Введення вітаміну С та його вплив на обрані характеристики еритроцитів людини

Автори: Юрай Крайчір1, Катаріна Кучерова1, Яна Лацекова1, RNDr. Terézia Kalnovičová, CSc.2, MUDr. RNDr. Анжеліка Пузсерова, доктор філософії 3, RNDr. Любомира Тотова, доктор філософії 4, MUDr. Мгр. Рудольф Драбек5, доктор медицини Яна Радошинська, доктор філософії, 5,6

1 Медичний факультет Університету Коменського в Братиславі
2 І. Кафедра неврології медичного факультету Університету Коменського та ООН у Братиславі
3 Інститут нормальної та патологічної фізіології Словацької академії наук у Братиславі
4 Інститут молекулярної біомедицини медичного факультету Університету Коменського в Братиславі
5 Інститут фізіології медичного факультету Університету Коменського в Братиславі
6 Інститут досліджень серця SAS у Братиславі

Вступ

Здатність еритроцитів (еритроцитів) змінювати свою форму - деформованість - важлива для якості мікроциркуляції та достатнього надходження кисню до тканин, оскільки еритроцити діаметром 7,2 мкм повинні проходити через капіляри з внутрішнім діаметром близько 3-4 мкм. Ця властивість суттєво впливає на життєздатність еритроцитів, кровотік та гемодинаміку як таку. Загальновизнано, що в'язкість цільної крові також залежить від деформованості еритроцитів. Зниження деформації еритроцитів може призвести до проблем із кровопостачанням тканин, їх оксигенацією і, як наслідок, пошкодженням органів (1).

Виробництво оксиду азоту (NO) є важливим фактором, що впливає на деформативність еритроцитів. Цей важливий судинорозширювальний засіб, що розширює судини, складається не тільки з судинних клітин, але і з самих еритроцитів. Інгібування вироблення NO призводить до пошкодження деформації еритроцитів, що нормалізується донорами NO (2).

Вітамін С - важлива, водорозчинна речовина, яка бере участь у гідроксилюванні проліну та лізину в організмі в колагені, синтезі карнітину, метаболізмі тирозину, але перш за все це дуже важливий антиоксидант. Відомі роботи, які вивчали вплив вітаміну С на деформацію еритроцитів на моделях тварин, відповідно. в умовах in vitro (за винятком живого тіла) (3, 4). Його вплив на деформацію еритроцитів та гемологію крові у людини (в умовах in vivo) невідомий. Завдяки цьому, в нашому експерименті ми зосередилися на впливі 3-тижневого прийому вітаміну С на деформацію еритроцитів та вироблення еритроцитів NO, одночасно контролюючи вибрані параметри антиоксидантного статусу та окисного стресу у здорових молодих людей.

Матеріал і методи

Учасники дослідження обох статей були у віці 20-33 років (n = 20), у яких венозна кров забиралася в пробірки, що містять антикоагулянт ЕДТА (Сарштедт) на початку експерименту та через 3 тижні прийому L-форми вітаміну С ( 1000 мг/день, NATURAL, sro, Словацька Республіка). Цілу кров використовували для визначення продукції NO в еритроцитах. Після центрифугування залишкової крові (850 г, 10 хв, 4 ° С) плазму збирали для біохімічного аналізу вибраних параметрів антиоксидантного статусу та окисного стресу. Гранули еритроцитів промивали 3 рази сольовим розчином, отримуючи фракцію чистих еритроцитів, які використовували для вимірювання їх деформованості.

Ступінь окисного пошкодження визначали шляхом вимірювання маркерів окисного пошкодження (TBARS, AGEs, фруктозамін, AOPP). Ці маркери збільшуються за рахунок окисного стресу, при цьому окислювальний стрес є станом, при якому баланс в прооксидантно-антиоксидантній системі порушується, нахиляючи баланс на користь прооксидантів (відносне переважання вільних радикалів над антиоксидантною здатністю). Відомо, що окислювальний стрес може призвести до пошкодження біологічних структур, пошкодження ліпідів, білків, вуглеводів та нуклеїнових кислот (включаючи ДНК). Маркери перекисного окислення ліпідів (реакційноздатні речовини тіобарбітурової кислоти - TBARS) вимірювали спектрофотометрично. Кінцеві продукти вдосконаленого глікірування (AGE) та фруктозамін визначали за маркерами карбонільного стресу. Продукти розвиненого окисного білка (AOPP) вимірювали як маркер пошкодження окислювального білка. Для отримання інформації про статус антиоксидантів визначали загальну антиоксидантну здатність (TAC) та плазмовий феризол, що знижує силу антиоксидантів (FRAP). Усі вимірювання проводились згідно з попередньо опублікованими (5).

Деформативність еритроцитів визначали методом фільтрації і представляють як відношення кількості еритроцитів, що пройшли через фільтр з розміром пор 5 мкм, від загальної кількості еритроцитів до фільтрації (6). Виробництво NO в еритроцитах візуалізували за допомогою флуоресцентного зонда DAF-2 DA (діамінофлуоресцеїндіацетат), а кількісну оцінку сигналу флуоресценції оцінювали в ImageJ (6).

Усі результати представлені як середнє значення ± стандартне відхилення. Ми перевірили нормальність даних за допомогою тесту Шапіро-Вілька. Відмінності в даних до і після введення вітаміну С аналізували парним t-тестом. Ми вважали дані зі значенням р менше 0,05 статистично значущими.

Дослідження було оцінено та схвалено Комітетом з етики медичного факультету Карлового університету та Університетської лікарні Братислави 15 лютого 2016 р.

Результати

Деформаційність еритроцитів статистично достовірно зросла через 3 тижні прийому вітаміну С (графік 1). Під час вимірювання вироблення NO в еритроцитах також спостерігалося збільшення вітаміну С після введення вітаміну С (графік №2). Серед шести маркерів антиоксидантного статусу та окисного стресу ми спостерігали значні зміни лише за допомогою фруктозаміну, концентрація якого у плазмі крові зросла після введення вітаміну С.

Коменського Братиславі

Графік 1: Деформація еритроцитів. Статистичне значення: * p Слідуйте за нами
на соціальних
мережа facebook