реферат

Мета: Для характеристики вмісту каротиноїдів у деяких компонентах середземноморської дієти, яку зазвичай вживають грецькі мігранти до Мельбурна, групи населення, яка підтримує традиційний раціон харчування та демонструє відносно високі концентрації циркулюючих каротиноїдів та низьку смертність від серцево-судинних захворювань.

Дизайн та зразки: Опортуністичні колекції дикого (саранового осоту, амаранту, шинки та кульбаби, заготовленого з доріг та садів) та наявних у продажу (цикорій, ендівія) зелених листових овочів та інжиру в сезон. Їжа була відібрана на підставі того, що вони зазвичай споживаються грецькими мігрантами, але не англо-кельтськими особами і раніше не були добре охарактеризовані з точки зору їх вмісту каротиноїдів. Оливкова олія екстра вірджин, холодного віджиму та оливкова олія "надлегка" були отримані з комерційних джерел. Зразки екстрагували тетрагідрофураном (або хлороформ: метанол для оливкової олії), а вміст каротиноїдів визначали кількісно за допомогою ВЕРХ з УФ-детектуванням. Проаналізовано від двох до шести зразків зелені та інжиру. Споживання їжі оцінювали за допомогою опитувальника частоти їжі.

Результати: Дикі зелені овочі містили високі концентрації лютеїну (свиноматка> амарант> портулак> кульбаба) та β-каротин (свиняча осот> амарант> портулак = кульбаба). Розторопша плямиста та амарант містять лютеїн (15 та 13 мг/100 г) та β-каротин (3, 3 та 4,0 мг/100 г) у концентраціях, вищих, ніж ті, що спостерігаються у наявних у продажу видів цикорію та ендівії. Фіг. Вони містили всі основні каротиноїди, що з’являються в плазмі, хоча і в низьких концентраціях. Оливкова олія холодного віджиму оліви містила значну кількість лютеїну та β-каротину, але більш рафінована оливкова олія "надлегкого".

Висновки: Ці компоненти традиційної середземноморської дієти сприяють підвищенню концентрації циркулюючих каротиноїдів у грецьких мігрантів порівняно з англо-кельтськими австралійцями.

Спонсорство: Це дослідження в основному фінансується Національною радою з питань охорони здоров’я та медичних досліджень в Австралії (грант № 974098). Оливкова олія екстра вірджин подарована компанією Picuba Foods, м. Маріквілл, штат Нью-Йорк, Австралія.

Дослідження семи країн показало, що серед населення Середземномор'я, особливо на Криті, спостерігається найнижчий рівень смертності від ішемічної хвороби серця (ІХС) у Європі (Keys et al, 1986). Критська дієта в 1950-х роках (Kromhout et al, 1989) часто вважається архетипною середземноморською дієтою. Цікаво, що цей період збігається з великою міграцією з Греції до Австралії. Грецькі мігранти до Мельбурна також мають відносно низьку смертність від коронарної смертності, незважаючи на високу поширеність таких факторів ризику, як ожиріння, діабет, гіпертонія та куріння (Young, 1992; Австралійське бюро статистики, 1998), і ця популяція зберегла багато аспектів традиційних Критська дієта (Kouris-Blazos et al., 1996). Вважається, що дієтичні антиоксидантні сполуки забезпечують принаймні частину захисту, пов’язаного з дієтою, багатою овочами, фруктами та оливковою олією, такою як Критська середземноморська дієта (Simopoulos & Sidossis, 2000; Visioli, 2000). Деякі епідеміологічні дослідження виявили зворотну залежність між споживанням їжі або концентрацією каротиноїдів у плазмі фруктів та овочів та частотою ІХС (Gey et al., 1993; Kohlmeier et al., 1997).

