Матеріали і методи

вивчення

Рослинний матеріал. Відбирання зразків плодів Росії Зизифусова зизифуса (Фото 1) Це зроблено безпосередньо з дерев, розташованих у Валенсії (Іспанія).

Тест на привабливість. Випробування на привабливість проводяться з мухами, вирощеними в комах. Умови навколишнього середовища використовуються постійно; фотоперіод становить 16: 8 (світло: темно), при температурі 26 ± 1ºC і 60 ± 10% відносної вологості. Дорослі C. capitata вони харчуються сумішшю дріжджового автолізату (Sigma, Мадрид) та сахарози у співвідношенні 1: 4 (мас./мас.). Поки личинки живляться вагою суміші пшеничних висівок, пивних дріжджів, сахарози, ніпагіну, ніпасолу, води та соляної кислоти (20: 5: 1: 0,5: 0,5: 10: 0,1) за вагою.

Колонія в C. capitata його тримають у метакрилатних клітинах 30 * 30 * 20 см. (Фото 2), де мухи залишаються під час дорослої фази. Самки відкладають яйця через сітку, розташовану з одного боку клітини. Яйця потрапляють у лоток з водою, звідки їх збирають за допомогою піпетки

Пастера і висівають на штучну дієту, де вони вилуплюються і розвиваються. Коли розвиток личинок майже закінчується, а линьки закінчуються, піднос для личинок для лічинок поміщають у піднос із грунтом, щоб личинки могли вистрибнути та поховатись, щоб сформувати лялечку. Ці лялечки збираються, щоб ввести їх у нову клітку, де знову з’являться дорослі особини, які сформують нове покоління.

Клітки металеві 30х30х30см (Фото 2), з боковими стінками з металевої сітки 1мм, металевою основою та метакрилатною кришкою для полегшення доступу для чищення. З одного боку він має отвір із тканинним рукавом, що дозволяє управляти мухами.

Випробування проводяться з 2-денними та 5-денними мухами. Щоб перевірити привабливість у молодих мух (2-денні мухи) та дорослих мух (5-денні мухи), їжа виймається з клітки на 1 та 4 день відповідно.

Проводиться 3 повторення кожного тесту та контроль з водою. Для цього в кожну клітку вводять 30 самців і 30 самок; загалом ми використовуємо 4 клітини щодня, щоб проводити тест на привабливість.

Мухи залишаються на 1 годину в зоні тестування, щоб адаптуватися до нових умов навколишнього середовища та уникнути стресу, спричиненого захопленням і перенесенням комахи в тестовий район.

Потім у кожну клітку поміщають чашку Петрі; У клітку 1 поміщають змочений у воді стоматологічний бавовна або бавовняний гніт, який служитиме контролем для тестів, щоб порівняти існуючу привабливість до плодів та до аттрактанта без ароматів, але вологого. Клітки 2, 3 і 4 містять по одному шматочку стиглих плодів на кожній тарілці.

Після того, як мухи контактують з фруктами, їм дадуть півгодини звикнути до летких компонентів плодів, і з цього моменту кожні 10 хвилин підраховуватимуть усі клітини, реєструють самців і самок. розміщуються поверх плодів, а також кількість загиблих мух.

Тест на аерацію для отримання

мінливий

Для отримання летких речовин із плодів фрукти поміщають у відкритий скляний циліндр, з'єднаний одним кінцем з генератором нульового повітря, а іншим кінцем з'єднаний з термодесорбційною трубкою розміром 8 см x 0,6 см у довжину. Внутрішній діаметр заповнений з 200 мг Tenax TA як абсорбенту.

Перед аерацією відбирають зразок "нульове повітря" через балон з витратою 1 л/хв протягом 5 хв, щоб провітрювати балон і не містити залишків попередніх аналізованих зразків; обсяг складе 5 л.

Після введення плодів у циліндр поточний потік підтримується на рівні 1 л/хв протягом 3 хв. Після цього пробірку для зразків поміщають у кінець циліндра і витрату зменшують до 0,1 л/хв. Час відбору проб зберігається протягом 30 хвилин.

Цей процес повторюється одночасно 4 рази, чотири з цілими плодами і ще чотири з ламаними плодами.

Аналіз летких сполук

Сполуки, адсорбовані на пробірках Tenax, аналізували термічною десорбцією в поєднанні з газовою хроматографією та мас-спектрометрією (TD/GC/MS).

Теплову десорбцію проводили за таких умов:

- Первинна десорбція зразка: Зразок піддавали температурі 300ºC протягом 10 хвилин, проходячи через пробірку, протягом цього часу потік гелію становив 100 мл/хв. Розділ на вході становив 1,5 мл/хв, намагаючись бути якомога меншим

щоб уникнути втрати зразків.

- Зразок, взятий з пробірки проводиться в "холодна пастка" кварц, наповнений Tenax TA ®, який залишається під час первинної десорбції при температурі? 30ºC.

- Після завершення первинної десорбції, починається вторинна десорбція. Вторинна десорбція складається з десорбції "холодна пастка", який піддається сильному нагріванню, так що за кілька секунд він переходить від? 30ºC до 300ºC, з потоком гелію 21 мл/хв (потік вторинної десорбції визначається розщепленням вихідного потоку плюс потоком колони, які є попередньо встановленими при 20 та 1 мл/хв відповідно). Поділ на виході попередньо встановлений на рівні 20 мл/хв, оскільки

У попередніх випробуваннях було показано, що для вилучення цього типу речовин із пастки необхідний мінімальний потік. Після закінчення вторинної десорбції зразок автоматично вводиться в газовий хроматограф через лінію передачі, яка залишається при температурі 250 ° C.

