Текст завершено

(1) UNIVERSIDAD AUTÓNOMA AGRARIA "ANTONIO NARRO" ПІДДІЛ НАУКОВОГО ДІЯЛЬНОГО ВІДДІЛУ ТВАРИН ТА ТЕХНОЛОГІЙ. Мікробіологічне дослідження рідини жуйних з голштинської худоби, що харчується, збагачена продуктами пивоварної промисловості (шпаклівкою та дріжджами). Автор: LIDIA GUADALUPE VALDEZ SEPÚLVEDA. ТЕЗИ представлені як часткова вимога для здобуття звання: ІНЖЕНЕР У ХАРЧОВІЙ НАУКІ ТЕХНОЛОГІЇ. Буенавіста, Сальтільйо, Коауїла, березень 2010 р.

мікробіологічне

(3) Ця дослідницька робота була розроблена в рамках відданої діяльності проекту "Виділення та часткова ідентифікація бактеріальних мікроорганізмів, що містяться у зразках бичачої худоби" з кодом 02-03-0402-2378. Проект фінансувався Автономним аграрним університетом імені Антоніо Нарро в рамках конкурсу на спеціальні дослідницькі проекти. Оцінювачами цього дослідження були: д-р Ana Verónica Чарльз Родрігес д-р Хуан Енріке Маурісіо Бенавідес д-р Антоніо Франциско Агілера Карбо д-р Хесус Мануель Фуентес Родрігес LCN. Лаура Марісела Лара Лопес. i.

(4) ... Тому що я бачу в кінці мого нерівного шляху, що я був архітектором своєї власної долі; що якщо я витягував з речей мед або жовч, це було тому, що я клав у них жовч або смачний мед: коли я садив кущі троянд, я завжди збирав троянди ... Коханий Нерво ii.

(6) ПОСВІЩЕННЯ З любов’ю та прихильністю до моїх батьків: пані Лаура Мінерва Сепульведа Мартінес Пан Фаустіно Вальдес Торрес Дякую, що заохотили мене завершити свої мрії, мені завжди пощастило мати вашу любов, розуміння та приклад. В усі часи мого життя вони були учасниками та співавторами моїх цілей та цілей. Щиро дякую, що дали мені можливість розпочати цей професійний шлях. Досягнута мета - ваша, а сила, яка допомогла мені її досягти, - ваша підтримка. Моїм сестрам: Лора Джудіт та Лусеро Ванесса, дякую вам за те, що ви мої найкращі друзі, за вашу компанію та підтримку. Дякую за мій хлопець Ісмаель Менера Лопес. ваша моральна підтримка e. безумовно, за те, що ти мене заохочуєш і викликаєш посмішку, дякую тобі, що подарував мені свою любов. Моїм дідусям і бабусям Лілі (†), Міро (†), Бальде (†) та Лупіті, я сподіваюся, вони пишаються мною. До Пбро. Луїс Родрігес дель Ріо, дякую за ваші цінні поради та духовну підтримку на початку моєї кар’єри та протягом усього мого життя. Iv.

(7) ЗАГАЛЬНИЙ ПОКАЗНИК Стор. 2.1.3 Мікробний метаболізм рубця 2.1.3.1 Деградація вуглеводів у рубці 2.2 Побічні продукти пивоварної промисловості у кормах для худоби 2.2.1 Шпаклівка 2.2.2 Дріжджі 2.2.2.1 Ріст, бродіння та виробничий процес 2.2.3 Saccharomyces cerevisiae 2.2. 3.1 Активний 2.2.3.2 Неактивний 2.2.3.3 Збагачений 2.2.4 Вплив додавання шпаклівки та дріжджів при бродінні жуйних тварин 2.3 Целюлазний фермент 2.3.1 Загальні риси ферментів 2.3.1.1 Специфічність ферментів 2.3.1.2 Специфічність субстрату 2.3.1.3 Вплив рН на ферменти 2.3.1.4 Вплив температури на ферменти 2.3.2 Целюлоза 2.3.2.1 Розподіл та отримання. 1 2 2 3 4 4 4 6 6 6 7 7 9 10 11 11 14 15 16 17 19 20 20 21 21 22 22 23 23 23 23 24 25.