У минулому ми виявили вищі концентрації циркулюючих речовин деяких каротиноїдів та деяких неідентифікованих сполук серед грецьких мігрантів порівняно з австралійцями в Мельбурнському спільному когортному дослідженні (MCCS; Su et al., 1998). Можливо, що більша концентрація деяких з цих каротиноїдів серед грецьких мігрантів була спричинена більшим споживанням деяких компонентів середземноморської дієти, таких як дикі темно-зелені овочі, інжир, оливки, листя винограду та інші зелені листові овочі, які не є нормальними . споживається австралійцями англо-кельтського походження. Ці продукти не були добре охарактеризовані через вміст каротиноїдів. Метою цього дослідження було виділення та кількісна оцінка каротиноїдів у кількох диких овочах, інжирі та оливковій олії, які є частиною традиційної грецької дієти та можуть сприяти підвищенню рівня циркулюючого каротиноїду у грецьких мігрантів.

методи

Прийом їжі

Споживання живих та комерційно доступних зелених листових овочів, інжиру та оливкової олії у раціоні було визначено на основі опитувальника частоти їжі (Ірландія та ін., 1994) серед грецьких мігрантів та людей австралійського походження (переважно англо-кельтських) від MCCS (Giles)., 1990). MCCS - це проспективне дослідження на базі громади, яке вивчає роль харчування при хронічних захворюваннях, до якого входить велика кількість мігрантів з Південної Європи. Дані виражаються як обслуговування на людину на тиждень (або мл на тиждень для оливкової олії). "Офіціантка" з овочів визначалася як "півсклянки варених овочів або одна чашка овочевих салатів". Порція інжиру становила 140 г.

Реактиви та матеріали

Карбонат магнію, безводний сульфат натрію, бутильований гідрокситолуол (BHT) та еталонні зразки повністю транс-β-каротину, цілком транс-альфа-каротину та транс-глікоєну були придбані у Sigma-Aldrich Pty Ltd (Castle Hill, NSW) .Австралія). Лютеїн, зеаксантин та р-криптоксантин були пожертвуваннями фірми Hoffmann-LaRoche (Базель, Швейцарія). Β-Апо-8-каротин (транс) (Fluka Chemical Corp.) використовували як внутрішній стандарт. Розчинники ВЕРХ та інші реагенти отримували місцево від комерційних постачальників (Mallinkrodt, Selby-Biolab; Мельбурн, Австралія).

Сирі овочі та фрукти та оливкова олія

Дикі темно-зелені овочі (свиноматка осоту, кульбаба, амарант, портулак) збирали з доріг і садів Мельбурна протягом лютого (влітку). Джерелами були загальнодоступні для збирання рослин для споживання. Комерційні листові овочі (цикорій, ендівія) були отримані з ринку Оклі (Вікторія, Австралія). У квітні в місцевому саду збирали свіжий інжир. Всі зразки зберігали в поліетиленових пакетах і зберігали в темному холодильнику при 4 ° C до аналізу (протягом 24 годин). Зразки відбирали, як зазвичай споживають, і аналізували всю пробу. У випадку з дикорослими зеленими плодами їстівна частина містить лише листя. Оливкова олія екстра вірджин (природним холодним віджимом) постачалася компанією Picuba Foods, Marrickville, NSW (оливкова олія Minos Extra Virgin, імпортована з Греції). Оливкова олія "надзвичайно легка" була отримана з місцевого супермаркету (Bertolli "Extra Light", імпортовано з Італії компанією Bertolli Australia Pty Ltd).

Приготування та вилучення зразків їжі

Для аналізу оливкової олії змішували 1 г оливкової олії та 1 мл внутрішнього стандарту, потім карбонат магнію (0,1 г) та 10 мл хлороформ: метанол (2: 1). Розчин витримували в темряві протягом 30 хвилин, переносили у ділильну лійку і промивали водою (2 х 20 мл) для видалення водорозчинних матеріалів. Органічну фазу відокремлювали і до водної фази додавали 10 мл хлороформу: метанолу (2: 1) для подальшої екстракції. Органічні шари об'єднували, сушили і відновлювали, як описано вище.

