Rev Chil Pediatr 75 (5); 485-489, 2004
Цей розділ містить оригінальні статті
Педіатричні журнали педіатричних товариств
Південного конусу, обраного на VIII засіданні Російської Федерації
Editores Gramado, Бразилія, 2003 рік
країнами-членами протягом 2004 року.
Чутливість та специфічність антигліадину та антиендомізіальних антитіл, проведених у Лабораторія імунології лікарняного центру Перейри Росселла
Чутливість та специфічність тестів із використанням антигліадинових та антиендомізинових антитіл у лабораторії імунології лікарняного центру Перейри Росселя
Вінстон Лозано 1, Вірджинія Мендес два, Марія Інес Феррейра 3, Кармен Гутьєррес 4
(Ключові слова: целіакія, антигліадин та антиендомізіальні антитіла, чутливість та специфічність).
Arch Pediatr Urug 2002; 73 (2): 71-75
Целіакія представляє широкий спектр моделей: активний, мовчазний і прихований. Антигліадин та антиендомізієві антитіла корисні для відбору пацієнтів для біопсії тонкої кишки та для спостереження за пацієнтами, у яких целіакія вже діагностована. З 1994 року лабораторні методи цих антитіл проводяться в Centro Hospitalario Pereira Rossell. Мета: встановити чутливість та специфічність антигліадинових (IgG) та антиендомізієвих (IgA) антитіл, що виконуються методами імунофлюоресценції у відділі імунології Центральної лабораторії Centro Hospitalario Pereira Rossell, для діагностики целіакії у пацієнтів лікарні. Як золотий стандарт використовували біопсію тонкої кишки. Діагностика целіакії була заснована на критеріях Європейського товариства дитячої гастроентерології та харчування, встановлених в 1990 р. Антитіла проводили у 65 дітей, які годувались глютеном, 50 целіакії та 15 нецеліакійних дітей (тобто при нормальній біопсії тонкої кишки). Чутливість та специфічність становили 94% та 80% для антигліадину та 94% та 93% для антиендомізієвих антитіл відповідно. Ці висновки подібні до опублікованих великими міжнародними лабораторіями.
(Ключові слова: целіакія, антигліадин та антиендомізієві антитіла, чутливість та специфічність).
Arch Pediatr Urug 2002; 73 (2): 71-75
ВСТУП
Пацієнти з клінічно вираженою целіакією становлять лише незначну частину загальної кількості населення із цим захворюванням, причому більшість носіїв захворювання залишаються недіагностованими. Описано симптоматичне співвідношення целіакія/безсимптомне целіакію 1: 5 до 1: 7 1 .
На додаток до пацієнтів з клінічною або активною целіакією описані тиха і латентна целіакія 2. Мовчазні целіакії - це ті безсимптомні пацієнти, які страждають від глютенової ентеропатії. За даними Фергюсона 3 та інших авторів, прихований термін описує стан людини без симптомів або ознак целіакії та нормальної слизової, що їсть глютен, але яка хворіла або розвинеться пізніше, і часто має позитивні маркери захворювання. Це еволюційний діагноз, який передбачає проведення двох біопсій. Збільшення інтраепітеліальних лімфоцитів, збільшення інтраепітеліальних лімфоцитів з гамма-дельта-рецепторами, наявність антиендомізіальних антитіл, збільшення антитіл до гліадину IgM у кишечнику та 2 інших пропонуються як маркери латентності. .
З вищевикладеного виникає складність у діагностиці цього захворювання та необхідність вдосконалення неінвазивних методів скринінгу для виявлення осіб, які заслуговують на біопсію тонкої кишки. Ці дослідження застосовуються до груп ризику: родичів целіакії та осіб із незвичними симптомами або часто супутніми захворюваннями. Слід зазначити, що недіагностовані целіакії, а тому не лікуються, ризикують страждати тими ж ускладненнями, що і у хворих на целіакію із симптомами (наприклад, злоякісні пухлини), що виправдовує їх діагностику та лікування, навіть якщо вони протікають безсимптомно 2 .
Звичайними методами скринінгу є: визначення антигліадинових антитіл типу імуноглобуліну G (IgG) та імуноглобуліну A (IgA), антиретикулінових антитіл та антиендомізіальних антитіл типу IgA. Нещодавно були розроблені методики для визначення антитіл проти трансглутамінази, які були ідентифіковані як аутоантиген на рівні ендомізію 4, 5 .
Імунні реакції проти гліадину відіграють певну роль у патогенезі захворювання. Антигліадинові антитіла не є специфічними, оскільки високі рівні були виявлені при інших захворюваннях 6, 7. Для антигліадину (IgA плюс IgG) чутливість коливається від 82% до 100% 6, а специфічність - від 74% до 98% 6. Для IgG-антигліадину чутливість коливається від 55% до 100% 6, а специфічність - від 42% до 100% 6 .