(8) 2.3.2.2 Застосування целюлози 2.3.2.3 Гідроліз целюлози 2.3.2.4 Мікроорганізми, що продукують целюлазу 3. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ 3.1 Кондиціонування та отримання гольштейнської худоби. 25 26 27 29. рідина жуйних. 29. 3.2 Виділення прокаріотів у поживному агарі. 30. 3.3 Виділення прокаріотів на агарі Шеадлера. 31. 3.4 Очищення ізольованих мікроорганізмів. 31. 3.5 Ідентифікація мікробного обміну. 32. 3.5.1 Цитрат Сіммонса. 33. 3.5.2 Агар MacConkey. 33. 3.6 Вироблення целюлази 3.6.1 Аналіз (скринінг). 33 33. 3.6.2 Крива росту в рідкому середовищі в тіогліколяті натрію. 34. 3.6.3 Крива росту в конкретному рідкому середовищі для отримання целюлази. 34. 3.6.4 Визначення позаклітинного білка методом Біуре. 35. 3.6.5 Визначення відновлюючих цукрів (Somogy-Nelson) 36 4. РЕЗУЛЬТАТИ ТА ОБГОВОРЕННЯ 5. ВИСНОВКИ 6. БІБЛІОГРАФСЬКА ЛІТЕРАТУРА 7. ДОДАТКИ. 39 69 71 78.

(9) ПОКАЗНИК ТАБЛИЦ Сторінка Таблиця 1. Роди та види бактерій за їх спорідненістю до типу. субстрат у комплексі сітчасто-рубця. 9. Таблиця 2. Роди найпростіших жуйних із здатністю розкладати субстрати Таблиця 3. Хімічний склад дріжджів. 10 пива. 16. Таблиця 4. Ферменти, що беруть участь у ферментативному гідролізі целюлози. 27. Таблиця 5. Раціон молочної худоби, що годується шпаклівкою та дріжджами. 30. Таблиця 6. Хімічний склад конкретного твердого середовища для скринінгу деструкції целюлози. 34. Таблиця 7. Хімічний склад конкретного рідкого середовища для отримання целюлази. 35. Таблиця 8. Підготовка зразків для кількісного визначення загальних білків методом Біуре. 36. Таблиця 9. Макроскопічна морфологія мікроорганізмів, виділених на поживному агарі. 41. Таблиця 10. Макро- та мікроскопічна морфологія мікроорганізмів, виділених на агарі Шедлера. 46. ​​Таблиця 11. Результати біохімічних випробувань штамів. 57.

(16) Мікробіологічне дослідження рідини жуйних з голштинської худоби, що харчується, збагачена продуктами пивоварної промисловості (шпаклівка та дріжджі). 8. Використовуйте бактеріальний мікроорганізм для виробництва ферменту целюлази, що представляє промисловий інтерес, за допомогою конструкції індуктивного поживного середовища. 9. Визначення та кількісна оцінка целюлолітичної активності за допомогою спектрофотометричних методів. Вальдес-Сепульведа, 2010. 5.

(18) Мікробіологічне дослідження рідини жуйних з голштинської худоби, що харчується, збагачена продуктами пивоварної промисловості (шпаклівка та дріжджі). зростання цього ж, утворюючи кількість протоплазми, еквівалентну 10% від загальної кількості рідини в рубці (Warner, 1962) . 2.1.2 Мікробна популяція Мікробна популяція в рубці мінлива, з переважаючими бактеріями та миготливими найпростішими, але може з'явитися значна кількість дріжджів. Загалом і завдяки умовам, що склалися в рубці, більшість мікроорганізмів є анаеробними або факультативними анаеробами. Одними з найважливіших родів бактерій для здатності розщеплювати основні вуглеводи (вуглеводи) в їжі є: бактеріоїди, румінококи, сукциноми, деякі клостридії, целобактерії та бутівібріо (Hungate, 1966). 1.1.2.1 Бактерії Бактерії - це Найпоширеніші мікроорганізми в комплексі сітківки-рубця класифікуються за їх формою (фіг. 1) або спорідненістю до субстрату. Коки. Бацили Спірілос. Рисунок 1. Морфологічна класифікація бактерій у комплексі сітківки-рубця (Джерело: Rodríguez and Valencia, 2008) . Вальдес-Сепульведа, 2010. 7.

