Гемоліз є найпоширенішим джерелом попередніх аналітичних помилок, на нього припадає майже 60% непридатності зразка. Гемоліз може відбуватися як in vivo, так і in vitro, але рівень гемолізу in vivo серед усіх гемолізованих зразків становить лише 3,2%. Тому гемоліз in vitro, який може бути спричинений помилками у збірці проб або обробці проб, має особливе значення. Зразки, не отримані з належною обережністю, що зберігаються та/або транспортуються, схильні до гемолізу.
Більшість зразків, що гемолізуються, відхиляються ще на переданалітичній фазі, якщо втручання з боку сироватки вже видно, навіть якщо гемоліз не впливає на запитуваний тест. Однак слід зазначити, що, як повідомляється, візуальна оцінка сироваткового гемолізу показує незначну згоду зі ступенем втручання гемоглобіну. І навпаки, клітинні компоненти можуть потрапляти в сироватку або плазму, навіть якщо немає видимих ознак гемолізу. Таким чином, видимий гемоліз є загальним джерелом помилкових результатів, які слід визнати перед процедурою тестування. Зі збільшенням кількості запитуваних лабораторних досліджень та зразків, а також прискоренням процедур, преаналітичне розпізнавання гемолізованих зразків та ідентифікація аналітованих речовин, що втручаються, стає все більш важливим.
Визнаючи, що розпізнавання потенційних помилок є важливим для правильної інтерпретації результатів, автори цієї статті проаналізували, як гемоліз на різних рівнях впливає на загальновживані біохімічні тести.
Матеріал і методи
Для аналізу ефекту in vitro гемолізу венозну кров брали у 16 добровольців у 5 різних пробірках для відбору гепарину. Чотири зразки швидко брали у шприц об'ємом 5 мл 2, 4, 6 та 8 разів, щоб отримати механічні травми зразків легкої, помірної та високої концентрації гемолізу. Зразки центрифугували при 1000 об/хв протягом 15 хв. Ця форма лізису клітин була обрана, оскільки фізична сила, що діє на поршень шприца, є аналогічною тій, яка часто впливає на еритроцити під час відбору проб.
Після визначення концентрації вільного гемоглобіну в гемолізованих зразках зразки поділяли на три групи на основі отриманих значень. Вміст вільного гемоглобіну в зразках вимірювали за допомогою спектрофотометрії. Загальну концентрацію гемоглобіну в плазмі розраховували за формулою: Hb = 154,7 × (A425) - 130,7 × (A450) - 123,9 × (A700).
Згодом було визначено три категорії на основі концентрації гемоглобіну:
I група (0−0,1 г/л) - не гемолізований (n = 15);
II. група (0,10−0,50 г/л) - слабо гемолізований (n = 12),
III. група (0,51–1,00 г/л) - слабо гемолізований (n = 10);
ARC. група (1,01–2,50 г/л) - помірно гемолізований (n = 15); і
V група (2,51-4,5 г/л) - сильно гемолізований (n = 12).
Аналіз результатів використовувався для оцінки того, чи суттєво впливав на концентрацію аналіту легкий, помірний, помірний або важкий гемоліз. У кожній групі вимірювали такі параметри: альбумін, лужна фосфатаза (АП), аланінамінотрансфераза (АЛТ), альфа-амілаза, аспартатамінотрансфераза (АСТ), загальний білірубін, кальцій, натрій, калій, хлорид, загальний холестерин (ТК, загальний холестерин), креатинкіназа (CK), креатинін, гамма-глутамілтрансфераза (GGT), глюкоза, холестерин ліпопротеїдів високої щільності (HDL-C), залізо (Fe), лактатдегідрогеназа (LD), магній, неорганічний фосфат, загальний білок, тригліцериди (TG), ненасичена здатність зв’язувати залізо (UIBC), сечовина та сечова кислота.