Антиендомізіальні антитіла IgA є більш специфічними для виявлення целіакії; вони являють собою індуковані глютеном аутоантитіла, спрямовані проти білків матриксу сполучної тканини. Його чутливість та специфічність коливається від 91% до 100% 5 - 7 .
Антиретикулінові антитіла почали застосовуватись у нашій країні в 1979 р. 10, а антигліадинові антитіла в 1989 р. Чутливість та специфічність антигліадину при виявленні антитіл типу IgA, IgG та IgM становила 100% та 85,7% відповідно 11 .
З 1994 р. Доктор В. Лозано регулярно включає до лікарняного центру Перейри Росселя дозу антигліадину та антиендомізієвих антитіл методом імунофлюоресценції з метою діагностичного керівництва, спостереження за хворими на целіакію та як скринінговий тест у родичів целіакія.
Щоб знати чутливість та специфічність антигліадинових (IgG) та антиендомізієвих (IgA) антитіл для діагностики целіакії, визначені методом імунофлуоресценції в лабораторії імунології лікарняного центру Перейри Росселя, що застосовуються до лікарняного населення, і порівняти ці результати з результатами міжнародний.
МАТЕРІАЛ І МЕТОД
Було проведено ретроспективне дослідження. Дані були зібрані з історій та попередньо закодованих файлів 50 хворих на целіакію та 15 нецеліакійних дітей, у яких були визначені антигліадин та антиендомізієві антитіла та які пройшли біопсію тонкої кишки в гастроентерологічній поліклініці педіатричної клініки "А", протягом грудня 1994 та жовтні 1998 р. Дані були додані до файлу, підготовленого для цієї мети.
50 хворих на целіакію були у віці від 16 місяців до 14 років (медіана 4 роки 2 місяці); 17 були хлопчиками та 33 дівчатами. Діагноз целіакії був поставлений на основі критеріїв Європейського товариства дитячої гастроентерології та харчування (ESPGAN) 199012 року. Золотим стандартом діагностики целіакії було існування важкої ентеропатії в процесі біопсії тонкої кишки та поліпшення симптомів виведення глютену з раціону. Біопсію проводили за допомогою дитячої моделі капсули Ватсона на рівні кута товстої кишки дванадцятипалої кишки. Усі пацієнти поглинали глютен під час серології та біопсії. Щоб визначити ступінь ураження слизової, дотримувались критеріїв Рубіна 13, а також оцінювали відсоток інтраепітеліальних лімфоцитів 14 .
У цій групі є сім пацієнтів, які, оскільки їм менше 2 років, все ще перебувають у процесі діагностики, оскільки для остаточного підтвердження потрібно провести три біопсії.
У тих пацієнтів, які страждають на целіакію, у яких були виявлені позитивні антигліадин та антиендомізіальні антитіла, або у яких антитіла були негативними, а біопсія тонкої кишки показала важке ураження, IgA в сироватці крові визначали для виключення дефіциту IgA. Ті, хто не мають дефіциту IgA, вважалися помилковими негативними.
15 хворих на целіакію були віком від 6 місяців до 12 років (медіана 3 роки); 9 були хлопчиками та 6 дівчатами. Всі пройшли біопсію, щоб виключити целіакію (незважаючи на негативну серологію), оскільки клінічна картина передбачає захворювання, або виключити інші ентеропатії. У цих хворих існування нормальної слизової оболонки з інфільтрацією інтраепітеліальних лімфоцитів менше 30% було прийнято за золотий стандарт для виключення захворювання.
Обидва антитіла досліджували методом непрямої імунофлуоресценції. Щодо антитіл до гліадину, дослідження проводили на ділянках нирок щурів, попередньо оброблених гліадином, який зв’язується в тій самій ділянці нирки, де знаходиться ретикулін. Зразок розводять 1/40, інкубують на зрізі, і реакція розвивається з міченим флуоресцеїном ізотіоціанатом анти-людським IgG. Позитивна реакція показує перигломерулярну та перитубулярну флуоресценцію.
Дослідження антиендомізіальних антитіл проводять у відділах стравоходу мавп. Антиендомізіальні антитіла зв'язуються з відповідними антигенами, присутніми в ділянках нижньої 1/3 стравоходу мавпи. Ця реакція антиген-антитіла стає видимою за допомогою міченої флюоресцеїном ізотіоціанатом антисиворотки IgA людини. Сироватки вважаються позитивними, коли вони флуоресцирують в ендомізію навколо м’язових волокон при розведенні 1/5.
Результати оцінювались шляхом обчислення їх чутливості та специфічності. Під чутливістю розуміють частку осіб із захворюванням, які мають позитивний результат, а специфічністю є частка осіб без захворювання, які мають негативний результат.