(21) Мікробіологічне дослідження рідини жуйних з голштинської худоби, що харчується, збагачена продуктами пивоварної промисловості (шпаклівка та дріжджі). Таблиця 2. Роди найпростіших жуйних із здатністю розкладати целюлолітичні субстрати. Амілолітики. Протеолітики. Поліпластрон Еудіплодініум Епідіній. Ентодіній. Ентодініум Евдіплодіній. (Джерело: Rodríguez and Valencia, 2008) . Найпоширеніші найпростіші в рубці належать до родів: Isotriquia, Dasitriquia, Diplodinio та Entondinio (Hungate, 1966). У молодих жуйних також зустрічаються джгутикові найпростіші (Eadie, 1962), Monocercomonas, Calimastix; Chilomastix, Tetrattricomonas та ін. як ті, що представлені на малюнку 2 (Hungate, 1966) . Рисунок 2. Ілюстрації найпростіших, що населяють сітчастий комплекс (Джерело: Rodríguez and Valencia, 2008) . 2.1.2.3 Гриби Мікрофлора жуйних також містить мікроскопічні речовини, які допомагають травленню їжі. Вони класифікуються в межах типу Chytridomicota королівства Fungae (Родрігес та Валенсія, 2008). Гриби, що знаходяться в рубці, мають здатність ферментувати полісахариди (целюлозу), підрахувавши, що понад 8% мікробної біомаси рубця складається з них (Nava and Díaz, 2001) . Valdez-Sepúlveda, 2010. 10.

(24) Мікробіологічне дослідження рідини жуйних з голштинської худоби, що харчується, збагачена продуктами пивоварної промисловості (шпаклівка та дріжджі). Рисунок 3. Шляхи метаболізму вуглеводів у рубці (Джерело: Grudsky and Arias, 1983). Здатність мікроорганізму жуйних ферментувати певний вуглевод залежить від присутності ферменту, необхідного для використання цього вуглеводу. З різних видів бактерій у рубці виділено численні ферменти, серед них геміцелюлази, целюлази, фосфорилази. амілази,. ізомальтодекстринази,. ізомальтази,. і т. д. Вони існують. α-галактозидази, деякі. ферменти. сахарази, гідролітичні. Доступні позаклітинні клітини, які здійснюють свою дію на певній відстані від бактерій, що їх продукували. Більшість бактерій використовують один або кілька типів основних харчових вуглеводів жуйних тварин як джерело енергії для їх росту. Ті, хто не вживає цих вуглеводів, використовують найпростіші вуглеводні продукти з тих або основні кінцеві продукти метаболізму (Грудський та Аріас, 1983) . Вальдес-Сепульведа, 2010. 13.

(30) Мікробіологічне дослідження рідини жуйних з голштинської худоби, що харчується, збагачена продуктами пивоварної промисловості (шпаклівка та дріжджі). додаються поживні речовини, рідина провітрюється протягом додаткових 0,5-1 години, щоб дріжджі повністю дозріли, що забезпечує більшу стабільність при зберіганні в холодильнику. Обсяг росту дріжджів на основних стадіях, описаних вище, збільшується з кожною стадією (García, 2007). 2.2.3 Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae - це дріжджі, які складають групу мікроорганізмів, найбільш тісно пов'язаних з прогресом і добробутом людства. (фігура 4); його назва походить від слова Saccharo (цукор), myces (грибок) та cerevisiae (пиво) (Hernández, 1999) . Рисунок 4. Скануюча електронно-мікроскопічна фотографія Saccharomyces cerevisiae (Джерело: Llamas, 2008) . Saccharomyces cerevisiae дріжджі, Він може мати 3 варіанти, тобто: активний, неактивний або збагачений. Valdez-Sepúlveda, 2010. 19.

(36) Мікробіологічне дослідження рідини жуйних з голштинської худоби, що харчується, збагачена продуктами пивоварної промисловості (шпаклівка та дріжджі). Рисунок 6. Фотографія структур, що містяться в рослинній тканині (Джерело: Lara, 2006). 2.3.2.1 Розподіл та виробництво Целюлоза є головним компонентом клітинних стінок рослин, де вони пов’язані з геміцелюлозами, пектином та лігніном. Цей полісахарид не атакується ферментами травної системи людського організму, і тому він разом з рештою полісахаридів, званих інертами, не засвоюється частиною харчових продуктів рослинного походження, що називається сирою клітковиною, що має велике значення як індуктор перистальтики кишечника (Belitz, 1992) . 2.3.2.2 Використання целюлози Мікрокристалічна целюлоза використовується серед інших продуктів, у калорійних продуктах, соусах для салатів, десертів та морозива. Гідратабельність і диспергованість целюлози значно покращується додаванням невеликих кількостей карбоксиметилцелюлози (Беліц, 1992).

(39) Мікробіологічне вивчення рідини жуйних з голштинської худоби, що харчується, збагачена продуктами пивоварної промисловості (шпаклівка та дріжджі) Серед цих мікроорганізмів термофільні представляють інтерес завдяки їх здатності виробляти термостабільні целюлолітичні ферменти, які, як правило, стабільні в суворих умовах, навіть при висококислих або лужних рівнях рН, а також при температурі до 90 ° C. Вальдес-Сепульведа, 2010. 28.