виділення

В
В 		В

Індивідуальні послуги

Журнал

  • SciELO Analytics
  • Google Scholar H5M5 ()

Стаття

  • Іспанська (pdf)
  • Стаття в XML
  • Посилання на статті
  • Як цитувати цю статтю
  • SciELO Analytics
  • Автоматичний переклад
  • Надішліть статтю електронною поштою

Показники

  • Цитується SciELO

Пов’язані посилання

  • Подібне в SciELO
  • uBio

Поділіться

Перуанський журнал біології

версія В он-лайн В ISSN 1727-9933

Rev. peru biol. В. vol.20В no.2В ЛимаВ серп. В 2013

ОРИГІНАЛЬНІ РОБОТИ

Виділення та характеристика Кишкова паличка O157: H7 з яловичого фаршу в Лімі-Перу

Виділення та характеристика Кишкова паличка O157: H7 від м’ясної худоби в Лімі-Перу

2 Лабораторія харчової хімії, факультет біологічних наук, Національний університет міста Сан-Маркос.

Резюме

Ключові слова: Escherichia coli O157: H7, велика рогата худоба, яловичий фарш, фактори вірулентності.

Анотація

Метою дослідження було виділити та охарактеризувати кишкову паличку O157: H7 зі свіжого яловичого фаршу, отриманого на різних харчових ринках. Було проаналізовано 195 зразків, для виділення та перерахування кишкової палички використовували, швидше за все, числову техніку з використанням кількох пробірок, для виділення та характеристики E. coli O157: селективне збагачення H7 та біохімічний аналіз, характерні колонії підтверджували серологічно. Для визначення присутності шигатоксину (stx1, stx2) та інтиміну (eaeA) проводили мультиплексну ПЛР у режимі реального часу, а для ентерогемолізину - тест на гемоліз. 87,18% зразків були позитивними на кишкову паличку, а 77,95% мали кількість, більшу або рівну 50 НМП/г. Були отримані 3 (1,54%) штами E. coli O157: H7, один stx1 +/stx2 +/eaeA - та ентерогемолізин -, один stx1 +/stx2 -/eaeA + та ентерогемолізин - а інший stx1 -/stx2 -/eaeA - і ентерогемолізин +. Також отримано 4 (2,05%) штами E. coli O157 non H7, фактори вірулентності не представлені. Дослідження показало, що потенційний ризик E. coli O157: H7 впливає на населення Ліми.

Ключові слова: Escherichia coli O157: H7, велика рогата худоба, яловичий фарш, фактори вірулентності.

Вступ

Ентерогеморагічна підгрупа ЕС (EHEC) є найбільш агресивним серотипом для людей, і згідно з ВООЗ, штам STEC, який слід вважати EHEC, повинен продукувати інтімін та ентерогемолізин; існує більше 150 серотипів, найпоширенішим у всьому світі є кишкова паличка 0157: H7.

У Перу перша знахідка E. coli O157: H7 була зроблена у фекаліях немовляти, яке прийшло з Такни, штам представляв 3 фактори вірулентності (Huapaya et al. 2001, Huguet et al. 2002). Мора та ін. (2007) у дослідженні 102 зразків яловичого фаршу з столиці Ліми вони виявили 22,55% (23) позитивних на E. coli O157; Із загального позитивного результату було проаналізовано 10 (43,48%) штамів, перевіряючи, чи всі вони є E. coli O157: H7, що продукують 03 фактори вірулентності.

Метою цього дослідження є визначення присутності штамів E. coli O157: H7 у зразках свіжого яловичого фаршу великої рогатої худоби, що продається в різних районах столичної Ліми, та визначення наявності факторів вірулентності.

У період з червня 2009 року по січень 2011 року було проаналізовано 195 зразків свіжого фаршу яловичини великої рогатої худоби, зібраних у випадково обраних 65 кіосках, розташованих на 33 продовольчих ринках, розташованих у 17 районах столичної Ліми. На кожній станції збирали по три зразки, один раз на півроку. М'ясо постачалось трьома холодильниками та двома камерами і було готове до продажу населенню.

