Імунофенотипування за допомогою проточної цитометрії зайняло своє місце в наборі діагностичних засобів протягом останнього десятиліття.

плазматичних клітин

У міру вдосконалення обладнання та розширення асортименту антитіл та фторхромів імунофенотипування клітин стало більш точним, що робило ідентифікацію аномальних популяцій клітин більш точним. Діагностичні критерії для осіб із гематологічними захворюваннями також були вдосконалені протягом останніх десяти років. Класифікація Всесвітньої організації охорони здоров’я (ВООЗ) щодо пухлин гемопоетичної та лімфатичної систем використовує мультипараметричний підхід у діагностиці, заснований на аналізі морфологічних, фенотипових та генотипових характеристик кожного захворювання. Тим не менше, це недостатньо економічно ефективно для проведення набору тестів на кожному зразку.

Але потім у яких випадках необхідно вимагати проточної цитометрії? У 2006 році зацікавлені міжнародні експерти зібрались у лікарні Бетесда в США, щоб сформулювати рекомендації на основі консенсусу для проточних цитометричних досліджень. На відміну від попередніх консенсусних конференцій, де були розглянуті реагенти, необхідні для дослідження конкретних захворювань, група Bethesda розглядала питання проточної цитометрії на основі більш клінічного підходу, заснованого на клінічній картині. Було домовлено, що проточне цитометричне імунофенотипування потрібно в таких клінічних ситуаціях: цитопенії (особливо біцитопенія та панцитопенія), підвищений вміст лейкоцитів (включаючи лімфоцитоз, моноцитоз та еозинофілію); наявність атипових клітин або бластів у периферичній крові, кістковому мозку або рідинах тіла; плазмоцитоз або моноклональна гаммапатія; і органомегалія та аномальні продукти тканини.

У перелічених клінічних ситуаціях імунофенотипування за допомогою проточної цитометрії може слугувати чутливим скринінговим методом для виявлення гематологічних злоякісних пухлин, а також може допомогти виключити захворювання. Група Bethesda погодилася провести проточну цитометрію зазвичай не вказується в таких ситуаціях: зріла проліферація нейтрофільних клітин, поліклональна гіпергамаглобулінемія, поліцитемія, тромбоцитоз та базофілія. Крім того, експерти погодились, що проточна цитометрія є корисним інструментом для визначення стадії раніше діагностованих пухлин крові та лімфатичних вузлів, моніторингу терапевтичної відповіді (включаючи виявлення мінімального залишкового захворювання [MRD]), рецидиву або прогресування. Діагностика інтеркурентних гематологічних злоякісних пухлин, таких як як терапевтичний мієлодиспластичний синдром (МДС).

Резюме розглядає використання фенотипування проточної цитометрії для діагностики гематологічних злоякісних утворень з повсякденної практики, включаючи те, як отриману інформацію можна використовувати для вибору додаткових методів діагностики.

Проточне цитометричне фенотипування у діагностиці та спостереженні за гематологічними пухлинами

При розслідуванні злоякісних пухлин кровотворення нам потрібно виконати наведені нижче дії: 1) ідентифікація клітин з різних клітинних ліній та визначення того, є вони зрілими або незрілими клітинами (наприклад, виявлення зрілих В-лімфоїдних клітин та мієлобластів); 2) ідентифікація аномальних клітин на основі істотно аномальної експресії антигену; 3) детальне документування фенотипу аномальних популяцій клітин (тобто реєстрація наявності антигенів чи ні) та документування того, чи зменшилась чи зросла інтенсивність фарбування міченими фторхромом антитілами; 4) оцінка того, чи є наявна інформація діагностичною для конкретного суб’єкта захворювання, і, якщо ні, складання списку можливих суб’єктів, доповненого запропонованими методами тестування, які можуть мати діагностичне значення (наприклад, імуногістохімія, звичайне цитогенетичне тестування, флуоресцентна гібридизація in situ [ FISH] та молекулярно-діагностичні тести); та 5) вказівку на імунофенотип, який може мати додаткове прогностичне значення, включаючи виявлення потенційних цілей для потенційних цільових методів лікування.

Зрілі лімфоїдні новоутворення

До цієї групи належать хронічний лейкоз, лімфоїдні пухлини та неходжкінські лімфоми. Ідентифікація цієї групи захворювань базується не тільки на імунофенотипі, подібному до нормальних зрілих лімфоїдних клітин (тобто поверхневих імуноглобулінів на зрілих В-клітинах), але також на відсутності антигенних характеристик, характерних для незрілих (наприклад, експресія TdT, CD34, погане фарбування для CD45).

У зрілих В-клітинних лімфоїдних неоплазіях проточна цитометрія може бути використана для ідентифікації експресії мішеней, спрямованих на потенційну терапію спрямованими антитілами, а також надавати додаткову прогностичну інформацію, таку як експресія CD38 та ZAP-70 при хронічному лімфолейкозі/випадки мала лімфоцитарна лімфома (ХЛЛ/СЛЛ). Проточна цитометрія як метод виявлення мінімальних залишкових захворювань при спостереженні за терапією.

Зрілі Т- та NK-клітинні лімфоїдні неоплазії

Проточне цитометричне імунофенотипування може допомогти в діагностиці та класифікації зрілих Т- і NK-клітинних лімфоїдних пухлин. Однак часто важче ідентифікувати Т і NK-клітини з аномальними фенотипами, ніж ті, що мають аномально зрілі В-клітини. Тому проточні цитометричні дослідження, як правило, є лише частиною дослідження пухлин Т і NK-клітин. Після діагностики Т- та NK-клітинних пухлин проточні цитометричні дослідження можуть допомогти визначити потенційні мішені для цілеспрямованої терапії.

Аномалії плазматичних клітин

Порушення плазматичних клітин часто діагностують на основі підвищеного рівня гамма-глобуліну в сироватці крові або сечі; їх дві групи - це поліклональна реактивна проліферація та моноклональні гаммапатії. Останні можна додатково поділити. Діагноз аномалій плазматичних клітин грунтується на таких станах: виявлення проліферації плазматичних клітин (більше 10% клітин кісткового мозку); виявлення аномального фенотипу та/або клональності; і подальша класифікація на основі морфологічних, лабораторних, рентгенологічних та інших клінічних характеристик. Проточне цитометричне фенотипування є корисним інструментом для виявлення аномальних плазматичних клітин та розрізнення лімфоїдних та плазмоклітинних неоплазій. Крім того, проточна цитометрія може надати додаткову прогностичну інформацію.

Проточна цитометрія також може відігравати певну роль у діагностиці бластних новоутворень, дозрівання мієлоїдних та моноцитарних новоутворень, мастоцитарних новоутворень та пароксизмальної гемоглобінурії, а також у виявленні мінімальних залишкових захворювань.

(Джерело: Craig FE, Foon KA. Проточне цитометричне імунофенотипування для гематологічних новоутворень. Кров. 2008; 111: 3941−3967.)