Стандартна крива та хроматографія

Для визначення концентрації стандартних розчинів використовували УФ-видимий спектрофотометр (Hewlett-Packard). Внутрішній стандарт β-апо-8-каротинал (транс) готували з гексаном, що містить 0,01% бутильованого гідрокситолуолу (BHT), у коричневій пляшці. Для основного розчину β- та α-каротину, транс-глікоєну, лютеїну, зеаксантину та β-криптоксантину в якості розчинника використовували н-гексан (0,01% BHT). Транс-глікопен розчиняють в 1 мл дихлорметану, який потім розбавляють н-гексаном, що містить 0,01% BHT. α- і γ-токоферол розчиняли в етанолі. Стандартні криві для аналітів були сформовані на основі відношення концентрації до площі піку з внутрішнім стандартом. Розрахунок концентрацій неідентифікованих сполук проводили за допомогою стандартної кривої лютеїн/зеаксантин.

Використовувана хроматографічна система включала модуль розділення Alliance 2690, детектор фотодіодних решіток 996 та менеджер програмного забезпечення КПК Millennium Chromatography (Waters Australia, Мельбурн, Австралія); Колона Spherisorb ODS-2 (250 х 4,6 мм; Goldpak, Великобританія), тримач картриджа HP BIO та біосумісний захисний картридж (10 × 4,3 мм C18; Activon, Мельбурн, Австралія). Використовували рухому фазу ацетонітрил: метанол: хлороформ (45:45:10), що містила 0,05% ацетату амонію в метанолі та 0,1% триетиламіну в ацетонітрилі зі швидкістю потоку 1,0 мл/хв. Час роботи становило 24 хв. Окремі каротиноїди (лютеїн, зеаксантин, β-криптоксантин, лікопін, β- та α-каротин) контролювали при 450 нм. Коефіцієнт варіації протягом дня становив 8, 7, 7, 8, 10, 3, 8, 4 та 6,9% для лютеїну, криптоксантину, лікопену, α-каротину та β-каротину. Межа виявлення, що визначається як висота піку, що втричі перевищує середній фоновий шум (Shah et al., 1991), становила менше 1 нг (що відповідає концентрації їжі приблизно 0,4 мкг/100 г) для всіх аналітів.

результат

Прийом їжі

У таблиці 1 показано споживання зелених листових овочів, інжиру та оливкової олії у продуктах грецьких та австралійських сімей, взяті з MCCS. Зелені листові овочі (включаючи дикі та комерційно доступні види, проаналізовані тут) споживаються приблизно вдвічі частіше серед народжень у Греції порівняно з народженнями в Австралії. Жоден з опитаних австралійців не повідомив, що їв інжир. Споживання оливкової олії було більш ніж утричі вищим, ніж у людей, народжених в Австралії.

Стіл в натуральну величину

Виявлення та кількісне визначення каротиноїдів та токоферолів у зелених овочах, інжирі та оливковій олії

На рисунку 1 показані хроматографічні профілі дикорослих зелених овочів (свиноматок, амарант, портулак і кульбаба). Основними виявленими піками були лютеїн та β-каротин. Хроматограми комерційно доступних видів (цикорій та ендівія) були якісно подібними (не показано). У диких темно-зелених овочах були високі концентрації лютеїну та β-каротину (табл. 2). Розторопша плямиста та амарант мали вищі рівні лютеїну, ніж зразки цикорію та ендівії. Портулак і кульбаба також містили значну кількість лютеїну. Каротиноїди, присутні в інжирі, включали лютеїн, криптоксантин, лікопен, β-каротин і α-каротин. Найбільш поширеним каротиноїдом був лікопін (табл. 2), а потім лютеїн та β-каротин. Оливкова олія екстра вірджин містить лютеїн та β-каротин. Інших каротиноїдів виявити не вдалося. Надзвичайно легка оливкова олія не містила виявлених рівнів каротиноїдів, але мала вищий вміст α-токоферолу, ніж оливкова олія первинного віджиму.

ідентифікація

Хроматографічні профілі дикорослих зелених овочів. є внутрішнім стандартом; U1 - U9, невстановлені сполуки 1–9.