Штам E. coli ATCC 918026 використовували як позитивний контроль, а E. coli ATCC 25922 - як негативний контроль.

Результати

Із 195 зразків свіжого яловичого фаршу 87,18% (170) були позитивними щодо кишкової палички, а 77,95% (152) мали кількість, що дорівнює або перевищує 50 MPN/г.

Із загальної кількості зразків 1,54% (03) представляли E. coli O157: H7; Їх називали штами CE 001, CE 002 та CE 003; три ізоляти були отримані із зразків, зібраних на ринках у районах Комас, Ла-Вікторія та Сан-Хуан-де-Мірафлорес, відповідно. Три штами мали колонії негативний сорбіт, негативну глюкориназу, позитивну рухливість, позитивний індол, негативний сірководень, негативний цитрат, позитивну лізиндекарбоксилазу та ферментацію глюкози та лактози. 2,05% (04) виявили E. coli O157, а не H7.

З E. coli O157: штам H7 CE 001 був stx1 +/stx2 +/eaeA -/ентерогемолізин -; штамом EC 002 був stx1 +/stx2 -/eaeA +/ентерогемолізин -, а штамом CE 003 був stx1 -/stx2 -/eaeA -/ентерогемолізин +. З-поміж O157 E. coli штамів, що не є H7, всі були негативними щодо факторів вірулентності.

У мультиплексній ПЛР у режимі реального часу наявність stx1 та eaeA було засвідчено у штамі CE 002 через утворення піків флуоресценції, генерованих генами stx1 та eaeA; перший пік належить eaeA, а другий stx1 (рис. 1). У випадку штаму CE 001 було засвідчено пік, породжений геном stx1, та другий пік флуоресценції, породжений геном stx2 (рис. 2). У штамі CE 003 навколо культури спостерігався ореол гемолізу (рис. 3).

Обговорення

У Лімі, Мора та ін. (2007) виявили високу поширеність (22,55%) у 102 зразках яловичого фаршу, всі проаналізовані штами (10) дали 03 фактори вірулентності; Рівера та ін. (2012) виявили серотип E. coli O157 у 1,75% (02) із 114 зразків бичачого калу, один із штамів продукував stx1 та eaeA, а інший лише stx1. Вибірка Мора та ін. відбувся в період з жовтня 2000 р. по лютий 2001 р., що відбувся у Rivera et al. між листопадом і груднем 2010 р. та результатами нашого дослідження між червнем 2009 р. і січнем 2011 р. За останні 15 років спалаху хвороби в Лімі не було, тому можна припустити, що це був тимчасовий поширений серотип.

Дякую

Цитована література

Barletta F., T. Ochoa, L. Ecker L, et al. 2009. Валідація аналізу пулу з п’ятьма колоніями за допомогою мультиплексної ПЛР у реальному часі для виявлення діареогенної кишкової палички. J Clin Microbiol. 47 (6): 1915-1917. DOI: 10.1128/JCM.00608-09 [Посилання]

Баррет Дж., Х. Ліор, Дж. Грін та ін. 1994. Лабораторне дослідження багатошарової спалаху кишкової палички, що передається харчовими продуктами O157: H7. Дж. Клін. Мікробіол. 32: 3013-3017. [Посилання]

Blanco J. 2012. Ентероагрегативна кишкова паличка O104: H4-ST678, що продукує Stx2a. Зараз мікробіологічна діагностика цього та інших серотипів STEC/VTEC! Хворий Infecc. Мікробіол. Клін. 30 (2): 84-89. DOI: 10.1016/j.eimc.2011.09.008 [Посилання]

Бланко Дж., М. Бланко, Ж.Є. Бланко та ін. 2003. Веротоксин, що продукує кишкову паличку (VTEC) в Іспанії: Поширеність, серотипи та гени вірулентності O157: H7 та не-O157 VTEC у жуйних, сирої яловичої продукції та інфекціях людини. Exp. Biol. Med. 228: 345-351. [Посилання]