Для антигліадинових антитіл чутливість становила 94%, а специфічність - 80%. Для антиендомізіальних антитіл чутливість становила 94%, а специфічність - 93% (табл. 1).
У групі хворих на целіакію позитивні значення антигліадину та антиендімію були отримані у 47 з 50 пацієнтів.
У трьох пацієнтів були негативні результати щодо обох антитіл.
Випадок целіакії № 18: Під час еволюції була розпочата дієта без глютену, якої він дотримувався нерегулярно; антитіла, які цього разу були позитивними, були повторені.
Випадок целиакии № 29: Після діагностики цей пацієнт виявив часткову ремісію своїх симптомів, здійснив дієтичні порушення, виконували контрольні антитіла, які продовжували бути негативними.
Випадок целіакії № 30: Він представив клінічне покращення після початку безглютенової дієти, ми не маємо контрольних антитіл.
У групі пацієнтів, які не страждають на целіакію, 12 із 15 пацієнтів мали обидва негативні антитіла.
У двох пацієнтів були позитивні антигліадин та негативні антиендомізіальні антитіла при нормальній біопсії.
Інший пацієнт (нецеліакічний випадок № 7) представив обидва позитивні антитіла. У цього пацієнта раннє введення глютену проводили через два місяці. З обома антитілами, позитивними при нормальній біопсії тонкої кишки, він супроводжувався можливістю бути потенційним целіакією. Однак антитіла повторювались, які були негативними, тож було помилково позитивним.
ОБГОВОРЕННЯ ТА КОМЕНТАРИ
Це дослідження виявило подібну чутливість до антигліадинових та антиендомізієвих антитіл та вищу специфічність до антиендомізійних антитіл. Отримані результати можна порівняти з результатами, опублікованими в міжнародних центрах дуже доброго рівня 16 - 9, 15, 16. Більшість із цих центрів досліджують антигліадинові антитіла методом ІФА, що перевершує методику імунофлуоресценції, що використовується в імунологічній лабораторії CHPR. Чудові результати, отримані в цій лабораторії, можливо, пояснюються великим досвідом роботи з непрямою технікою імунофлюоресценції, який люди, які проводили це дослідження, мають 10, 17, 18 .
Антигліадинові антитіла можуть бути позитивними при інших шлунково-кишкових захворюваннях (інфекційний гастроентерит, хвороба Крона, алергія на коров'яче молоко) 6 та при нешлунково-кишкових захворюваннях (атопічна екзема, синдром Шегрена, ревматоїдний артрит) 6. Також повідомлялося, що чутливість антигліадинових антитіл зменшується з віком 8 років. Перше спостереження може пояснити позитивні антигліадинові антитіла, виявлені у хворих на целіакію, а друге - пояснення високої чутливості антигліадинових антитіл у нашому дослідженні, оскільки більшість хворих на целіакію були маленькими дітьми (середній вік 4 роки).
Деякі автори вважають антиендомізіальні антитіла найціннішими як скринінговий тест 8, 16. Інші вважають одночасне використання обох тестів ідеальним - це позиція, до якої ми ставимось, оскільки це збільшує прогнозне значення 8. З іншого боку, оскільки у хворих на целіакію дефіцит IgA асоціюється частіше, ніж серед загальної популяції, якщо застосовувався виключно антиендімій (IgA), імуноглобулін А слід визначати у всіх негативних випадках, щоб виключити цей дефіцит та уникнути діагностичних помилок.
Визначення антиендомизиевих антитіл з використанням людської пуповини в якості субстрату проходить випробування в лабораторії імунології лікарняного центру Перейра-Россель, результати якої схожі на результати, отримані при використанні в якості субстрату для стравоходу мавп, і що має велику перевагу в тому, що його низька вартість 7, 9. Коли техніка стане доступною, витрати зменшаться, що дозволить використовувати її як тест скринінг.
У лікарняному центрі Перейри Росселя систематичне використання антигліадину та антиендомізієвих антитіл як тест на скринінг целіакії, а також для подальшого спостереження за пацієнтами, покращив діагностику та якість допомоги, яка надається хворим на целіакію та їх сім'ї.
