реферат

Генетичні та клінічні дані свідчать про те, що катехол О-метилтрансфераза (КОМТ) бере участь у декількох складних психічних станах. Недавні дослідження описували зв'язок між поліморфізмом Val158Met COMT та панічним розладом. Подальші останні дослідження дають докази того, що в гені COMT або поблизу нього є інші локуси, які можуть сприяти сприйнятливості до панічного розладу. Для подальшої оцінки ефекту поліморфізму Val158Met COMT на панічне розлад ми генотипували цей маркер у кодуючій області гена COMT та ще два варіанти (rs737865 та rs165599) у регіоні 5 Канади, відповідно. вибірки: 121 основна сім'я та 89 випадків з відповідними контролями. У нуклеарних сім'ях спостерігався значний дисбаланс передачі для алену валіну між поліморфізмом Val158Met COMT та алелями панічного розладу (p

поліморфізму

Карта генів COMT (29 kb) з відносними положеннями SNP (не в масштабі).

Повнорозмірне зображення

Оскільки ген COMT є сильним кандидатом на ген PD, ми перевірили гіпотезу про можливу асоціацію поліморфізмів COMT з PD у двох незалежних канадських зразках.

МЕТОД

предметів

генотипування

Геномну ДНК екстрагували стандартними методами з високим вмістом солі. Три однонуклеотидні поліморфізми гена COMT, rs737865, rs4820 та rs165599, генотипували за допомогою аналізу Assays-by-Design® (ABI Applied Biosystems, Фостер-Сіті, США). ПЛР-ампліфікацію та алельну дискримінацію проводили на системі виявлення послідовності ABI Prism 7000 (ABI Corporation, США) з використанням специфічних для алелей флуоресцентно мічених зондів.

статистика

Вибіркову контрольну вибірку аналізували із статистикою χ 2 та рівнем значимості, встановленим на рівні p = 0,05. Ми використовували корекцію Бонферроні для тесту χ 2, щоб скорегувати багаторазове тестування, і значення p вважали статистично значущими для p = 0,02 у група пацієнтів. -контроль; для порівняння пацієнтів із пацієнтами чоловічої статі ми встановили рівень значимості р = 0,01. Точний тест Фішера застосовували, коли частота будь-якої клітини в таблиці була менше п'яти. Для аналізу нуклеарних сімей використовували тест на дисбаланс передачі (TDT) (Spielman et al., 1993), а також тест асоціації сімей (FBAT) (Laird et al., 2000). Це було використано для включення інших родичів. Розширений тест на нерівноважну передачу (eTDT) був використаний для аналізу передачі інфекції між матерями та батьками (Sham and Curtis, 1995). Для оцінки сумарного ефекту алену валіну у двох незалежних зразках ядерних сімейств та контрольних випадків ми перетворили ці два значення χ 2 у відповідні z-бали, додали z-бали та використали метод зворотної норми для отримання загальне значення z (Hedges et al, 1985). Аналіз асоціації та оцінка частоти гаплотипів проводили з використанням COCAPHASE 2.35 для випадку та контрольної проби та TDTPHASE для малих сімей (Dudbridge, 2003).

РЕЗУЛЬТАТИ

Розподіл генотипів суттєво не відрізнявся від прогнозованого рівновагою Харді-Вайнберга серед пацієнтів та контрольних груп або в підгрупах.

Вимірювання міжмаркерного балансу нерівноваги (LD), позначеного як D ', розраховували для обох зразків: у вибірці малої родини для rs787365 та rs4680 D' = 0,22, для rs787365 та rs165599 D '= 0,27 та для rs4680 та rs165599 D = 0,01; у випадку - контрольний зразок rs787365 та rs4680 D ′ = 0, 72, для rs787365 та rs165599 D ′ = 0, 23 та для rs4680 та rs165599 D ′ = 0, 62.