Blanco J.E., M. Blanco, A. Mora et al. 1996. Виявлення ентерогеморагічної кишкової палички O157: H7 у яловичому фарші за допомогою імуномагнітного розділення. Мікроб. SEM 12: 385-394. [Посилання]

Бланко М., Н.Л. Падала, А. Крюгер та ін. 2004. Гени вірулентності та типи інтиміну Escherichia coli, що продукує шіга-токсин, виділені з великої рогатої худоби та яловичої продукції в Аргентині. Мікробіол. 7: 269-276. [Посилання]

Браво В.Дж.Б. & ФУНТ. Вільялобос де Бастардо. 2002. Ентерогеморагічна кишкова паличка в м’ясних продуктах, комерціалізованих на муніципальному ринку Куманґ, Венесуела. Преподобний Соц. Мікробіол. 22 (2): 119-121. [Посилання]

Cicuta M.E., N. Deza, W.R. Ройбон та ін. 2006. Виявлення кишкової палички, що продукує шигу, у великої рогатої худоби та яловичого фаршу з міста Коррієнтес, Аргентина. Преподобний ветеринар. 17 (1): 20-25. [Посилання]

Кларк В.Ф., Дж. Сонтроп, Дж. Дж. Macnab та ін. 2010. Довгостроковий ризик гіпертонії, ниркової недостатності та серцево-судинних захворювань після гастроентериту від питної води, зараженої кишковою паличкою O157: H7: перспективне когортне дослідження. BMJ 341: c6020: 1-09. DOI: 10.1136/bmj.c6020 [Посилання]

Copes J., K. Pellicer, G. Del Hoyo et al. 2009. Перша ізоляція кишкової палички O157: H7 з гамбургерів у Парагваї. Ветеринарний Analecta 29 (1): 11-14. [Посилання]

Донненберг М., С. Ціпорі, М. Мак Кі та ін. 1993. Роль гена eae ентерогеморагічної кишкової палички в інтимному прикріпленні in vitro та на свинячій моделі. Дж. Клін. Інвестуйте. 92: 1418-1424. [Посилання]

Дорн Р.Ц. 1995. Escherichia coli O157: H7. ЯВМА 206: 1583-1585. [Посилання]

Feldsine P.T., D.E. Kerr, S.C. Leung та співавт. 2002. Тест на візуальний імунопреципітат Вісім годин Метод виявлення ентерогеморагічної кишкової палички O157: H7 у сирій та вареній яловичині (модифікація офіційного методу AOAC 996.09): Спільне дослідження. Журнал AOAC International 85 (5): 1029-1036. [Посилання]

Фен П., М. Дей, А. Абе та ін. 2001. Ізогенні штами кишкової палички O157: H7, які втратили як 1, так і 2 гени Shiga. Клін. Діагностика. Іммунол. 8 (4): 711-717. [Посилання]

Френцен П.Д., А.Дрейк і Ф.Дж. Кут. 2005. Економічна вартість хвороби через інфекції кишкової палички O157 у Сполучених Штатах. J. Food Prot.68: 2623-2630. [Посилання]

Guion C.E., T. Ochoa, C.M. Уокер та ін. 2008. Виявлення діареогенної кишкової палички за допомогою аналізу кривої плавлення та мультиплексної ПЛР у реальному часі. Дж. Клін. Мікробіол. 46 (5): 1752-1757. DOI: 10.1128/JCM.02341-07 [Посилання]

Huapaya B., J. Huguet, v. Суарес та ін. 2001. Перше виділення ентерогеморагічної кишкової палички O157: H7 у Перу. Преподобний Med. Exp. 18 (1-2): 38-39. [Посилання]

Huguet J., B. Huapaya & E. Salazar. 2002. Визначення факторів вірулентності, пов'язаних з ентерогеморагічною кишковою паличкою у перуанських штамів, виділених між 1999 ? 2001. Rev. Peru Med. Exp. Public Health 19 (2): 63-67. [Посилання]