ЛІТЕРАТУРА
1 .- Греко Л: Епідеміологія целіакії. В: Collin P, Mäki M, eds. Сьомий міжнародний симпозіум з целіакії, 5-7 вересня 1996 р., Тампере, Фінляндія. Тампере: Lege Artis 1996: 9-14. [Посилання]
два .- Мекі М, Коллін П: Целіакія. Lancet 1997; 349: 1755-9. [Посилання]
3. - Фергюсон А, Арранц Е, О'Махоні С: Клінічний та патологічний спектр целіакії - активний, тихий, прихований, потенційний. Gut 1993; 34: 150-1. [Посилання]
4 .- Troncone R, Maurano F, Rossi M, Micillo M, Greco L, Auricchio R: Антитіла IgA до тканинної трансглутамінази: ефективний діагностичний тест на целіакію. J Pediatr 1999; 134: 166-71. [Посилання]
5 .- Фазано А: Трансглютаміназа тканин: Святий Грааль для діагностики целіакії, нарешті? J Pediatr 1999; 134: 134-5. [Посилання]
6 .- Тронконе Р, Фергюсон А: Анти-гліадинові антитіла. J Pediatr Gastroenterol Nutr 1991; 12: 150-8. [Посилання]
7 .- Bottaro G, Volta U, Spina M, Rotolo N, Sciacca A, Masumeci S: Візерунок антитіл при дитячій целіакії. J Pediatr Gastroenterol Nutr 1997; 24: 559-62. [Посилання]
8 .- Каталдо F, Вентура A, Lazzari R, Balli F, Nassimbeni G, Marino V: Антиендомізієві антитіла та целіакія: вирішені та невирішені питання. Італійське багатоцентрове дослідження. Acta Paediatr Int J Paediatr 1995; 84: 1125-31. [Посилання]
9 .- Піттсілер К, Ладінсер Б: Целіакія: перевіряється новою стратегією. Acta Paediatr Suppl 1996; 412: 42-5. [Посилання]
10 .- Siri AM, Méndez V, Lozano W, Alberti M, Montano A, Santurtún P: Антиретикулінові антитіла у дітей з хронічною діареєю. Arch Pediatr Urug 1979; 50: 238-41. [Посилання]
одинадцять .- Родрігес Да Сільва М, Ясінський С, Піньєруа С, Моліна М, Салінас Г, Маггі Р: Оцінка антигліадинових антитіл при діагностиці та спостереженні за целіакією. Arch Pediatr Uruguay 1989; 60: 43-8. [Посилання]
12 .- Уолкер-Сміт JA, Гуандаліні S, Шміц J, Shmerling DH, Vizakorpi JK: Переглянуті критерії діагностики целіакії. Arch Dis Child 1990; 65: 909-11. [Посилання]
13 .- Перера Д.Р., Венштейн В.М., Рубін CE: Симпозіум з патології шлунково-кишкового тракту - Частина II. Біопсія тонкої кишки. Хам Патол. 1975; 6: 157-217. [Посилання]
14 .- Фергюсон A, Arranz E, Kingstone K, Gillett H: Пероральна толерантність, імунна експресія та ентеропатія: відповідність потенційній, пізній та тихій целіакії. У: Коллін П. Мекі М, ред. Сьомий міжнародний симпозіум з целіакії, 5-7 вересня 1996 р., Тампере, Фінляндія. Тампере: Lege Artis 1996: 53-9. [Посилання]
п’ятнадцять .- Catassi C, Rätsch IM, fabiani E, Rossini M, Bordicchia F, Candela F: Целіакія у 2000 році: дослідження айсберга. Lancet 1994; 343: 200-3. [Посилання]
16 .- Віторія Ж.К., Аррієта А, Астігаррага І, Гарсія-Масдевалл Д, Родрігес Соріано Ж: Використання серологічних маркерів як скринінгового тесту у членів сім'ї пацієнтів з целіакією. J педіатр Gastroenterol Nutr 1994; 19: 304-309. 1994; 19: 304-9. [Посилання]
17 .- Мендес V, Сірі А.М., Лозано W, Сантуртун П, Монтано А, Альберті М: Імунопатологічне дослідження біоптатів кишечника дітей з целіакією. Arch Pediatr Urug 1979; 50: 96-9. [Посилання]
18 .- Siri AM, Méndez V, Lozano W, De Anda G, Montano A, Vignale R: Імунопатологія здорової шкіри дітей з целіакією. Arch Pediatr Urug 1984; 55: 145-7. [Посилання]
1. Начальник служби. MSP. Лабораторія дитячої патології. Лікарняний центр Перейри Росселя. Монтевідео, Уругвай.
два. Дитячий клінічний доцент. Центральна лабораторія, секція імунології. Дитяча клініка. Монтевідео, Уругвай.
3. Педіатр. Колишня резидент дитячої клініки. Центральна лабораторія, секція імунології. Дитяча клініка. Монтевідео, Уругвай.
Чотири. Дитячий патолог. Начальник служби. MSP. Лабораторія дитячої патології. Лікарняний центр Перейри Росселя. Монтевідео, Уругвай.
Весь вміст цього журналу, крім випадків, коли він ідентифікований, підпадає під ліцензію Creative Commons
Мер Едуардо Кастільо Веласко 1838
Сунюа, Сантьяго
Графа 593-11
Тел .: (56-2) 2237 1598 -2237 9757
Факс: (56-2) 2238 0046