Результати аналізу асоціації узагальнені в таблиці 1. Частота контрольних алелів для варіанту Val158Met узгоджується з останніми висновками європейських американців (Palmatier et al, 2004). Асоціація спостерігалась у розподілі генотипу та алелю із відносним надлишком алену валіну у пацієнтів із ПД (кількість генотипів: 2 = 9, 92, df = 2, p = 0,007; кількість алелів: 2 = 7, 71, df = 1, p = 0,005). За допомогою аналізу підгруп ми виявили, що цей ефект був головним чином спричинений групою з 59 пацієнтів із ПД (кількість генотипів: p = 0,014; кількість алелів: 2 = 6,94, df = 1, p = 0,008). Суттєвої різниці між пацієнтами чоловічої статі (n = 30) та здоровими контролями не було. У хворих на ПД з агорафобією (n = 68) було встановлено, що алельний валін суттєво асоціюється із захворюванням (кількість генотипів: p = 0,01) (дані не наведені). Аналіз TDT (таблиця 2) виявив частішу передачу високоактивного алену валіну (58 проти 28) від батьків-гетерозиготних хворих на ПД, надавши докази значної алельної асоціації (χ 2 = 10, 47, df = 1, p = 0,005 ). Крім того, аналіз FBAT показав зв'язок між панічним розладом та поліморфізмом Val158Met (Z = 2,853, p = 0,004; дані не наведені в таблиці 2).

Стіл в натуральну величину

Стіл в натуральну величину

Поєднання плям двох незалежних зразків забезпечує вищу значимість (z = 4, 251, p = 0, 00002 (подвійне)).

Для маркерів rs165599 та rs737865 не було знайдено значущих результатів ні в одній з проб (таблиці 1 та 2).

Аналіз передачі від матері та батьків не показав значущих результатів для маркерів rs165599 та rs737865, тоді як передача від матері та батьків була значущою для поліморфізму Val158Met (передача від матері: p = 0,019; передача від батьків p = 0 0006).

Результати аналізу гаплотипів узагальнені в таблиці 3. У випадку контрольної проби два гаплотипи виявляють значну зв'язок з ПД. У вибірці нуклеарних сімей ці два гаплотипи не показали значних результатів, тоді як інші гаплотипи стали значущими.

Стіл в натуральну величину

ОБГОВОРЕННЯ

Поліморфізм Val158Met гена COMT широко вивчався при різних розладах та рисах особистості. Крім того, кілька досліджень виявили зв'язок з PD (Domschke et al., 2004; Hamilton et al., 2002; Woo et al., 2002). Тому наша апріорна гіпотеза полягала в тому, що цей поліморфізм пов’язаний з ПД. Недавні дослідження показують, що інші локуси в гені COMT або поблизу нього можуть сприяти етіопатогенезу PD (Hamilton et al, 2002). Повідомляється, що гаплотипи асоціюються із шизофренією (Palmatier et al., 2004; Shifman et al., 2002) і, схоже, впливають на чутливість властивостей, пов’язаних з тривогою (Stein et al, 2005). Отже, на додаток до поліморфізму Val158Met, ми розглянули два маркери гена COMT, відібрані у вищезазначених дослідженнях, які можуть бути пов’язані з PD (Shifman et al, 2002; Stein et al., 2005).

Вважається, що високоактивний алель валіну виводить синаптичні дофаміни з більшою швидкістю, тим самим ефективно знижуючи фронтальну активність дофаміну. Є дані, що алельний валін поліморфізму Val158Met COMT перешкоджає префронтальній функції здорових людей (Malhotra et al, 2002). Суб’єкти PD виявляють підвищену префронтальну чутливість порівняно зі здоровими добровольцями у дослідженні fMRI із словами, пов’язаними з ризиком (Maddock et al, 2003). Недоліки в обробці інформації також відіграють ключову роль у етіопатогенезі ПД (Ludewig et al, 2005). Таким чином, генетичні варіації КОМТ можуть впливати на префронтальні кортикальні процеси, які мають значення не тільки для здорових людей, але й для симптоматики ПД.

