результати були отримані з використанням повідомленого Tm для кожної ПЛР. Продукт ПЛР для бактерій становив приблизно 1300 п.н., а програма в термоциклері тривала 3 год 20 хв (рис. 1). Для грибкової ПЛР отримували продукт ампліфікації приблизно 700 п.н., а час програми ПЛР у термоциклері становив 3 год 20 хв (рис. 2). У градієнтному температурному ПЛР для проведення ПЛР грибків та бактерій за одне виконання найкращими умовами були: 95 ° C/10 хв, 35 циклів з температурою 94 ° C/1 хв 56 ° C/1 хв, 72 ° C/1 хв і, нарешті, температура подовження 72 ° C/7 хв з тривалістю 3 год 10 хв. При Tm 56 ° C може бути ампліфікована як грибкова, так і бактеріальна ДНК.