Умови хроматографа такі: Колонка (ZB 5, 30 м x 0,25 м м) і програма температур: 40ºC/3 хв/3ºC хв-1/60ºC/0 хв/6ºC хв-1/160ºC/0 хв/12ºC хв-1/260ºC/5 хв).

Детектор маси - це електронний детектор удару, запрограмований на повне сканування від 35 до 300 AMU під час отримання хроматограми, а це в цьому випадку 40 хвилин, так що він обробляє всі речовини, які надходять у детектор в того часу.

Статистична обробка результатів

Дослідження проводили з нормованими значеннями та з логарифмічними значеннями. Це тому, що дані про залучення зазвичай не розподіляються; Спостерігаючи розподіл даних на звичайному імовірнісному папері, видно, що розподіл даних є логарифмічним, з яким застосовується перетворення X = lg (x + 1), де X - змінна притягання. З X отримують нормальний розподіл, і тоді можна застосовувати ANOVA. ANOVA надає нам статистичні дані, а No ANOVA - засоби та стандартну помилку.

Результати і обговорення

Тести на привабливість

Результати тестів на притягання були статистично вивчені з використанням нормованих значень та логарифмічних значень, оскільки дані притягання зазвичай не розподіляються, а слідують за логарифмічним розподілом. Помічено (рис. 1), що як у молодих, так і у дорослих жінок привабливість дуже значна, з дуже високим рівнем. У випадку зрілих самок (Df = 1/82, F = 49,92, P = 0,0000) рівні притягання двох атрактантів трохи вищі, ніж у молодих самок (Df = 1/82, F = 30,16, P = 0,0000), але різниця в привабливості між ними однакова в обох дослідженнях. Різниця у залученні чоловіків п'ятиденного віку (Df = 1/82, F = 11,59, P = 0,0010) більша, ніж у дводенних чоловіків (Df = 1/82, F = 5,88, P = 0,0175), але ні в тому, ні в іншому випадку немає такої привабливості, з якою можна сказати, що сполуки зизифусу є значущими для чоловіків (Рисунок 2).

При дослідженні загальної кількості залучених мух (рис. 3) ми бачимо, що існують відмінності в привабливості залежно від віку. У випадку з літніми мухами (Df = 1/82, F = 76,27, P = 0,0000) є трохи більша різниця, ніж у молодих мух (Df = 1/82, F = 25,74, P = 0,0000).

Таким чином, привабливість фруктів (зизифуса) вища у старших мух, крім того, що набагато вища у самок, ніж у самців (Таблиця 1).

Якщо порівнювати значення привабливості з віком мух, то спостерігається, що у зрілих мух привабливість більша, ніж у молодих мух. Це пов’язано з тим, що п’ятиденні мухи статевозрілі і їх більше приваблюють фруктові сполуки, ніж мухи, які ще не досягли статевої зрілості (рис. 4). Залежно від статі існує велика різниця між рівнем привабливості жінок та чоловіків, причому найбільше приваблюють жінок. Однак чоловіки не представляють значних привабливостей (Таблиця 2).

Ідентифікація летких сполук

зизифус

Летючі сполуки отримують введенням шматочків плодів, цілих або розщеплених, у скляні трубки, які прикріплені до витратомірів з одного боку, і до трубок, наповнених Tenax TA, з іншого, де леткі речовини збираються та переробляються газомасовий хроматограф. Ідентифікація проводиться шляхом порівняння мас-спектрів продуктів із віртуальною бібліотекою NIST MASS Spectral Database та перевірки зі стандартами. Виявлено 14 сполук (Таблиця 3).

У досліджених плодах, як розщеплених, так і цілих, ми виявили присутність сполук із визнаною привабливою силою Цератит capitata (H ERNÁNDEZ -S ÁNCHEZ, G та ін. 2001).

Привабливість зизифуса може бути обумовлена, серед інших факторів, летючими сполуками, що виділяються фруктами, а також концентрацією, в якій містяться ці леткі речовини. Хоча це правда, що ідентифіковано 14 сполук, необхідно врахувати існування інших, які не були ідентифіковані в цій роботі і які також можуть мати привабливу активність. Є й інші фактори, такі як колір плодів, температура та відносна вологість, вплив яких на привабливість відомий. У цьому дослідженні мінливість температури та вологості не впливала на фактори, оскільки випробування проводились у той самий час року та з дуже подібними умовами навколишнього середовища.

Висновки

У цій роботі було перевірено, що зизифус ( Ziziphus jujuba ) представляє привабливу діяльність на Ceratitis capitata.

Самки Ceratitis capitata їх більше приваблюють, ніж чоловіків. Привабливість фруктів вища у старших мух, тобто коли плодова муха знаходиться в стадії зрілості, ніж у молодій стадії, але тяжіння залежить не тільки від статі або періоду зрілості Ceratitis capitata, але також фактори навколишнього середовища, і головним чином леткі сполуки, що містяться у плодах, та їх зрілість, оскільки це, серед іншого, визначає їх склад у фітонцидах.

У зизифусі виявлено наявність летких сполук із визнаною привабливою активністю, що виправдовує привабливість мухи до цього фрукта.

Серед фітонцидів, виявлених у різних плодах, заслуговує на увагу наявність 2,4-диметилгептану, (Е) -2-гексен-1-олу та 1-гексанолу. Ці сполуки можуть бути головним чином відповідальними за привабливість, яку він представляє. Композиція цих сполук у відповідних носіях дозволить їх вивчити в лабораторії та використовувати в польових умовах.

Отримані результати запрошують нас просунутися в цьому напрямку досліджень, враховуючи майбутню придатність результатів цих робіт при розробці нових, більш ефективних та стійких стратегій боротьби зі шкідниками. Більшість з них бажано базуватись на отриманні більш ефективних атрактантів.