ICMSF (Міжнародна комісія з мікробіологічних специфікацій харчових продуктів) 1996. Кишково-кишкова кишкова паличка. У мікроорганізмах у продуктах харчування 5. Характеристика збудників мікробіолів, Гайтерсбург. MD: Aspen Publishers, Inc. Pp: 126-140. [Посилання]

Karch H., J. Heesemann, R. Laufs et al. 1987. Плазміда ентерогеморагічної кишкової палички O157: H7 необхідна для експресії нового фімбріального антигену та для адгезії до клітин епітелію. Заразити. Імунний. 55: 455-469. [Посилання]

Кармалі М.А. 1989. Інфекція кишковою паличкою, що продукує вероцитоксин. Дж. Клін. Мікробіол. 2 (1): 15-38. [Посилання]

Луксовсов Дж., Б. Абрахам і С. Купковков. 2004. Поява кишкової палички O157 у сировині та продуктах харчування в Чехії. J. Vet. Med. B 51: 77-81. DOI: 10.1111/j.1439-0450.2004.00727.x [Посилання]

Marzocca M.A., P.L. Маруччі, М.Г. Сіка та ін. 2006. Виявлення кишкової палички O157: H7 у свіжому яловичому фарсі та заморожених гамбургерах. Преподобний Аргент. Мікробіол. 38: 38-40. [Посилання]

Мюттар С., Дж. Пулідо, Е. Вюскес та ін. 1997. Ентеропатогенні штами кишкової палички, виділені в Колумбії від дітей з діареєю: серотипи та резистентність до наркотиків. Дослідження медичної науки 25 (2): 615-617. [Посилання]

Мід П.С. & P.M. Гріффін. 1998. Escherichia coli O157: H7. Lancet 352: 12071212. DOI: 10.1016/S0140-6736 (98) 01267-7 [Посилання]

Мічімо Х., К. Аракакі, С. Мінамі та ін. 1999. Масовий спалах кишкової палички O157: інфекція H7 у школярів міста Сакай, Японія, пов’язана із споживанням паростків білої редьки. Am. J. Epidemiol. 150: 787-796. [Посилання]

Мора А., С.Л. Леон, М.Бланко, Дж. Бланко, К. Лопес, Г. Дабі, А. Ечейта, Е.А. Гонцєлес і Дж. Бланко. 2007. Типи фагів, гени вірулентності та профілі ПФГЕ токсину Шиги, що продукує Escherichia coli O157: H7, виділений із сирої яловичини, м’якого сиру та овочів у Лімі (Перу). Міжнародний журнал харчової мікробіології 114 (2): 204-210. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2006.09.009. [Посилання]

Морато Бергаміні А.М., М.Сімоес, К.Іріно та ін. 2007. Поширеність та характеристики штамів Escherichia coli (STEC), що продукують шіг, у яловичому фарші в Сан-Паулу, Бразилія Браз. Дж. Мікробіол. 38 (3): 553-556. DOI: 10.1590/S1517-83822007000300032 [Посилання]

Muniesa M. & J. Jofre. 2004. Ряс стічних вод бактеріофагів, що заражають кишкову паличку O157: H7. Методи Мол. Biol. 268: 79-88. DOI: 10.1385/1-59259-766-1: 079 [Посилання]

Натаро Дж. & Karper J.B. 1998. Діарегенна кишкова паличка. Клін. Мікробіол. Обр.11: 142-201. [Посилання]

ОВ’браєн А.Д. & R.K. Роги. 1987. Шига та шіга-подібні токсини. Мікробіол. Одкр.51: 206-220. [Посилання]

Орсков Ф., І. Орсков та Й.А. Вільяр. 1987. Велика рогата худоба як резервуар продукують веротоксин кишкової палички O157: H7. Lancet: 276. [Посилання]