Повнорозмірне зображення

Стіл в натуральну величину

Характеристика та кількісна оцінка неідентифікованих сполук

Кілька неідентифікованих сполук були присутніми в зелених листових овочах. Основні піки, загальні для всіх досліджених зелених листових овочів, елюювались через 4, 3, 4, 8 та 11 хв, а четвертий - через 15 хв для всіх видів (включаючи цикорій та ендівію), крім портулаку (рис. 1). Портулак показав основний пік через 18 хвилин, який не з’являвся у інших видів (рисунок 1). На малюнку 2 показані УФ-видимі спектри в ацетонітрил: метанол: хлороформ (45:45:10) основних неідентифікованих піків. Ми не спостерігали жодного з цих сполук у зразках плазми, в тому числі у понад 200 греків, що народились у Греції (Су та ін, неопубліковані дані). У таблиці 3 наведені максимуми поглинання та концентрації неідентифікованих сполук у диких та зелених листових овочах. З'єднання U5 містилось у значних кількостях у всіх видів, але не у форсулі. Невідомі сполуки, присутні в зелених листових овочах, не виявились у помітних кількостях в інжирі чи оливковій олії.

Спектри поглинання основних неідентифікованих піків у диких овочах.

Повнорозмірне зображення

Стіл в натуральну величину

обговорення

Ми виявили оливкову олію першого віджиму (холодного віджиму), яка містить лютеїн та β-каротин, а також значну кількість α- та γ-токоферолу. Більш рафінована оливкова олія "надлегкої легкості" не містила каротиноїдів у кількостях, виявлених нашим методом. Лютеїн (0,3 мг/100 мл) та β-каротин (0,07 мг/100 мл) були ідентифіковані в оливковій олії першого віджиму за допомогою колориметричного методу (Ranalli et al, 1999b). Ці результати були подібними для лютеїну, але вміст β-каротину був нижчим, ніж ми виявили. Це може бути реальною різницею внаслідок різноманітності оливок чи сезонних/кліматичних ефектів, або це може бути артефактом через методологічні відмінності. Інші дослідження виявили діапазон вмісту α-токоферолу, ідентичний тому, який був виявлений у цьому дослідженні (García et al., 1996; Gutiérrez et al., 1999; Ranalli et al., 1999a).

Обмеженням цього дослідження є мала кількість аналізованих зразків їжі та один час відбору проб. Що стосується часу збору, то ці продукти зазвичай споживаються лише в певний час року, коли вони в сезон, особливо для амаранту, шинки та інжиру, і зразки, використані в цьому дослідженні, були зібрані на той час. Таким чином, виміряний вміст каротиноїдів є важливим для тих, хто зазвичай споживається. Для того, щоб правильно оцінити біологічну мінливість вмісту каротиноїдів у цих продуктах харчування, необхідна систематична стратегія відбору проб, яка включає цілий ряд географічних та (мікро) кліматичних умов, але це виходило за рамки цього дослідження. Каротиноїдний профіль овочів набагато складніший, ніж виявлено раніше, причому частка та форми зустрічаються, оскільки різні каротиноїди значно різняться залежно від умов росту, зберігання та переробки (Nyambaka & Ryley, 1995). Примітно, що дикорослі зелені овочі, описані в цьому документі, зазвичай збирають і споживають протягом декількох годин. Потрібні подальші детальні дослідження цих аспектів.

Нарешті, ми виявили високі концентрації лютеїну та β-каротину в диких овочах, які зазвичай вживають як частину традиційної середземноморської дієти. Фігурки та оливкова олія першого віджиму також є важливими джерелами каротиноїдів у такій дієті.

Дякую

Ця робота фінансувалася в основному за рахунок гранту Національної ради з охорони здоров’я та медичних досліджень Австралії (№ 974098). Автори з вдячністю цінують Dr. Рейчел Стоуні та допомога, яку надали Мері Каймакаміс та Меліса Камерон.