На відміну від наших висновків у варіанті Val158Met, результати є двома азіатськими дослідженнями (Ohara et al, 1998; Woo et al, 2004). Охара та ін. (1998) обстежили вибірку пацієнтів з тривожним розладом (n = 108), включаючи невелику кількість пацієнтів з PD (n = 29), і не виявили жодної асоціації. Ця невелика вибірка хворих на БП мала дуже мало сили виявляти величини ефектів КОМТ, що спостерігались у нашому дослідженні, а також у Домшке та ін. (2004) та Hamilton et al. (2002). Крім того, незрозуміло, чи проводились органи контролю за статтю та віком, оскільки автори не надавали цієї інформації. Ву та ін. (2004) виявили номінально значущу асоціацію з менш активним алелем метіоніну в клінічно охарактеризованій корейській пробі PD (n = 178). Пояснення цих різних результатів може бути різного етнічного походження з низькою частотою менш активних алелів метіоніну в азіатському населенні.

Іншим важливим питанням, яке слід порушити, є специфіка: здається очевидним, що взаємозв'язок між поліморфізмом Val158Met та психопатологією не є специфічним для PD. Асоціація виявлена ​​також при шизофренії (Goldberg et al., 2003; Shifman et al., 2002), великій депресії (Massat et al, 2005), швидкому циклі біполярного розладу (Kirov et al., 1998) та особливостях особистості пов'язані з тривогою (Stein et al., 2005). Це може припустити, що залучення варіантів COMT було б "загальним дефіцитом", що призводить до кількох синдромів, замість "специфічного дефіциту", пов'язаного з PD або будь-яким іншим специфічним синдромом. На відміну від очевидних загальних ефектів КОМТ, роль гена рецептора CCK-B, мабуть, мається на увазі більш специфічно для PD (Hösing et al., 2004; Kennedy et al., 1999). Існує безліч доказів того, що холецистокінін і рецептор CCK-B відіграють важливу роль у нейробіології БД, як це описано в дослідженнях на тваринах, що вимагають досліджень та генетичних досліджень (Bourin and Dailly, 2004; Bradwejn and Koszycki, 2001). Оскільки варіант COMT, а також повторення рецептора CCK-B у промоторній області асоційовані з PD у кавказців, виникає питання про те, чи PD є результатом комбінації загальних дефіцитів, таких як COMT, або в поєднанні з PDA . специфічні, наприклад холецистокінін.

Одним обмеженням цього дослідження є невелика кількість в обох зразках. Однак головною перевагою нашого дослідження є те, що ми повторили наші результати у двох незалежних вибірках, що є вагомим показником надійності результатів.

Нарешті, незважаючи на звіти про реплікацію, COMT Val158Met може не бути клінічно значущим поліморфізмом хромосоми 22q11.2, а може бути в ЛД з іншим близьким маркером, який бере участь у ризику розвитку ПД.

Враховуючи, що роль варіанту COMT Val158Met у PD зараз повідомляється в чотирьох дослідженнях, включаючи поточне дослідження, з достатньою силою (Domschke et al., 2004; Hamilton et al., 2002; Woo et al, 2004) Дослідження гена COMT та сусідніх маркерів на 22-й хромосомі є виправданим для посилення нашого розуміння генетичної основи PD. Якщо додатково буде показано участь COMT, тоді можуть бути виявлені нові цілі для розробки ліків, що призведе до вдосконалення фармакологічного лікування панічного розладу.

Дякую

Це дослідження було підтримане грантом Канадського інституту досліджень здоров’я (CIHR 44085) та грантом Медичного факультету Університету Мюнстера в Німеччині, МВФ (DE 520207). Ми хотіли б подякувати Роуз-Марі Мюллер Р.Н., Івану Фрумінському, BscN та Марії Піцці, BscN за допомогу у дослідженні та Мері Смірнів за допомогу у підготовці рукопису. Доктор Дж. Л. Кеннеді є консультантом Glaxo Smith Kline з червня 2004 р. Доктор Дж. Бредвейн отримує фінансування від Pfizer для проведення клінічних випробувань та від Servier для навчання не з продуктів.