Філліпс А.Д., С.Навапур, С.Хікс та ін. 2000. Ентерогеморагічна кишкова паличка O157: H7 націлює плями Пейєра у людей і викликає прикріплюючі/стираючі ураження як кишечника людини, так і великої рогатої худоби. Кишка 47: 377-381. DOI: 10.1136/gut.47.3.377 [Посилання]

П'єдрахіта Д., Т. Меркес та С. Маттар. 2001. Виявлення кишкової палички O157: H7 у популяціях свиней, туш великої рогатої худоби та м’ясних продуктів у департаменті Кордоби. МВЗ-КОРДОБА 6 (2): 119-126. [Посилання]

RM. N °. 591-2008-МІНСА. Затвердити: «Санітарний стандарт, що встановлює мікробіологічні критерії санітарної якості та безпеки харчових продуктів та напоїв для споживання людиною» EL EL Peruano, Legal Norms, 29 серпня 2008 р .: 378827.

Райлі Л.В., Р.С. Реміс, С.Д. Хельгерсон та співавт. 1983. Геморагічний коліт, пов’язаний з рідкісним серотипом кишкової палички. Н. Енгл. J. Med. 308: 681-685. DOI: 10.1056/NEJM198303243081203 [Посилання]

Рівас М., С. Соса-Естані, Дж. Рангель та ін. 2008. Фактори ризику зараження спорадичними шігами токсинами Escherichia coli у дітей, Аргентина. Поява Заразити. Дис. 14 (5): 763-771. DOI: 10.3201/eid1405.071050 [Посилання]

Рівера Ф.П., Е. Сотело, І. Моралес та співавт. 2012. Коротке повідомлення: Виявлення токсину шиги, що продукує кишкову паличку (STEC), у здорової худоби та свиней у Лімі-Перу. J. Dairy Sci. 95: 1166-1169. doi: 10.3168/jds.2011-4662 [Посилання]

Ролдґан М.Л., І.Кінен, Дж. Отеро та ін. 2007. Виділення, характеристика та підтипи Escherichia coli O157: штами H7 із м’ясних продуктів та молока. Преподобний Аргент. Мікробіол. 39: 113-119. [Посилання]

Schmidt H., L. Beutin & H. Karch. 1995. Молекулярний аналіз кодованого плазмідою гемолізу Escherichia coli O157: штам H7 933. Інфекція. Імунний. 63: 1055-1063. [Посилання]

Сіглер Р.Л. 1995. Гемолітично-уремічний синдром. Педіатр. Клін. Північна Ам. 42: 1505-1529. [Посилання]

Strockbine N.A., L.R.M. Марк, Дж. Ньюленд та ін. 1986. Два фаги, що перетворюють токсини, із Escherichia coli O157: штам 933 H7, кодований антигенно різними токсинами з подібною біологічною активністю. Заразити. Імунний. 53: 135-140. [Посилання]

США/FIS. Безпека харчових продуктів США. 2005. Відділ лабораторії контролю якості/контролю якості. Лабораторний довідник FSIS Порядок використання кишкової палички O157: H7 та O157: NM (не рухомий) Скринінгові тести. [Посилання]

Варела Г., І. Кинен, П. Гадея та ін. 2008. Виявлення та характеристика токсину шіги, що продукує E. coli, з клінічних випадків та продуктів харчування в Уругваї. Преподобний Аргент. Мікробіол. 40: 93-10. [Посилання]

Ветцель А.Н. & J.T. Ле Жон. 2007. Виділення кишкової палички O157: штами H7, які не продукують токсин Шиги з бичачих, пташиних та екологічних джерел. Листи в Appl. Мікробіол. 45: 504-507. DOI: 10.1111/j.1472-765X.2007.02228.x [Посилання]

ВООЗ (Всесвітня організація охорони здоров'я). 1997. Консультація з питань профілактики та контролю ентерогеморагагічних (EHEC) інфекцій. В: Всесвітня організація охорони здоров’я. Матеріали доповіді ВООЗ. Консультація, Женева, Швейцарія. [Посилання]